胶体金法与酶联免疫吸附测定法检测猪瘟抗体的比较

为比较胶体金法与ELISA法检测猪瘟抗体的符合率,以了解胶体金法的特异性与敏感度,用胶体金法和ELISA法平行检测受检猪血清标本猪瘟抗体滴度.结果表明,胶体金法和ELISA法检测猪瘟抗体的结果符合率为86.6％,胶体金法较ELISA法敏感度、特异度低,用胶体金法检测猪瘟抗体滴度存在一定程度的漏检率及误诊率,只能初步筛查猪瘟抗体.具有一定技术力量的县级兽医实验室使用ELISA法检测猪血样的猪瘟抗体滴度更为合适,对于胶体金法筛查阴性的猪血样,建议用ELISA法复检以防漏检.     

ELISA和胶体金法在猪瘟病毒检测中的应用

为探讨胶体金检测技术和ELISA在猪瘟病毒检测中的应用,通过对西藏林芝地区某县采集的92个疑似猪瘟样品进行免疫胶体金免疫层析法与ELISA法检测猪瘟抗体和抗原,比较两法检测结果的符合率。结果表明,猪瘟胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率为100%,ELISA法检测的阳性符合率为95%以上。猪瘟的胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率较高,同时该结果与ELISA的抗原和抗体检测阳性符合率高,说明使用猪瘟疫苗进行免疫在西藏林芝地区某县可以取得95%以上的免疫效果。这两种方法操作方便、快速,适合于临床快速检测和疫病普查中高通量样品的筛查。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

采用不同血清学检测方法对猪蓝耳病免疫效果调查

本文采用猪蓝耳病通用型抗体ELISA检测法和猪蓝耳病通用型抗体快速检测卡检测法(胶体金法),对180份已免高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征苗的猪血样进行免疫抗体检测。结果显示,采用ELISA检测法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为82.2%;用胶体金法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为60.6%。二者相比,阳性符合率高(100%)即胶体金法抗体滴度大于1∶40以上者在ELISA法检测中为阳性;阴性符合率低即胶体金法抗体滴度大于1∶20小于1∶40之间者在ELISA法检测中也为阳性,只有小于1∶20者2种方法检测结果都为阴性。胶体金法简单,快速,易操作,可用于乡镇畜牧兽医站或养殖场的自行检测。     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色，阳性者出现红色斑点，整个试验过程仅需5min即可判断结果；与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应；纯化PRRSV抗原的最低检测量为0．0553mg／mL，即55．3ng／点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测，两种方法的符合率达98％。     

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合，采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的“猪伪狂犬病抗体免疫胶体金快速检测试纸法”，用该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒，同时对16纷猪血液或血清进行抗体水平检测，符合率达100％。同时使用金标法对100份猪血液和对应血清进行检测，结果也相同。试验结果显示．金标法与ELISA一样，具有微量、特异、准确等优点，且操作简易，而金标法不需要任何仪器，检测时间短．结果直观，容易判定，适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

荧光免疫层析法和ELISA方法检测猪瘟抗体相关性的探讨

为了探讨荧光免疫层析法和ELISA方法检测猪瘟抗体的相关性,在屠宰场采集了64份猪血清,分别采用荧光免疫层析法和ELISA方法进行检测,结果为荧光免疫层析法检测抗体阳性率为68.75%,ELISA检测抗体阳性率为57.81%,有55份样品检测结果相符,符合率为85.94%。结果表明,荧光纳米免疫层析法操作简单,试验时间短适合基层大规模监测,但仍可能存在假阴性或假阳性的问题。     

胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪瘟抗体的比对试验

胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%,ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%,两者符合率为99.07%;胶体金免疫层析试纸条强阳性率为86.73%,ELISA检测猪瘟抗体阻断率≥60%为89.38%,检测线显色强度与抗体水平呈正相关。     

应用三种方法筛选猪瘟抗体阴性猪的比较试验

为了寻找筛选猪瘟抗体阴性猪更简便的方法,本试验应用猪瘟中和试验(SN)、阻断ELISA和正向间接血凝(IHA)三种方法分别对170份未经猪瘟活疫苗免疫的仔猪血清进行猪瘟抗体检测。结果显示,SN、ELISA和IHA检测出的猪瘟阴性血清分别为144份、150份和131份,表明三种检测方法有较好的符合率,其中SN与ELISA的检测符合率为90.59%,SN与IHA的检测符合率为82.94%,而ELISA法与另两种方法比较阴性符合率最高。本结果表明,ELISA法具有较高的敏感性,适合应用于猪瘟活疫苗安全检验抗体阴性猪的筛选。     

应用正向间接血凝（IHA）与阻断ELISA方法检测猪瘟抗体的比较试验

目前国内在对猪群进行猪瘟免疫效果评估时,多采用CSF正向IHA方法与CSFV抗体ELISA方法,但这两种方法在检测CSF抗体存在一定差异。本试验分别运用正向间接血凝（IHA）与阻断ELISA方法检测550份猪血清中猪瘟抗体水平。     

