团头鲂雌核发育生化遗传标记的初步研究

团头鲂 (Ｍｅｇａｌｏｂｒａｍａａｍｂｌｙｃｅｐｈａｌａ)肉质鲜美 ,生长快 ,为我国主要养殖对象之一。为防止养殖过程中的衰退 ,提高团头鲂的优良经济性状 ,实现良种化生产 ,上海水产大学自 1 985年起 ,从湖北省公安县淤泥湖引进团头鲂原种群体 ,在上海水产大学南汇种质资源试验站进行选育 ,经过连续 1 5年的混合选育 ,现已获得生长性能明显提高的第六代选育群体[1] 。为了保持和尽快纯化该选育群体 ,1 999年对团头鲂选育群体采用人工诱导雌核发育获得纯系取得了初步进展。本文报道团头鲂人工雌核发育群体的生化遗传特征和遗传标志 ,为团…     

连续三代减数分裂雌核发育团头鲂的遗传多样性分析和RAPD鉴别方法的建立

为评估连续三代减数分裂雌核发育团头鲂群体的遗传多样性和遗传纯合度,寻找区分不同团头鲂育种群体(团头鲂浦江1号选育系、连续三代减数分裂雌核发育团头鲂群体)的稳定的分子遗传标记,本研究以团头鲂(Megalobrama amblycephala)浦江1号选育系F₉群体为对照组,利用39条多态性RAPD随机引物比较分析了团头鲂人工减数分裂雌核发育一代群体(G₁)、二代群体(G₂)和三代群体(G₃)的遗传多样性和遗传结构,获得了用于鉴别不同团头鲂育种群体(F₉、G₁、G₂、G₃)的稳定的RAPD分子遗传标记,探讨了连续多代诱导减数分裂雌核发育对团头鲂基因纯化的效果。结果显示,39条RAPD随机引物在F₉、G₁、G₂和G₃群体中扩增条带总数分别为213条、202条、200条和190条,F₉、G₁、G₂和G₃群体的多态位点比例分别为36.15%、35.64%、27.00%和26.84%,F₉、G₁、G₂和G₃群体的Shannon信息指数分别为0.207 9、0.185 7、0.146 1和0.138 3。3个雌核发育群体的遗传多样性水平(多态位点比例、Shannon信息指数)均明显低于对照组F₉群体,随着雌核发育世代数的增加,遗传多样性水平呈现逐代降低的趋势,即G₁>G₂>G₃。4个群体的群体内个体间的平均遗传相似系数为0.828 5~0.906 0,3个雌核发育群体的群体内个体间平均遗传相似系数均明显高于对照组F₉群体;群体内个体间的平均遗传相似系数呈现随雌核发育世代数的增加而升高的趋势,即G₃>G₂>G₁。群体间成对F_ST值为0.269 2~0.419 5,经置换检验得到的F_ST值的P值为0.000 0~0.009 0,均达到极显著水平(P<0.01),表明4个群体间存在极显著的遗传分化。有5条随机引物在群体间产生了特异DNA片段,其中,4条随机引物(S3、S40、S58和S75)可用于区分G₃群体和其他3个群体(F₉、G₁和G₂),引物S3的鉴别可靠性最高;仅1条随机引物(S71)能用于区分G₂群体和其他3个群体(F₉、G₁和G₃)。本研究结果表明,连续多代的人工减数分裂雌核发育诱导已对团头鲂育种群体产生以下两方面的影响:一方面,遗传多样性明显降低,并呈现逐代降低的趋势;另一方面,遗传纯度明显升高,并呈现逐代升高的趋势。连续多代减数分裂雌核发育能显著加快团头鲂基因的纯合速度,雌核发育三代群体(G₃)已经是一个遗传一致性较高的高纯品系。     

