红麻基因组提纯方法研究

本文在多种基因组提取方法的基础上,针对红麻基因组提取中的难点即富含酚类,萜类,单宁,果胶等物质。提出了利用１％抗坏血酸保护单宁,多酚类物质不被褐化,避免了其褐化产物与ＤＮＡ形成不可逆的复合物,提高了ＤＮＡ得率;并且,提取缓冲液采用了ｐＨ条件下Ｎａ２ＣＯ３存在可加速果胶碱解,分离果胶等杂质,获得了高纯度基因组ＤＮＡ,适合ＰＣＲ扩增等分子生物学要求。     

茶树基因组DNA提纯与鉴定

采用在细胞核被裂解之前去除细胞质中的茶多酚和蛋白质，而后用ＳＤＳ裂解细胞核，异丙醇和乙醇沉淀基因组ＤＮＡ的方法，分别从不同茶树品种新梢、干梢及冰冻新梢中成功地提取和纯化基因组ＤＮＡ，并对其ＤＮＡ的得率和质量进行了鉴定。ＤＮＡ的得率在２０５～９６３ｎｇ／ｍｇ鲜重之间，所得到的ＤＮＡ样品片段均大于２１ｋｂ，适宜于进行限制性酶切和ＲＡＰＤ反应。实践证明，上述提取富含酚类物质植物基因组ＤＮＡ的方法，不仅迅速简单，而且经济有效。     

人工老化对红麻种子活力及基因组DNA的影响

以3份红麻种子为材料,对人工加速老化后种子活力变化及基因组DNA的遗传完整性进行研究.结果表明:高温(44±1)℃、高湿(95％相对湿度)老化处理后,红麻种子的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数均随老化时间的延长而降低,活力下降过程不是等速率的,品种之间存在差异;利用筛选的23对RAPD引物对3份材料的对照和不同老化处理的DNA进行遗传完整性检测,83-20和台农1号的等位基因频率都是100％,未检测到差异;检测到辽55的等位基因频率为100.85％,存在差异,经t-测验差异不显著,表明人工老化对红麻种子基因组DNA的影响不显著,即老化对红麻种质遗传完整性无显著影响.     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度,关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验,对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进,即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2.5%CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260/OD280比值检测结果为平均1.824,而且DNA得率也较高,证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果,本文还讨论了高质量DNA提取应注意的有关技术环节。     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度，关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验，对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进，即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2．5％CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260，OD2踯比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果．本文还讨论了高庸量DNA提取应注意的有关技术环节．     

十里香茶基因组DNA高效提取与RAPD方法建立

本文以嫩芽和鲜叶为材料,建立了十里香茶高效、微量基因组DNA提取方法,提取的DNAOD260/280在1.7～2.0之间,DNA产率在81.8～483.5 ng/mg之间,能够满足RPAD的需要。同时建立了十里香茶RAPD分子标记方法,25μL PCR反应体系中包含:50 ng DNA模板,1.2μL引物,2.5μL 10×PCR Buffer,2.5μL 25 mMMgCl2,2μL 10 mM dNTP,14.8μL ddH2 O1,U Taq聚合酶。PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min4,0个循环后72℃延伸10 min。15个RAPD随机引物以十里香1号DNA为模板,分别扩增出1～7条带。     

水稻基因组DNA简易制备方法

介绍了一种用于PCR的水稻基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(1～50mg)样品、适量提取液(500μL)和一粒钢珠放入2mL离心管,在细胞破碎仪中粉碎2min,经离心后可直接取少量(约5μL)上清液作为PCR的模板DNA,也可进一步根据需要实现高质量DNA的提取。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,一个人可以在10min内完成96份样品DNA的简易制备,特别适合高通量的分子检测。     

转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究

以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果...     

