冷冻保存对藏獒犬精子超微结构的影响

为观察藏獒犬精子冷冻保存后超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的犬精子制备扫描电镜和透射电镜标本.结果表明:超低温保存造成精子结构不同程度的损伤,主要表现为精子头颈部发生部分或全部断裂,质膜消失,顶体外膜泡状化,环状沟模糊、消失或呈锯齿状,颈部肿胀,线粒体结构模糊.     

犬精液冷冻稀释液配方优化试验

<正>犬是最早被驯化的一个物种,人们根据需要培育了许多不同的犬品种。犬业在国内外已经发展成为重要的产业,犬精液冷冻保存技术在犬种资源的保护、品种选育和加快良种进程等方面都能发挥关键作用。发达国家对犬的冷冻精液研究与推广启动早、发展快,而且制定了冷冻精液的采集、运输和贮存等操作规则,并由专门组织或机构进行负责。在我国,随着养犬业越来越受到人们的青睐,犬的冷冻保存技术也已逐渐被人们熟识,在10多年当     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

犬精液超低温冷冻保存液筛选试验

为了提高犬的繁殖力,建立完善的犬人工授精体系和保存优秀的犬精子,本研究对8只犬进行了采精和精液的超低温冷冻保存试验,并对犬的精液超低温冷冻保存液进行了系统的筛选。结果表明,渗透压450mOsm/L的配方V(葡萄糖1.98g、蔗糖3.42g、柠檬酸钠0.59g、谷氨酸钠0.75g、三羟甲基氨基甲烷1.21g、维生素B_610mL、维生素B_(12)10mL、卵黄20mL和甘油8mL)对犬精液冷冻保存的效果最佳,解冻后精子的活率为0.58,畸形率为17.2%,满足输精和进行超低温冷冻保存精子的要求。     

犬精液品质的荧光染色评价方法

为了探索荧光染色技术在犬精液品质检测中的应用,将犬精子标记相应的荧光染料,用荧光显微镜观察精子的质膜完整性、线粒体活性与顶体完整性.在荧光显微镜下,死精子经PI染色后,头部核区呈红色;具有活性线粒体的精子经Rh123染色后,尾部中端线粒体部分呈现绿色荧光;顶体完整的精子经FITC-PNA染色后,顶体区可见绿色强荧光.说明PI染色、Rh123染色及FITC-PNA染色分别用于评价精子质膜完整性、线粒体活性和顶体完整性,是评价犬精液质量的有效方法.     

稀释液溶质组合及渗透压对鸡精子体外保存时间和形态的影响

研究了8种稀释液溶质精确的渗透压和用其配制的13种鸡精液稀释液对鸡精子的保存效果.结果显示,无机盐氯化钠、氯化钾在350 mmol/L渗透压浓度单独使用时可以获得较高的精子存活时间和精子生存指数,但不利于维持鸡精子细胞膜的完整性.有机盐柠檬酸钠、柠檬酸钾最佳的渗透压值应该在350~400 mmol/L.谷氨酸钠最佳渗透压不是等渗,而是偏低渗.3种有机盐溶液对鸡精子形态有保护作用。葡萄糖、蔗糖、果糖单成分液均有保护鸡精子形态完整的良好作用;最适渗透压浓度葡萄糖为250 mmol/L,蔗糖为200~250 mmol/L.氯化钠和氯化钾以5∶1比例制成350 mmol/L渗透压浓度溶液时可以获得比单独使用时更高的精子存活时间和生存指数,但不能改变无机盐对鸡精子细胞膜的破坏作用.250 mmol/L谷氨酸钠和450 mmol/L的果糖以1∶2组合后可以获得较为理想的鸡精子机能和形态保存效果.     

不同糖类对蓝狐精子常温及冷冻保存特性的影响

人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂     

不同抗氧化剂对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响

本研究旨在分析不同抗氧化剂(海藻糖、维生素E、半胱氨酸)对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响。选取健康成年伊河马鹿公鹿15头、采用电刺激采精法采集精液,分别使用含不同浓度的海藻糖(0、25、30、35、40 mg/mL)、维生素E(0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)和半胱氨酸(0、1、2、3、4 mg/mL)的冷冻保存稀释液按1∶5比例(精液与含有抗氧化剂的稀释液之比为1∶5)稀释精液后,经过降温平衡-冷冻-解冻后,检测冻精样品中的精子活力、顶体完整率、质膜完整率以及精液中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果表明,与对照组相比,海藻糖浓度为35 mg/mL,维生素E浓度为0.6 mg/mL,半胱氨酸浓度为3 mg/mL时,精液中的精子活力、质膜完整率、SOD活性显著提高(P<0.05),通过提高SOD酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高马鹿精液冷冻-解冻后质量。     

