窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.Eef-10的鉴定及活性成分分析

【目的】确定内生真菌Eef-10的分类地位,分离和鉴定该真菌中的次生代谢产物并评价其抗细菌和抗肿瘤细胞活性,以期得到具有抗细菌和抗肿瘤活性的天然活性化合物。【方法】内生真菌的鉴定采用形态学和分子生物学相结合的方法;次生代谢产物的分离和纯化主要采用减压硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20和半制备高效液相色谱等方法;化合物的鉴定主要依据~1H NMR和~(13)C NMR等波谱学数据以及相关的参考文献;采用MTT显色法测定了次生代谢产物对5种不同供试细菌的抑制活性;采用CCK8法测定了次生代谢产物对2种不同癌细胞的抑制活性。【结果】从内生真菌Eef-10中分离到的3个化合物,分别鉴定为Atraric acid(化合物Ⅰ)、2, 4-二羟基-3, 6-二甲基苯甲酸乙酯(Ethyl 2, 4-dihydroxy-3, 6-dimethylbenzoate)(化合物Ⅱ)和4-甲基-5, 6-二氢-2H-吡喃-2-酮(4-methyl-5, 6-dihydro-2 H-pyran-2-one)(化合物Ⅲ)。化合物Ⅱ对5种革兰阴性细菌表现出强抑制活性,最大半数抑制质量浓度(IC_(50))为35.87～55.50μg/mL,化合物Ⅰ的IC_(50)为67.25～130.55μg/mL,化合物Ⅲ的IC_(50)均大于200μg/mL。抗肿瘤细胞活性的测定结果表明,化合物Ⅱ对人肝癌细胞株Hep-G2的IC_(50)为1.50μg/mL,活性强于阳性对照喜树碱(IC_(50)为3.6μg/mL)。【结论】从内生真菌Chaetomium sp. Eef-10中分离得到化合物Ⅰ～Ⅲ,化合物Ⅱ对桉树青枯病菌和Hep-G2细胞具有较好的抑制作用。     

戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究

研究戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖活性有效部位的化学成分及其抑制肿瘤细胞活性。采用液体深层发酵制备戴氏虫草菌丝体,MTT法筛选其抑制肿瘤细胞增殖活性的有效部位,反复正相柱层析,Sephadex LH-20等方法分离纯化其有效部位中的化学成分,利用EI、ESI及1D-NMR等技术对其结构进行鉴定;并研究他们对肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果显示,戴氏虫草菌丝体石油醚、乙酸乙酯萃取部位为抑制肿瘤细胞增殖活性部位,并从中分离得到6个化合物,分别为反式-16-十八碳烯酸(化合物1)、壬二酸(化合物2)、5α,8α-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(化合物3)、亚油酸甲酯(化合物4)、亚油酸(化合物5)和十七-烷醇(化合物6)。活性检测表明,化合物2对舌癌Tca-8113细胞增殖具有较高的抑制活性,IC50值为31.90μmol/L,化合物3对乳腺癌MDA-MB-435细胞和BT474细胞具有较高的细胞增殖抑制活性,IC50值分别为25.57、26.31μmol/L。从戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的活性部位中分离到6个化合物,化合物1~2、4~6为首次从该菌丝体中分离得到。化合物2、3分别选择性地对Tca-8113细胞和MDA-MB-435细胞、BT474细胞有较强的细胞增殖抑制活性,可能为戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的有效成分。     

新型杂环膦酸酯衍生物的合成与生物活性

为了获得广谱、高效的活性先导物,我们在前期研究工作的基础上,结合药物设计原理,采用简便方法合成了一系列新型杂环膦酸酯衍生物,其结构经IR,(~1H,~(13)C,~(31)P,~(19)F)NMR和HRMS(ESI)等确证与表征.生物活性测试结果表明,部分化合物具有抗大肠杆菌、铜绿假单胞杆菌及金黄色葡萄球菌等活性,尤其是化合物A_4,A_8,A_(22),A_(24),A_(27)和A_(28)抗菌活性好,与对照药剂氨苄西林(Ampicillin)的MIC接近或相当.同时,发现部分化合物具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其中化合物A_(24)和A_(28)分别对人结肠癌细胞HT29和人肺癌细胞A549的IC_(50)为18.0±0.7μmol/L和17.1±1.3μmol/L,接近对照药SAHA(IC_(50)分别为14.3±1.1μmol/L和12.5±1.8μmol/L).在此基础上研究其构效关系,对进一步结构改造与优化具有十分重要的意义.     

