不同抗冻保护剂对鸡精液冷冻效果及基因表达的影响

旨在研究不同抗冻保护剂对鸡精液的冷冻保存效果,并通过比较差异表达基因,以解释不同保护剂的抗冻机制.以海兰褐种公鸡为研究对象,检测了不同抗冻保护剂(保护剂Ⅰ和保护剂Ⅱ)冷冻保存后的精子活性,并利用Affymetrix表达谱芯片检测技术,对差异表达相关基因进行筛选.结果表明:1)保护剂Ⅰ组的精液冻后活力活率(27.05±1...     

鸡精液冷冻技术研究

鸡精液冷冻技术研究李世英，李焕玲（山东省农业科学院畜牧所济南２５０１００）胡松庭，王宝维，王建田（莱阳农学院牧医系）（农业部山东蓬莱良种肉鸡示范场）鸡的精液冷冻技术在国外已有几十年的研究历史，但直到９０年代受精率才达到８５％。国内有的单位在实验室内也...     

四种冷冻保护剂对鸡精液冷冻效果的比较

采用浓度为12%的甘油、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基甲酰胺(DMF)作为冷冻保护剂,分别添加到A液(乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、磷酸氢二钾、果糖、TES);B液(氯化镁、乙酸钠、柠檬酸钠、谷氨酸钠、果糖、EDTA-Na2)2种基础液中,进行常温保存和冷冻试验.常温保存结果发现:甘油对精子毒害作用最大,在A、B 2种基础液中精子生存指数分别为(8.40±0.114),(8.30±0.055)(P<0.01);其次是DMF,而DM-SO及DMA对精子的毒害作用最小.冷冻保存结果发现,以DMSO和DMA作为冷冻保护剂,精子解冻后活率优于DMF和甘油(P<0.01).     

复合抗冻剂对蓝圆鯵冷冻鱼糜抗冻效果的影响

以蓝圆鯵冷冻鱼糜为材料,研究复合磷酸钠、山梨糖醇和聚葡萄糖对盐溶性蛋白溶解量和肌原纤维蛋白Ca~(2+)-ATPase活性的影响,并通过正交试验优化了抗冻剂的配方.结果表明:山梨糖醇添加量为4%、聚葡萄糖添加量为4%、复合磷酸钠添加量为0.3%时,抗冻效果最好.在此条件下,蓝圆鲹鱼糜冻藏6周后,测得盐溶性蛋白溶解量为31.67 mg·g~(-1),Ca~(2+)-ATPase活性为0.0901μmol·mg~(-1)·min~(-1),较未经处理的鱼糜分别高31.19%和42.30%.     

冷冻鱼糜绿色抗冻剂的研究进展

冷冻贮藏是鱼糜重要的贮藏方法,但冻藏方法的不恰当以及缓化会引起鱼肌原纤维蛋白的变性,造成鱼糜品质下降。添加抗冻剂被认为是防止水产品蛋白质冷冻变性的最有效方法之一。文章探讨了冷冻鱼糜在冻藏过程中的物理及化学变化、鱼糜蛋白质冷冻变性规律及抗冻剂的作用机理,在此基础上分别综述了如:海藻糖、藻类提取物、多酚类物质及蛋白水解物等类型的绿色抗冻剂的研究与应用进展。最后,文章分析了冷冻鱼糜抗冻剂存在的问题,并对其发展趋势进行展望,旨在为绿色冷冻鱼糜抗冻剂筛选研究及鱼糜加工业选取合适的抗冻剂提供参考。     

品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响

[目的]明确品种、冷冻速率和白藜芦醇对鸡精液冷冻保存效果的影响及其互作关系,为解决鸡精液冷冻保存不稳定的困境及加快新品种培育进程提供技术支持.[方法]采集黑丝羽乌骨鸡(简称乌鸡)和黄土二鸡(简称黄鸡)2个品种的公鸡精液,分别添加0、25、50和100μmol/L白藜芦醇,以二甲基乙酰胺(DMA)为抗冻剂制备细管冻精,在液氮面上1 cm处(高冷冻速率)或3 cm处(低冷冻速率)冷冻,通过冻后精子活力、脂质过氧化水平和线粒体膜电位水平评价鸡精液冻后品质.[结果]黄鸡精液冻后精子活力显著高于乌鸡(P<0.05,下同),但线粒体膜电位水平差异不显著(P>0.05,下同);高冷冻速率下的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于低冷冻速率,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平差异不显著;不同白藜芦醇添加量下,鸡精液冻后精子活力和脂质过氧化水平差异不显著,但线粒体膜电位水平差异显著.双因素组合时,品种×冷冻速率、品种×白藜芦醇和冷冻速率×白藜芦醇间均存在交互作用,其中,乌鸡×高冷冻速率组合的鸡精液冻后脂质过氧化水平显著低于黄鸡×高冷冻速率组合,但冻后精子活力和线粒体膜电位水平无显著差异.三因素组合时,鸡精液冻后脂质过氧化水平最低的组合是乌鸡×低冷冻速率×50μmol/L白藜芦醇,线粒体膜电位水平最高的组合是乌鸡×低冷冻速率×0μmol/L白藜芦醇.[结论]鸡精液冷冻保存时其品种、冷冻速率和白藜芦醇间存在二元互作效应或三元互作效应.因此,只有充分考虑鸡品种、冷冻速率和抗氧化剂间的互作效应,才能切实提高鸡冷冻精液的品质.     

