欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析

通过RT-PCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)Ig轻链基因cDNA全长序列,命名为AaIgL,其全长为1 016bp,开放阅读框为714bp,编码238个氨基酸。将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明新增的27ku蛋白条带与预期值相符,且与兔抗欧洲鳗鲡IgM血清发生特异性显色反应,证实了AaIgL基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;实时荧光定量PCR检测结果发现:AaIgL在欧洲鳗鲡各组织中均有表达,其中脾脏的表达量最高,肾脏和心脏中也有较高的表达水平,而肝脏、肌肉、鳃以及肠中的表达量较低;欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后脾脏和肾脏的AaIgL表达水平明显上升,其峰值分别为第7天和第14天,AaIgL在脾脏的表达量显著高于肾脏,但是第21天后均恢复至正常水平。以上结果表明,AaIgL在欧洲鳗鲡机体免疫防御中发挥重要作用,脾脏是AaIgL基因的主要表达器官。     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析

通过RT-PCR技术从欧鳗(Anguilla anguilla)脾脏总RNA中获得了编码成熟免疫球蛋白(Ig)重链的基因序列(GenBank accession No.GQ249838),该序列长1 686 bp,编码562个氨基酸残基,分子质量为62.2 ku.将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明新增的66 ku蛋白条带与预期值相符,且能够与兔抗欧鳗IgM血清发生强烈的特异性反应,证实了欧鳗免疫球蛋白重链(IgH)基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;利用荧光定量PCR检测了Ig基因在欧鳗背肌注射山羊IgG前后不同组织的表达水平,结果显示欧鳗在免疫前后其肾脏与脾脏Ig基因的表达量均明显高于其它组织,在鳃、肌肉中的表达量也较高,而在肝脏、心脏中的表达量较低.此外,对同一组织免疫前后的Ig基因表达量比较发现,除肝脏外,其它组织Ig基因表达水平在免疫后均上升,在鳃和肌肉中达到显著水平,而在脾脏中达到极湿著水平.     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点

采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguila,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig )细胞定位与分布特点.结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1:51 200.对照组欧鳗脾脏Ig 细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未发现.试验组欧鳗脾脏Ig 细胞数量明显比对照组增多,肾脏中有所增多但不明显,肝脏中未发现.在试验组和对照组中,黑色素巨噬细胞在脾脏和肾脏中均见明显聚集并与淋巴细胞形成黑色素巨噬细胞中心(melano-macrophage centres,MMCs),其中脾脏MMCs多数位于血管附近,脾脏Ig 细胞均主要分布在MMCs及其周边,且在试验组中数量多而密集,而肾脏Ig 细胞在对照组中明显分布于MMCs及其周边,但在试验组不明显.与对照组相比,试验组中脾脏和肾脏黑色素巨噬细胞数量和体积均有明显增多.试验结果说明欧鳗肾脏和脾脏是具有Ig 细胞的重要免疫器官,其中黑色素巨噬细胞数量和体积变化与免疫应答过程密切相关.     

欧洲鳗鲡与日本鳗鲡的染色体组型比较

采用ＰＨＡ体内注射法,以肾组织为材料,结合扫描电镜研究,对区洲鳗鲡、日本鳗鲡的染色体组进行了比较,结果是：欧洲鳗鲡２ｎ＝３８,中部着丝点染色体为６对,近中部着丝点染色体为３对,端部着丝点染以体为１０对,染色体总臂数（ＮＦ）为５６,ｔ３染爸体上有随体。日本鳗鲡２ｎ＝３８,中部着丝点染色体数为５对,近中部着丝点染色体为５对,端产着丝点染色体为９对,染色体总臂数（ＮＦ）为５８。对欧洲鳗鲡、日本鳗鲡的染色     

氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学

[目的]研究氟苯尼考在日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内的药代动力学特征。[方法]氟苯尼考以混饲口灌方式给药,剂量为30mg／kg,药时数据利用DAS软件进行药动学分析。[结果]日本鳗鲡和欧洲鳗鲡体内药动学的房室参数：吸收速率常数（K）分别为0．329和0．4491／h,消除相半衰期（t1／2β）为44．266和12．690h。非房室参数：药时曲线下面积（AUC0-∞。）分别为257．099和285．945mg·h／L,平均滞留时间（MRT0-∞）为18．370和14．227h,半衰期（t1/2）为12．341和9．919h,达峰浓度（Cmax）为15．92和20．39μg/ml,达峰时间（Tmax）均为4h。[结论]建议在鳗鲡中使用氟苯尼考进行治疗时可采用30mg／kg体重的剂量,给药间隔为12h,即每天2次。     