团头鲂雌核发育后代的微卫星标记分析

采用松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu carp)的紫外线遗传灭活精子刺激团头鲂(Megalobrama amblycephala)卵子后冷休克抑制卵子第二极体释放方法,获得团头鲂雌核发育个体。流式细胞仪检测雌核发育个体的DNA含量与正常团头鲂二倍体的DNA含量并没有显著性差异,表明雌核发育个体为二倍体。通过引物优化,筛选父母本具有特异性的8对微卫星引物,对雌核发育后代进行检测,结果表明雌核发育个体的遗传物质均来自母本,没有父本的遗传物质渗入。筛选出母本为杂合的10对微卫星引物对子代的纯合性进行评价,结果显示雌核发育后代在TTF-EST46、TTF-EST61、TTF-EST851位点全部为纯合,而TTF-EST12座位上的重组率为86.4%,其他6个位点的重组率为100%,这10个位点的平均重组率为68.64%。试验结果表明,通过抑制第二极体并不能获得纯合性较高的团头鲂雌核发育个体,但具有与母本较高的遗传同质性,可以作为良好的育种材料使用。     

用团头鲂精子诱导红白锦鲤雌核发育研究

[目的]研究用团头鲂（Megalobrama amblycephala）精子诱导红白锦鲤（Cyprinus carpioL.）雌核发育。[方法]用紫外线灭活的团头鲂精子刺激性成熟的红白锦鲤卵子,进行雌核发育,并采用热休克方法诱导染色体加倍。[结果]成功获得了红白锦鲤雌核发育二倍体鱼苗28尾。诱导红白锦鲤雌核发育的最佳条件为：团头鲂精子采用紫外线照射20min后,在孵化水温20~22℃条件下,与红白锦鲤卵子授精后3min进行热休克处理,41℃水温下持续处理2min,此时雌核发育率最高（1.78%）。形态学比较表明,单倍体与雌核发育F1代二倍体和正常二倍体在发育过程中存在明显差异,从肌节开始沉积大量黑色素,胚体扭曲严重,呈＂C＂型;而雌核发育二倍体与正常二倍体对照组相比,在体长、体高、体色和卵黄囊长等方面都极为相似。[结论]该研究为进一步探讨红白锦鲤色素遗传机制及定向培育优良新品种奠定了基础。     

甘蔗遗传标记研究进展

综述甘蔗遗传育种中常用的形态标记，细胞学标记，生化标记和分子标记4种遗传标记方法的研究进展，探讨遗传标记在甘蔗遗传和育种研究应用中的现状及前景。     

血液生化遗传标记在禽类建立高产品系中的理论与应用研究

本研究以家鸡为试验材料、用电泳的方法测定分析了一些蛋白质(酶)的多态性,确定下列血液蛋白质(酶)作生化遗传标记:碱性磷酸酶(Akp-1和Akp-2)、淀粉酶(Amy-1和Amy-2)、酯酶(Es-1)、血红蛋白(Hb-1)和转铁蛋白(Tf).应用上述生化遗传标记调查分析了广东省3个著名地方鸡种的起源分化和彼此间关系、粤黄鸡内品系间的分化和粤黄鸡102系内家系间的关系,并对淀粉酶Amy-1多态性及其与生活力等的关系作了专门的研究.结果表明,应用生化遗传标记辅助建立家禽品系是可行的,既可综合多个生化遗传标记建立品系,也可根据单一生化遗传标记(如Amy-1)建立品系。     

植物遗传标记的发展及应用

从形态标记、染色体标记、生化标记及ＤＮＡ分子标记等方面较为系统地介绍了植物遗传标记的进展与应用现状。     

猪生化遗传标记筛选及其与生产性能的关系

以湖南永州市畜禽良种场５个品种为研究对象,从酶活性和血浆蛋白多态性两个方面对猪产肉性状遗传标记的筛选及其应用进行了研究。结果表明,淀粉酶活性和血浆蛋白多态性两个碱性酸酶活性与日增重和瘦肉率呈极显著正相关;     

团头鲂种质资源及遗传改良研究进展

团头鲂作为中国特有的优良草食性鱼类,现已成为主要淡水水产养殖品种之一。然而多年来的人工繁殖、过度捕捞、环境污染等因素,导致团头鲂种质资源出现混杂并受到衰退的威胁,开展团头鲂种质资源保护和遗传改良研究势在必行。本文总结了团头鲂形态学、细胞遗传学、分子群体遗传学和基因组等种质资源研究方面的成果,并简要概括了杂交育种、选择育种、雌核发育等方法在团头鲂遗传改良方面所取得的进展,以期为团头鲂种业的可持续发展提供基础资料。     