冷冻稀释液渗透压、抗冻剂和平衡时间对鸡颗粒冻精冻后活率的影响

4个不同渗透压水平(280、320、360、400 mOsm)的鸡精冷冻稀释液,以甘油(GL)、二甲基亚砜(DMSO)和N,N二甲基乙酰胺(DMA)分别作为抗冻剂进行了冷冻试验.结果表明,添加8%甘油、4%DMSO和11%DMA的冷冻稀释液,4个不同渗透压间冻后精子活率均有显著差异(P<0.05),而且精子活率随冷冻稀释液渗透压的升高而升高;添加5%和10%甘油的冷冻稀释液,渗透压对解冻精子活率影响不显著;在400 mOsm渗透压条件下,8%甘油组冷冻后精子活率高于其他抗冻剂组;3种抗冻剂4个渗透压水平冷冻,平衡时间长短(30 min和90 min)对解冻后精子活率没有影响.     

抗冻剂对水牛卵母细胞冷冻后孤雌发育的影响

试验主要探索了不同抗冻剂组合对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻解冻后孤雌发育替力的影响.通过对3种抗冻剂组合(Ⅰ:20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO);Ⅱ:20%EG+20%1,2-丙二醇(PROH);Ⅲ:20%EG+20%PROH+10%DMSO)的毒性试验,发现试验组的形态正常率均低于对照组(p<0.05),但Ⅰ组的分裂率、8细胞率和囊胚率与对照组无显著差异(p>0.05).并以抗冻剂Ⅰ组做冷冻液,探讨了解冻液中蔗糖梯度浓度(A:0.5,0.25,0.10 mol/L与B:0.62,0.42,0.31 mol/L)对卵母细胞冷冻-解冻效果的影响.B组的形态正常率显著高于A组(p<0.05),且B组的分裂率和囊胚率与对照组无显著差异(p>0.05).最后比较了3种抗冻剂组合对卵母细胞冷冻解冻后的孤雌激活发育效果.3组的形态正常率、分裂率和8-细胞率之间无显著差异(p>0.05),但均显著低于对照组(p<0.05),其中Ⅰ组的囊胚率与Ⅱ、Ⅲ组及对照组差异均不显著(p>0.05),Ⅱ组和Ⅲ组的囊胚率显著低于对照组(p<0.05).结果表明:采用抗冻剂组合Ⅰ冷冻水牛MⅡ期卵母细胞,解冻时采用B组解冻液去除抗冻剂,可以取得较好的冷冻保存效果.     

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。     

丙酮酸盐对牛精液冷冻效果的影响

在常用的果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液的基础上,分别添加1.25 mmol/L或2.00mmol/L的丙酮酸钾、丙酮酸钠或丙酮酸钙,以观察丙酮酸盐在牛精液冷冻中的应用效果。冷冻前各组稀释液隔15min分2次加入,之后平衡4h。结果表明,各组精子的冻后活力、复苏率、畸形率和顶体完整率之间没有显著差异,但6个试验组的冻后活力、复苏率和对照组相比有提高趋势。     

乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响

[目的]探索乳铁蛋白在牛精液冷冻中的应用效果,为乳铁蛋白在家畜精液保存中的研究与应用提供初步的参考数据。[方法]在常用稀释液(果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液)的基础上,分别添加不同浓度(250、500、1000mg/L)的乳铁蛋白,观察乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响。[结果]3种浓度的乳铁蛋白对精子的冻后活力、复苏率、VAP、VSL、VCL、畸形率、顶体完整率及低渗肿胀率均没有显著影响。[结论]在该试验条件下,乳铁蛋白未能显著提高牛精液的冻后质量。     

不同解冻方法对猪精液冷冻效果的影响

以姜曲海种公猪冷冻精液为研究对象,观察了使用2种不同解冻方法对精液品质及体外受精胚胎发育的影响.试验结果表明,冷冻精液从液氮取出后,使用37℃水浴30s解冻在精子运动度、质膜完整率、顶体完整率和体外受精胚胎发育率方面均显著优于在室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻(P＜0.05).而与新鲜精液体外受精卵裂率和4细胞胚胎发育率相比,37℃水浴30s解冻方法与对照组无显著差异(P＞0.05).表明37.C水浴30s解冻方法优于室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻方法.     