养殖欧洲鳗鲡肠道菌群组成的研究

用稀释滴种定量方法，分别于甘露醇卵黄多黏菌素、马铃薯葡萄糖、伊红美蓝、链球菌琼脂、CDC厌氧琼脂和营养琼脂，分离并计数不同饵料投喂阶段饱食和空腹状态下养殖欧洲鳗鲡肠道细菌的数量与组成。结果表明：在空腹状态下肠道菌群组成以大肠菌群为主，未开口期和水蚯蚓（Tubificidae）投喂期厌氧菌第二，其次为芽孢杆菌；投喂人工配合饲料后芽孢杆菌第二；投喂人工配合饲料后出现肠球菌。饱食状态下以厌氧菌为主，其次为大肠菌群，水蚯蚓投喂期间肠球菌占第三位，其余时间芽孢杆菌占第三位。饱食和空腹状态下，肠道菌群数量以水蚯蚓（Tubificidae）投喂期最高，随养殖时间的延长，肠道菌群数量下降。     

4种鳗鲡同工酶的比较研究

以日本鳗鲡（Anguilla japonica）、澳洲鳗鲡（A．australis）、欧洲鳗鲡（A．anguilla）和美洲鳗鲡（A．rostrata）成体为试验材料,应用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对4种鳗鲡的眼球、肌肉、肝脏、心脏和。肾脏5种组织的8种同工酶（酯酶EST、乳酸脱氢酶LDH、苹果酸脱氢酶MDH、葡萄糖脱氢酶GCDH、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G6PD、醇脱氢酶ADH、超氧化物歧化酶SOD和谷氨酸脱氢酶GDH）进行比较研究。结果表明：GDH在5种组织中均没有表达,7种同工酶（EST、LDH、MDH、GCDH、G6PD、ADH、SOD）在4种鳗鲡均表现出很强的组织特异性。4种鳗鲡的同工酶谱表型非常相似,在同一组织中同工酶的存在位点、表达形态、活性等方面是类似的,但也表现出一定的种间差异性。应用酶谱差异指数D对4种鳗鲡进行聚类分析,结果提示日本鳗鲡和澳洲鳗鲡有较近的亲缘关系、而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡有较近的亲缘关系,这与4种鳗鲡的形态特征和生物学特征相吻合。     

不同培养条件下欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞的生长优势

为建立欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为试验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件。观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清成分(BS和FBS)及其浓度(5%、10%、15%、20%)对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。结果表明:含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

鳗鲡病毒性疾病病料中鳗鲡疱疹病毒的PCR检测

结合流行病学、临床症状、病理变化等对2006～2012年收集的发病濒死鳗鲡病料进行分类,确定疑似鳗鲡病毒性疾病病料36份,提取病料主要内脏器官(肝、脾、肾)DNA,进行鳗鲡疱疹病毒的PCR检测。从"脱粘败血病"、"红头病"、"烂鳃病"的鳗鲡病料中检测到6份阳性结果,表明这些疾病可能是由鳗鲡疱疹病毒引起的。DNA测序结果显示,扩增的病毒DNA聚合酶基因片段与分离自台湾、日本及欧洲的病毒株完全一致,表明这些病毒可能为同一病毒株。     

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。     

bFGF和IGF-1细胞生长因子对欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞生长的影响

为建立一种欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,深入了解鳗鲡病毒性疾病流行与传播的情况,本试验在欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件下,通过添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)等可能的传代细胞促长因子,并在限定的时间内收集细胞、进行细胞计数、绘制胸鳍细胞的生长曲线,分析其对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长速率的影响。试验结果提示:在10%FBS L-15全价培养基的条件下,bFGF对欧洲胸鳍细胞的生长有明显的促进作用,最佳效应浓度为10μ.L-1;IGF-1(5～50μg.L-1)不利于欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

欧洲鳗鲡生态健康养殖模式探析

提出了把生态学理念应用到欧洲鳗鲡养殖管理中的思路,即通过调控养殖水体生态环境因子,建立多样性水体生物结构,最大程度提高养殖水体自净和生态防病抗病能力,实现少换水、少用药、提高饲料效率和降低成本的养殖效果.试验共投白仔苗961 188尾,经过280 d的养殖,共收获鳗鱼54 890 kg,平均59 g/尾,成活率97.8...     