应用Kappa法检验IHA和ELISA在检测猪瘟抗体中的一致性

[目的]比较IHA和ELISA 2种基层使用较广泛的猪瘟抗体检测试剂盒检测结果的一致性。[方法]用产品A(IHA)和产品B(ELISA)对237份猪血清进行抗体检测,分别计算阳性率、阳性一致性、阴性一致性、符合率,并进行Kappa检验。[结果]产品B检测的阳性率(73.8%)高于A(67.1%),且有统计学意义(p<0.01)。2种试剂盒共同检出128份猪瘟抗体阳性和31份阴性,阳性一致性为80.5%(95%置信区间:74.3%-86.7%),阴性一致性为39.7%(95%置信区间:28.9%-50.6%),符合率67.1%(95%置信区间:61.1%-73.1%);Kappa值为0.214(95%置信区间:0.088-0.339)。[结论]2种试剂盒的检测结果阳性率有差异,结果一致性强度为弱。     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

ELISA间接法检测猪瘟抗体的研究

本文介绍了以中国株猪瘟兔化弱毒乳兔组织冻干疫苗为原料提取猪瘟抗原,以酶标葡萄球菌蛋白 A(PPA)代替酶标抗猪IgG,建立ELISA间接法检测猪瘟抗体的方法。该方法与血清兔体中和试验对73份猪血清进行检测猪瘟抗体的同步试验,结果基本一致( P >0.05)。敏感性、特异性及准确性分别为100％、92.16％及94.52％。用该方法对1528头份猪血清及36头份猪扁桃体浸出液进行猪瘟抗体测定,结果稳定,重复性好。     

筛选猪瘟抗体阴性猪检测方法的比较

评价ELISA法用于筛选猪瘟抗体阴性猪的可行性,分别采用两种商品化猪瘟抗体ELISA检测试剂盒检测了61份猪血清样品,并与兔体中和试验方法进行了比较。兔体中和试验法检测出4份阳性、2份可疑、55份阴性,而两种ELISA试剂盒均检测出6份阳性、55份阴性;两种ELISA方法与兔体中和试验检测结果阴性符合率均为100%（55/55）。结果表明,ELISA法更加敏感,可以替代兔体中和试验方法用于筛选猪瘟抗体阴性猪。     

3种国产布病抗体检测试剂盒的效果评价

为了比较国产布鲁菌病间接ELISA抗体检测试剂盒、竞争ELISA抗体检测试剂盒和胶体金试纸条的检测效果,通过对已知阴阳性血清样品的检测,比较了上述3种检测方法的敏感性和特异性。进一步采用临床血清样品比较了3种检测方法与虎红平板凝集试验(RBT)的检测效果,并采用补体结合试验(CFT)对结果进行了复核。结果显示,间接ELISA、竞争ELISA和胶体金试纸条的敏感性分别为96.67%,100.00%和98.33%,3种检测方法的特异性分别为98.33%,93.33%和93.33%。对300份临床样品的检测结果显示,4种检测方法共同检出的阳性样本为27份,阴性样品为210份,整体符合率为79%。通过CFT对63份不同方法检验结果有差异的样本进行确诊,结果表明RBT与CFT的符合率最低,仅为3.17%;间接ELISA与CFT的符合率最高,为98.41%;竞争ELISA和胶体金试纸条的符合率分别为87.30%,85.71%。结果表明,间接ELISA、竞争ELISA和胶体金试纸条具有良好的特异性和敏感性,能够满足布病临床检测需求;RBT对临床样本的检测存在较高比例假阳性和假阴性。     

猪瘟抗体阴性猪筛选方法的比较

评价ELISA法用于筛选猪瘟抗体阴性猪的可行性,分别采用两种商品化猪瘟抗体ELISA检测试剂盒检测了61份猪血清样品,并与兔体中和试验方法进行了比较.兔体中和试验法检测出4份阳性、2份可疑、55份阴性,而两种ELISA试剂盒均检测出6份阳性、55份阴性;两种ELISA方法与兔体中和试验检测结果阴性符合率均为100%(55/55).结果表明,ELISA法更加敏感,可以替代兔体中和试验方法用于筛选猪瘟抗体阴性猪.     

猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为探究猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用效果,对181份未免疫猪瘟疫苗、71份已免疫猪瘟疫苗的临床猪血清,采用本研究试纸条和北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒分别进行抗体检测,对4头存在母源抗体的不同免疫时间仔猪血清、不同阶段的猪血清,采用本研究试纸条进行抗体检测,并对检测结果进行分析统计。结果显示,本研究试纸条与北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒的阴性符合率为100%,阳性符合率为95.77%,经Kappa检验两者一致性良好;初生仔猪首免后,猪瘟抗体滴度有所下降,30 d后加强免疫,抗体滴度逐渐升高,试纸条检测结果与猪瘟抗体衰减变化过程呈正相关;不同阶段猪群的猪瘟抗体阳性率均为100%,抗体平均值较高,离散度较整齐,与规模化养猪场合理免疫程序相吻合。综合表明,本试纸条的临床应用效果较好,可用于实时监控猪群的猪瘟抗体变化,适用于基层规模化猪场的猪瘟抗体快速检测。     

用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区，在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原，组成免疫金标试纸条，根据胶体金免疫层析原理，用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测，结果符合率达100%。试验结果表明，本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量，而且检测时间短、直观，结果容易判定，适用于大面积猪瘟抗体监测普查。