枸杞多糖对猪精液冷冻效果影响的研究

通过在猪精液的冷冻基础液中添加不同浓度的枸杞多糖,来研究冻后猪精子的活率、质膜完整性、线粒体完整性和顶体完整性等各项参数指标,探讨枸杞多糖不同浓度对猪精液冷冻保存效果,试图寻找一种能较好地保护精子的天然抗冻剂.     

不同浓度咖啡因对犬精液冷冻效果的影响

为提高犬冷冻精液的冷冻效果,试验向Tris-卵黄基础稀释液中添加不同浓度的咖啡因;结果表明:当所添加的咖啡因浓度为5.0mmoL/L时,精子活率为0.33±0.04(P0.01),显著对照组。添加浓度为12.5mmoL/L时,精子活率仅为0.23±0.04(P0.01),显著对照组。浓度为5.0mmoL/L时精子畸形率最低,为0.174±0.036(P0.01),显著对照组。但添加咖啡因的各组跟对照组在顶体完整率上并无显著差异。     

新型蛋白抗冻剂对鳙鱼鱼糜抗冻效果的研究

以鳙鱼鱼糜的持水性、凝胶强度、折叠实验、水溶性蛋白和盐溶性蛋白含量为指标,研究添加新型蛋白抗冻剂、商业抗冻剂以及它们复配形成的复配抗冻剂后,对鳙鱼鱼糜在24周的冻藏周期内蛋白质冷冻变性的影响。结果表明：新型蛋白抗冻剂和商业抗冻剂都能减缓鱼糜失水率的上升速度,新型蛋白抗冻剂添加量为0.5%时,失水率升高速度较低;添加复配抗冻剂的鱼糜失水率升高速度最低。添加不同抗冻剂的鳙鱼鱼糜在冻藏期间都能保持较高的折叠实验评分。新型抗冻剂和复配抗冻剂对鳙鱼鱼糜的凝胶强度、破断强度和凹陷度均有维持较好效果的作用。从水溶性蛋白含量来看,抗冻剂的添加可以大大抑制其在冻藏期间的冷冻变性,而新型蛋白抗冻剂的效果优于商业抗冻剂,这与持水力、凝胶特性及折叠实验结果基本相同。鳙鱼鱼糜盐溶性蛋白的变化趋势与其凝胶特性的变化趋势相似,说明抗冻剂对盐溶性蛋白的保护最终有利于维持这些蛋白质的凝胶特性。     

丝胶蛋白对牛精液冷冻效果的影响

精液在冷冻保存过程中易受氧化应激的影响,从而导致精液品质下降,丝胶蛋白具有抗氧化能力,可抑制由自由基产生的脂质过氧化。为研究精液稀释液中添加丝胶蛋白对牛精液冷冻效果的影响,采集4头公牛精液,将其分成5等份,在Optidyl稀释液中添加不同浓度丝胶蛋白(0,0.25%,0.5%,1.0%,2.0%),精液稀释后冷冻保存,使用计算机辅助精子分析系统检测解冻后精子的活力及运动参数,低渗肿胀试验检测质膜完整率,考马斯亮蓝染色法检测顶体完整率,分光光度计检测精浆中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)等氧化应激指标。结果表明：与对照组相比,稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可显著提高解冻后牛精子的活力、运动参数、顶体完整率、质膜完整率及SOD含量,并显著降低ROS和MDA水平(P<0.05)。这表明在Optidyl稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可保护牛精子免受氧化应激损伤,有效提高冷冻后精液品质。     

不同稀释剂对猪冷冻精液的影响

手握法采集12月龄大约克种公猪精液,在37℃下离心,弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,用7种不同的稀释液进行稀释,应用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。结果表明,在7种稀释液中,7号稀释液优于其他6种稀释液(p<0.05);与其他的冷冻保护剂相比,甘油的冷冻保护性能较好(p<0.01),其适宜浓度为2~4ml/l;干解冻(40~45℃)效果优于湿解冻,解冻后精子活率达0.46~0.49(p<0.05);稀释液中添加安钠咖可有效地延长精子的冻后存活时间(p<0.01)。     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

抗冻酵母及保护剂的筛选及在冷冻面团中的应用研究

冷冻面团,尽管可以让面团的保鲜时间更长,但是其中的酵母却可能因为低温而导致活力丧失,失去发酵的功能,从而影响面团的发酵质量,冷冻面团一般体积小。口感差,结构粗糙,因此不利于生产活动。目前,针对冷冻面团所存在的这种问题,经过深入研究后,发现了一种抗冻酵母,通过添加合适的保护剂,冷冻面团馒头的质量有了较为明显的提高,从而扩大的冷冻面团的适用范围。