猪精液稀释液中不同水质对精子活力的影响

通过对猪精液稀释液采用不同水质的试验研究，结果表明：无污染的高山矿泉水和质量好的蒸馏水作稀释用水的精子存活时间最长，而用天然河水作稀释用水的精子存活时间最短。     

猪精液冷冻保存研究进展

总结了国内外猪冷冻精液的研究成果,对冷冻保存机理进行了简要阐述,并从稀释液和冷冻保护剂、冷冻前处理、冷冻剂型、冷冻速率、解冻等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素。     

番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响

为研究番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响,在山羊精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(0、0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL)的番茄红素,检测冷冻-解冻后精子的活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性,并用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明,1.0mg/mL组的冷冻保存效果最好,精子活率、顶体完整率、质膜完整率和线粒体活性分别达到52.04%、51.33%、53.57%和49.31%,显著高于对照组,且SOD、CAT、GSH-Px的活性也显著高于对照组;0.5mg/mL组与2.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及CAT和GSH-Px活性差异不显著;4.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及SOD和CAT活性与对照组差异不显著。因此,在山羊精液冷冻稀释液中加入1.0mg/mL的番茄红素对山羊精液具有显著的保护作用,能进一步提高山羊冻精品质。     

冷冻保存对家蚕精液乳酸脱氢酶活性的影响

对家蚕冷冻精液乳酸脱氢酶活性进行了研究,结果表明：家蚕精液LDH测定过程中的最适底物浓度在0．5—0．8mmol／L之间;LDH抽提液在4℃存放随时间延长其酶活性下降,应在抽提后的15h内测定其活性;家蚕精液经过冷冻后精子受损严重,精子中的LDH向精清中溢出,导致精子中LDH活性下降及精清中LDH活性上升;-80℃保存的精液在90d后其精子中的酶活性仅为冷冻前的23％,而液氮保存的精液虽然在冷冻1d后酶活性下降为冷冻前的43％,但是在其后的90d中酶活性下降很少,可作为家蚕精液长期保存的冷存方式。     

家兔精液冷冻保存的研究

以家兔为试验动物,通过精液在4℃保存时间来筛选合适的基础液,并从精液解冻后的精子活率和活力2个指标筛选出最佳的平衡时间和抗冻剂（甘油）浓度．冷冻保护液中渗透性抗冻剂（甘油）的3种浓度为3％,4％和5％．4℃平衡时间分别为2,3,4h．将3种甘油浓度的冷冻保护液与3种平衡时间相配伍,共9组进行冷冻试验,筛选出稀释液为：Tris3．03g,柠檬酸1．30g,果糖1．50g,卵黄20%,青、链霉素各1×10^5U,双蒸水100mL．冷冻后结果表明,3％的甘油浓度平衡3h,解冻后精子活力在0．3以上,达到人工授精的要求．     

超低温冷冻保存对西伯利亚鲟精子酶活性的影响

为西伯利亚鲟(Acipenser baerii)精子超低温冷冻保存体系优化及冷冻精子保存效果提供理论支撑,以西伯利亚鲟新鲜精子为对照,研究超低温冷冻保存(-196℃)条件下精子中总ATP酶(ATPase)、谷胱甘肽还原酶(GR)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等的酶活性变化。结果表明:超低温冷冻前后西伯利亚鲟精子内的GR酶活性从(23.36±1.69)U/mL升至(94.61±4.13)U/mL,差异显著;CK酶、LDH酶、SDH酶、CAT酶及SOD酶的酶活性均显著降低,分别从(6.64±0.58)U/mL、(6 695.78±123.47)U/L、(24.91±1.63)U/mL、(112.33±6.38)U/mL、(61.99±4.15)U/mL降至(5.27±0.23)U/mL、(4 388.32±93.28)U/L、(17.45±0.94)U/L、(67.58±3.87)U/mL、(46.38±2.54)U/mL;总ATP酶从冻前的(18.77±1.23)U/mL降至(16.32±0.87)U/mL,差异不显著。超低温冷冻保存对西伯利亚鲟精子酶活性均有显著影响。     