红麻施用稀土的效果与技术研究

通过对红麻施用稀土的生理效应及施用技术的研究表明,稀土能有效地促进红麻根系和纤维细胞发育,能有效地延长红麻生长后期的纤维积累时期,提高红麻抗塑能力,增加单株纤维产量,增产幅度１．３７％～１２．９１％,并摸索出一整套筒便易行的施用方法。生产上大面积推广应用１４４６７公顷,产生社会效益７５６．９２万元。     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定

采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标记。本研究发展的这一快速、简便、适于麻类作物及其近缘种植物的总DNA提取方法，将有助于在DNA分子水平研究麻类种质资源的遗传多样性。     

球磨机高通量提取甘蔗叶片DNA研究

简便快速地获得高质量、高纯度的DNA模板是进行分子遗传学研究和大批量分子检测的基础。常用的液氮手工研磨提取DNA方法存在着耗时、费力、污染等诸多不足。利用从美国引进的球磨机,根据甘蔗叶片的特点,采用国产钢珠,通过优化实验步骤,建立了一种高通量制备甘蔗叶片DNA的方法,其中,叶片快速研磨使用不锈钢珠的直径为4 mm,对叶片进行液氮预冻,时间为30～45 min,叶片用量为50～100 mg,打磨时间为30～40 s。这种方法缩短了提取DNA的时间,提高了效率,而DNA质量与经典方法相当,能够满足分子生物学研究的需要。     

内参法在线粒体DNA纯度鉴定中的应用

为了确定普通差速离心法提取的小麦线粒体DNA(mtDNA)的纯度,以小麦肌动蛋白β亚基(β-Actin)、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基(RabcL)和细胞色素C 氧化酶第三亚基(COXIII)基因的片段作为内参标记,依靠聚合酶链式反应(PCR)及琼脂糖凝胶电泳技术,对提取的mtDNA进行了检测.结果表明,普通差速离心法提取的mtDNA中混杂有核DNA和叶绿体DNA(ctDNA).对提取的mtDNA稀释后再进行内参法检测,结果发现,当mtDNA稀释到DNA原液的300～400倍时,混杂其中的核DNA已达不到PCR反应的敏感度,但mtDNA、ctDNA仍能满足作为PCR反应体系模板的要求.此时,提取到的mtDNA可视为无核DNA污染的细胞质基因组DNA.     

玉米DNA的小量快速提取

以玉米的幼叶为实验材料,用小量快速法提取玉米总DNA.提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,结果发现DNA质量较好,所得的DNA可用于RAPD和DNA酶切等技术.此法具有提取速度快、DNA质量好和经济实用等优点,为玉米及其他植物DNA的提取提供了一个快速、简便的途径。     

甜菜叶绿体DNA分离纯化方法

通过研究建立了适宜甜菜ctDNA的分离纯化方法，应用该方法可以获得高纯度、高得率的甜菜ctDNA。且产物可直接用于限制性内切酶酶切分析。     

欧文氏杆菌CXJZ95-198基因组文库的构建

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种Erwinia carotovora CXJZ95-198的基因组文库，结合透明圈法，筛选到了8个甘露聚糖酶基因阳性克隆，并采用PCR方法对它们进行了分析鉴定，结果表明它们含有同一个甘露聚糖酶基因。     

A Simple Method for Preparation of Rice Genomic DNA

The extraction of DNA is often the most time consuming and laborious step in high-throughput molecular genetic analysis and marker assisted selection(MAS)programs.A simple method for preparation of rice genomic DNA was developed.A small amount(1-50 mg)of leaf tissue of rice seedling,500μL of extraction buffer,and one steel bead were put into a 2-mL microcentrifuge tube.After vigorously mashing for 2 min,5μL of supernatant was directly applied to PCR amplification.Otherwise,the supernatant was precipitated with two times volume of ethanol to obtain high quality genomic DNA.This method is simple,rapid,low cost,and reliable for PCR analysis.One person can manipulate as many as 96 samples for PCR in 10 min.It is especially suitable for genotyping of large number of samples.     

SDS法提取石斛基因组DNA的研究

以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析。结果表明：不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang's配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30～40 min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加