昆仑雪菊中2个黄酮类化合物的分离鉴定及其抗氧化活性评价

从昆仑雪菊中分离纯化具有抗氧化活性的单体化合物。以抗氧化活性为指标,采用活性追踪的方法,筛选最佳的昆仑雪菊黄酮类化合物提取溶剂并对粗提物进行分离纯化得到单体化合物,并采用铁离子还原/抗氧化力测定法(FRAP法)、1,1-二苯基-2-硝基苯肼自由基清除法(DPPH法)和2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐自由基清除法(ABTS法)对化合物进行活性评价。结果表明:最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到2个单体化合物;采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为2',3,4,4'-四羟基查尔酮,化合物2为4,2',4'-三羟基查尔酮。抗氧化活性测试结果表明,化合物1和化合物2的FRAP值均小于阳性对照α-生育酚,对DPPH自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为(45.32±0.26)μmol·L-1和(64.78±0.79)μmol·L-1,均低于阳性对照α-生育酚,对ABTS自由基清除率的IC50分别为(27.49±0.86)μmol·L-1和(32.13±2.79)μmol·L-1,均低于阳性对照α-生育酚。结论:从昆仑雪菊中分离得到的2个黄酮类化合物均具有很强的抗氧化活性。     

鹅不食草抗肿瘤活性的研究

[目的]研究鹅不食草的抗肿瘤活性成分.[方法]利用柱色谱和反相HPLC等手段进行分离纯化,应用NMR等方法鉴定结构及进行了MTT法抗肿瘤试验.[结果]从鹅不食草中分离鉴定了化合物1（Dihydrohelenalin）、化合物2（Helenalin）、化合物3（Brevilin-A）、化合物4（Amicolide C）和化合物5（Arnicolide D）,并且均具有一定的抗肿瘤细胞活性.[结论]5个化合物有一定抑制肿瘤细胞生长作用.     

天胡荽抗肿瘤活性成分研究

[目的]研究天胡荽的抗肿瘤活性成分.[方法]利用色谱手段进行分离纯化,应用NMR方法鉴定结构,并进行MTT法抗肿瘤试验.[结果]从天胡荽中分离鉴定了4种化合物（化合物1～4）.天胡荽的各萃取部位对LA795细胞株有一定的抑制作用,其中以正丁醇层萃取物在高浓度800雌/ml时的抑制作用较强,而石油醚和乙酸乙酯萃取物的抑制作用相对较弱.单体化合物对LA795细胞株的抑制作用均较弱.[结论]4个化合物有一定抑制肿瘤细胞生长作用.     

海洋放线菌Streptomyces sp.WQ-2化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对海洋放线菌Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,并利用质谱、核磁共振谱及文献比对方法鉴定化合物的结构。结果表明:从Streptomyces sp.WQ-2固体发酵产物中分离得到5个化合物,分别被鉴定为D-阿洛醇(1)、胡萝卜苷(2)、5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid(3)、麦角甾醇(4)和lumichrome(5)。其中,化合物1、3和5首次从Streptomyces sp.发酵产物中分离获得。     

澳大利亚厚皮海绵化学成分分离鉴定及其抗肿瘤活性研究

为进一步探求澳大利亚厚皮海绵Craniella australiensis在海洋药物研制中的作用,采用硅胶柱层析及Sephadex LH-20凝胶过滤层析等技术,从澳大利亚厚皮海绵乙酸乙酯层浸膏中分离纯化出两种化合物,并通过波谱数据与文献对照的方法对化合物进行了结构鉴定,采用CCK-8法对2个化合物进行体外抗肿瘤细胞活性试验。结果表明:从澳大利亚厚皮海绵分离得到的2个化合物分别为Aldisin和2-Bromoaldisin;体外抗肿瘤细胞活性试验显示,化合物Aldisin和2-Bromoaldisin对人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2)、人结肠癌细胞(HCT116)、人肝癌细胞(7721)、人胶质瘤细胞(U251)和人肾癌细胞(A498)均具有抑制活性的作用,其中化合物Aldisin处理7721细胞的IC50为(67.56±3.06)μg/m L,抑制作用显著。研究表明,两种化合物属于天然产物,可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。     