不同采精法对犬精液品质的影响

本试验采用手握采精法、电刺激采精法及附睾采精法采集精液,进而进行精液品质分析,本试验以繁殖机能正常、健康无病的1只2岁雄性土犬及延边某屠宰场提供的50只2～7岁之间肉用公犬为实验材料,探讨不同采精法对犬精液品质的影响,为犬人工授精和体外受精技术提供试验依据。结果如下:附睾采精法采集犬精子活率为39.70%,显著低于手握法62.90%和电刺激采精法60.33%(P<0.05),手握法采集精液为最佳方法。     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究

选取杜洛克公猪精液作为试验材料,比较5种稀释液对猪精液的保存效果,结果表明:用葡萄糖—柠檬酸稀释液,所保存精液的pH值、精子活率、精子畸形率等品质指标表现良好,且稀释液的成本低廉,自配简单易行,适于农村养猪户推行;基层常用的葡萄糖稀释液保存3 d时的精子活率性状表现不佳,仅适合于现配现用。BL─液(美国)稀释液的保存效果也比较好,但该稀释液组分复杂,配制较难,成本也较高,可在规模养猪场中推广。     

冷冻保存对家蚕精液乳酸脱氢酶活性的影响

时家蚕冷冻精液乳酸脱氢酶活性进行了研究,结果表明:家蚕精液LDH测定过程中的最适底物浓度在0.5～0.8 mmol/L之间;LDH抽提液在4℃存放随时间延长其酶活性下降,应在抽提后的15 h内测定其活性;家蚕精液经过冷冻后精子受损严重,精子中的LDH向精清中溢出,导致精子中LDH活性下降及精清中LDH活性上升;-80℃保存的精液在90d后其精子中的酶活性仅为冷冻前的23%,而液氮保存的精液虽然在冷冻1 d后酶活性下降为冷冻前的43%,但是在其后的90d中酶活性下降很少,可作为家蚕精液长期保存的冷存方式.     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的影响

为研究适宜于大白猪精液常温保存的稀释液配方,以精子活率、质膜完整率、顶体完整率和呼吸强度为测定指标,分析4种不同配方的稀释液常温下保存大白猪精液的效果。结果表明,经48h保存后,稀释液Ⅰ和Ⅱ保存的精子活率、质膜完整性和顶体完整率分别达到54%、58%和88%,显著优于其他组(P<0.05)。经稀释液Ⅰ和Ⅱ保存的精子的呼吸强度分别为7.25min和8.25min,显著优于稀释液Ⅲ、Ⅳ和对照组(P<0.05),但稀释液Ⅰ和Ⅱ差异不显著(P>0.05)。因此,稀释液Ⅰ和Ⅱ是大白猪精液常温保存的适宜稀释液。     

犬常规冷冻稀释液中添加谷胱甘肽的研究

随着中国国民经济的迅速发展,军、警犬得到广泛应用的同时,肉用犬的饲养已经形成规模,宠物犬进入百姓家庭,犬的数量日益增加。为适应国内军、警、生物医学用犬的特点和宠物犬品质提高的需要,人们已经采用犬的人工授精技术提高种公犬的利用率,使优良公犬能充分发挥高产的遗传性。如今养犬业发达的国家,在犬的繁殖生产中大部分采用冷冻精液技术对犬进行人工授精,这种技术的关键在于精液的稀释处理。为提高犬冷冻精液的质量,人们向稀释液中添加各种物质以保护精液。本实验在稀释液中添加谷胱甘肽(GSH),利用其作为过氧化-还原酶系统的作用物,能及时保护精子免遭氧化及过氧化反应终结产物的伤害,使精子脂膜结构保持稳定,提高精液质量。实验将冷冻稀释液与犬精液按1︰1稀释,平均分成6组,依次向每组添加1、5、10、15、20mmol/L不同浓度的谷胱甘肽,设最后1组为对照组。冷冻后,从每次试验的各浓度组随机抽取3支细管进行解冻,镜检精子活力,记录数据。再经姬姆萨染色法染色,观察顶体完整率和畸形率。试验结束后,采用方差分析法对数据进行分析。实验结果表明:添加5mmol/L谷胱甘肽的冷冻精液解冻后,精子活力、顶体完整率均优于对照组,畸形率低于对照组,5mmol/L为最优添加浓度。