不同倍性团头鲂群体遗传变异的初步分析

从鲤的微卫星DNA标记中筛选4对有效引物，进行不同倍性团头鲂遗传变异的微卫星DNA分析。结果表明：（1）4对引物中有2对能在不同倍性团头鲂五群体中探测到多态性，其等位基因数为4～6个，大小在131～307bp之间。发现两个等位基因（MFW19—175和MFW19—256）可作为异源3n特异的微卫星DNA标记。（2）不同倍性团头鲂五群体内的Shannon多样性指数为0．0562～0．2887，Nei’s基因多样性指数为0．0315～0．1969，平均遗传距离为0．0395～0．1542，不同倍性团头鲂群体存在较大的遗传变异。（3）反交3n、异源3n、正交3n和同源4n—F1群体的Shannon多样性指数和Nei’s基因多样性指数均显著地高于2n群体（P〈0．05）。（4）分子方差分析和聚类分析的结果表明：五群体分子系统树分成明显的两支，同源4n—F1、正交3n、反交3n和异源3n为一支，2n为另一支。     

不同倍性团头鲂群体遗传变异的初步分析

从鲤的微卫星DNA标记中筛选4对有效引物,进行不同倍性团头鲂遗传变异的微卫星DNA分析。结果表明：（1）4对引物中有2对能在不同倍性团头鲂五群体中探测到多态性,其等位基因数为4～6个,大小在131～307bp之间。发现两个等位基因（MFW19—175和MFW19—256）可作为异源3n特异的微卫星DNA标记。（2）不同倍性团头鲂五群体内的Shannon多样性指数为0．0562～0．2887,Nei’s基因多样性指数为0．0315～0．1969,平均遗传距离为0．0395～0．1542,不同倍性团头鲂群体存在较大的遗传变异。（3）反交3n、异源3n、正交3n和同源4n—F1群体的Shannon多样性指数和Nei’s基因多样性指数均显著地高于2n群体（P〈0．05）。（4）分子方差分析和聚类分析的结果表明：五群体分子系统树分成明显的两支,同源4n—F1、正交3n、反交3n和异源3n为一支,2n为另一支。     

高温应激下果寡糖水平对团头鲂血液免疫和抗氧化指标的影响

为研究高温应激条件下果寡糖(FOS)水平对团头鲂Megalobrama amblycephala血液免疫和抗氧化指标的影响,将360尾体质量(13.5±0.5)g的团头鲂随机分为3组,每组设4个重复,每个重复放30尾鱼,3组分别投喂含有果寡糖0(对照)、0.4%和0.8%的日粮,饲养8周后,用34℃的高温对鱼进行高温应激试验,并采用比色法和酶联免疫吸附法对团头鲂血液免疫和抗氧化指标进行测定。结果表明:高温应激前,谷草转氨酶(GOT)和碱性磷酸酶(AKP)活力各组间无显著性差异(P0.05);FOS添加组的谷丙转氨酶(GPT)活力显著低于对照组(P0.05);0.4%FOS组的GPT活力在应激后24 h显著低于对照组(P0.05),而0.8%FOS组与对照组无显著性差异(P0.05);0.4%FOS组AKP活力在应激后12 h显著高于其余两组(P0.05);0.4%FOS组补体3(C3)和补体4(C4)活力在应激前显著高于对照组(P0.05),0.4%FOS组补体C4含量在应激后3 h和6 h时显著高于对照组(P0.05);添加FOS后,超氧化物歧化酶(SOD)活力有升高趋势,但各组间无显著性差异(P0.05);过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化酶(T-AOC)活力在高温应激后呈现先升高后降低的趋势,并在6 h时达到最大值;0.4%FOS组CAT活力在应激前显著高于对照组(P0.05),而该组T-AOC活力在应激后3、6 h显著高于对照组(P0.05);丙二醛(MDA)含量在应激后呈现上升的趋势,且0.4%FOS组在应激前和应激后48 h时显著低于其他两组(P0.05);果寡糖添加水平和采样时间两者间无显著的交互作用(P0.05)。研究表明,饲料中添加0.4%的FOS能够提高团头鲂血液的免疫指标水平和抗氧化能力,增强团头鲂抗高温应激的能力。     