一例引起欧洲鳗鲡死亡的嗜水气单胞菌分离与鉴定

从患病欧洲鳗鲡内脏组织中分离获得1株菌FZ01,对该菌进行了形态学、药物敏感性试验、动物感染试验和血清型分析,并进行了VITEK全自动微生物分析系统鉴定.结果显示:该菌为革兰氏阴性短杆菌,端圆,散在,TCBS琼脂上呈细小黄色菌落.VITEK全自动微生物系统鉴定该分离株为致病性嗜水气单胞菌.动物感染试验证明,对欧鳗和小白...     

养殖欧洲鳗鲡"狂游病"外周血细胞的病理变化

近年来 ,在欧洲鳗鲡 (Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前 ,出现食欲极为旺盛 ,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上呈挣扎状急游 ,数秒后沉入水中 ,再上浮挣扎状游动 ,往复进行。 2～ 3天后病鳗出现呼吸困难 ,对外界剌激反应迟钝 ,继而随水流集于排污口。死亡数急剧增加。流行季节为 5月 - 1 0月份 ,7月 - 8月份为发病高峰 ,死亡率达 90 %以上。当年欧洲鳗鲡 ( 1 0 0～ 2 0 0ｇ)和 2龄欧洲鳗鲡 ( 4 0 0ｇ以上 )均易发病死亡 ,从开始发病到死亡一般只需 2周左右 ,目前尚无良…     

养殖欧洲鳗鲡"狂游病"外周血细胞的病理变化

近年来 ,在欧洲鳗鲡 (Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前 ,出现食欲极为旺盛 ,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上呈挣扎状急游 ,数秒后沉入水中 ,再上浮挣扎状游动 ,往复进行。 2～ 3天后病鳗出现呼吸困难 ,对外界剌激反应迟钝 ,继而随水流集于排污口。死亡数急剧增加。流行季节为 5月 - 1 0月份 ,7月 - 8月份为发病高峰 ,死亡率达 90 %以上。当年欧洲鳗鲡 ( 1 0 0～ 2 0 0ｇ)和 2龄欧洲鳗鲡 ( 4 0 0ｇ以上 )均易发病死亡 ,从开始发病到死亡一般只需 2周左右 ,目前尚无良…     

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛血清的营养液中培养68 h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果。     

欧洲鳗鲡皮肤、鳃及消化道粘液细胞的分布与类型

利用AB-PAS法(阿利新蓝过碘酸雪夫氏反应法),观察了欧洲鳗鲡皮肤、鳃及消化道粘液细胞的分布和类型。根据AB-PAS染色结果表明:欧洲鳗鲡皮肤表皮含有大量的粘液细胞,粘液细胞呈Ⅳ型细胞为主,仅见很少量的Ⅰ型细胞;鳃片、鳃丝表面粘液细胞有3种类型,即Ⅱ、Ⅲ型和Ⅳ型;食管上皮分布着大量粘液细胞,以Ⅲ型、Ⅳ型最多,Ⅱ型次之;胃贲门、胃体、胃幽门表面粘液细胞,AB-PAS染色只有Ⅰ型粘液细胞;肠道杯状细胞,肠前部主要含有Ⅰ型和Ⅳ型两种类型;肠中部含Ⅲ型和Ⅳ型两种类型,肠后部仅呈Ⅳ型。通过对各部位粘液细胞的分类和比较,可以看出粘液细胞的分布和类型与其所在部位执行的功能有密切的关系。     

世界鳗鲡属的种类与渔业

世界鳗鲡属的种类多，分布广，产量颇高，其肉质鲜美，在商品市场上享有很高的声誉．目前，世界各地鳗鲡渔业的发展甚为迅速，尤其是养鳗业的开拓，使其产量大幅度上升．当今世界上饲养鳗鲡的国家，主要有中国、日本．韩国、以养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)为主；意大利，以色列、埃及、匈牙利等国养殖欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)为主；新西兰等国也在从事鳗鲡饲养业的开展。     

世界鳗鲡属的种类与渔业

世界鳗鲡属的种类多，分布广，产量颇高，其肉质鲜美，在商品市场上享有很高的声誉．目前，世界各地鳗鲡渔业的发展甚为迅速，尤其是养鳗业的开拓，使其产量大幅度上升．当今世界上饲养鳗鲡的国家，主要有中国、日本．韩国、以养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)为主；意大利，以色列、埃及、匈牙利等国养殖欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)为主；新西兰等国也在从事鳗鲡饲养业的开展。