梁子湖、鄱阳湖和淤泥湖团头鲂的形态学比较

对团头鲂的3个种质资源区(梁子湖、鄱阳湖和淤泥湖)群体的可量性状和可数性状进行了多元统计分析。对可数性状的方差分析结果表明,3个团头鲂群体在侧线鳞数、侧线上鳞数、侧线下鳞数、胸鳍鳍条数以及臀鳍鳍条数上存在显著性差异;以体长作为协变量对可量性状进行的协方差分析显示,3个团头鲂群体在全长、体高、头长、头宽、尾柄长、尾柄高、背前区长和腹鳍前长存在显著性差异。对可量性状建立判别函数以及对可量性状平均值进行聚类分析表明梁子湖团头鲂与鄱阳湖团头鲂在外部形态上更为相似。主成分分析构建了3个主成分,其贡献率分别为39.78%、22.63%和6.53%,累计贡献率为68.95%。多元统计分析显示梁子湖群体和淤泥湖群体之间的形态差异最大,而梁子湖和鄱阳湖的比较相似。通过计算变异系数,根据Mayr等提出的75%规则,认为它们的形态差异是种内不同地理种群的差异。     

团头鲂微卫星多重PCR体系的建立及应用

利用团头鲂Megalobrama amblycephala 20个微卫星标记组合建立了6个微卫星多重PCR体系,包括2个四重PCR和4个三重PCR体系。利用构建的6个微卫星多重PCR体系评估了团头鲂淤泥湖群体的遗传多样性,结果表明,平均等位基因数为5.8,平均期望杂合度和平均观测杂合度分别为0.72和0.77,平均多态性信息含量为0.601,20个位点中有9个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。本研究中筛选出的多重PCR组合为团头鲂的群体遗传结构分析和亲子鉴定等研究提供了技术基础。     

梁子湖团头鲂的年龄和生长特征

为了解梁子湖团头鲂Megalobrama amblycephala的种群现状,于2011年7月-2012年6月采集310尾样本,以鳞片作为鉴定材料,对团头鲂的年龄和生长特征进行研究.结果表明：团头鲂年轮环纹呈疏密切割型,偶见幼轮,3龄以上个体可见生殖痕;种群体长分布范围为74.1～362.8mm,优势体长为180 ～320 mm,占群体总数的81.29％;群体由1～6龄共6个龄组组成,优势年龄组为3～4龄,占总渔获物的55.48％;体长（L）与鳞径（R）呈线性关系,关系方程为L=34.656R＋25.21;体长与体质量（W）呈幂函数关系,关系方程为W=1×10-5L3.1228,幂指数接近3,属匀速生长型;拟合Von Bertalanffy方程为Lt=452.36（1-e-0.2407（t＋0.2813））,Wt=2034.61（1-e-0.2407（t＋0.2813））3.1228,生长拐点时间ti=4.46龄,此时体长Li=307.78 mm,体质量Wi=607.70 g.研究表明,梁子湖的团头鲂资源量日趋减少,种群出现了明显的小型化趋势,应当采取保护措施,以利于资源的恢复和增殖.     

基于线粒体D-loop区分析团头鲂四个养殖群体的遗传多样性

为了解安徽省团头鲂(Megalobrama amblycephala)种质资源现状,本研究基于来自4个群体的120个样本的线粒体D-loop区,分析了其遗传多样性及群体结构。遗传多样性分析结果表明:共检测到16个变异位点和14种单倍型,单倍型多样指数为0.20-0.47,核苷酸多样性指数为0.00024-0.00224。群体结构分析显示:群体间发生了不同程度的分化,分化系数为-0.0138至0.219,AMOVA分析表明变异来源全部来自个体间,单倍型网络图显示群体间可通过单倍型Hap_2连接。综上所述,4个群体可能经历了奠基者事件,遗传多样性丢失严重,群体间缺乏分化。本研究揭示了4个团头鲂群体的遗传背景,可以为安徽省团头鲂种质资源保护与利用提供参考依据。