白花曼陀罗细胞悬浮培养生物转化外源氢醌合成熊果苷的研究*

 研究了白花曼陀罗细胞悬浮培养对外源氢醌的糖基化。转化细胞来自白花曼陀罗嫩茎在LS固体培养基上诱导产生的愈伤组织。白花曼陀罗悬浮培养细胞不能分泌熊果苷,但能糖基化外源氢醌合成熊果苷。当氢醌添加量达240μmol/100mL培养物时,约有93.4%的氢醌转化形成了熊果苷,并应用多种色谱技术进行分离纯化,进行了HPLC分析和结构鉴定。     

灰毛豆叶片甲醇提取物中黄酮类物质的研究(英文)

[目的]研究灰毛豆叶片甲醇提取物中黄酮类化合物,并测试它们对斜纹夜蛾卵巢细胞(SL细胞)的细胞毒性。[方法]对甲醇提取物的分离采用了多种色谱技术分离纯化,并结合各种光谱分析(包括UV,1D,2D NMR分析以及HR-ESR-MS)进行结构鉴定。细胞毒性的测试采用的是MTT法。[结果]从灰毛豆叶片甲醇提取物中分离得到6个黄酮类化合物:6-methoxykaempferol(1),6-methoxykaempferol7-O-α-rhamnopyranoside(2),6-methoxykaempferol3-O-α-rhamnopyranosyl(1→2)[α-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-galactopyranoside(3),6-methoxykaempferol 3-O-α-rhamnopyranosyl(1→2)[α-rhamnopyranosyl(1→6)]-β-galactopyranoside-7-O-α-rhamnopyranoside(4),pongachin(5),5,7-dimethoxy-8-(3-hydroxy-3-methylbut-1Z-enyl)flavanone(6)。除了化合物5之外其余化合物均为首次从灰毛豆中分离得到。细胞毒性测试发现pongachin(5)具有明显的细胞毒性,其IC50为4.4 mg/L,化合物1,3和5的细胞毒性均大于阳性对照鱼藤酮。[结论]灰毛豆叶片中6-methoxykaempferol类化合物(1-4)含量相对较大,化合物1,3和5在对SL细胞的活性实验中细胞毒性均大于阳性对照鱼藤酮,值得进一步研究。     

中国蜂胶水提物抗肿瘤活性功效成分研究

拟研究中国蜂胶水提取物(Chinese propolis water extract,简称CPWE)及其分离纯化的11种化学成分(咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、短叶松素、咖啡酸苄酯、咖啡酸苯乙酯、芹菜素、松属素、白杨素、高良姜素)对神经胶质瘤细胞(U87和U172)的细胞毒性。将正常培养的神经胶质瘤细胞(U87和U172)经不同浓度的蜂胶提取物(25、50、100 mg/L)及其分离纯化的11种化学成分(40、80、160μmol/L)分别处理24、48 h,在倒置显微镜下观察其细胞形态,用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,简称SRB)比色法检测细胞存活率。结果表明,咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸、3,4-二甲氧基肉桂酸对神经胶质瘤细胞均没有细胞毒性;短叶松素、咖啡酸苄酯、咖啡酸苯乙酯、芹菜素、松属素、白杨素、高良姜素明显抑制神经胶质瘤细胞的增殖。由结果可知,中国蜂胶水提物的抗肿瘤功效成分主要是黄酮类化合物和酯类化合物。     

络石内生真菌Myrothecium roridum(IFB-E009)次生代谢产物的研究

该试验从络石(Trachelospermum jasminoides)内生的露湿漆斑菌属真菌Myrothecium roridum(IFB-E009)液体发酵产物中分离并鉴定了8个化合物,其中化合物1～4为单端孢霉烯类化合物,5～6为酰胺类化合物,7为环二肽化合物,8为尿嘧啶。活性测试表明,化合物1、4有细胞毒活性,对SW1116(人结肠癌细胞株)具有抑制作用,IC50分别为25.68和38.93μmol/L,而对照药阿霉素的IC50为5.31μmol/L。该研究可为开发利用药用植物内生菌提供理论和实践依据。     

牛皮消化学成分研究

为了研究贵州牛皮消块根乙酸乙酯萃取部位的化学成分,运用硅胶柱、制备薄层等色谱方法分离纯化,经UV、NMR、MS等多种波谱学分析方法对分离得到的化合物进行结构鉴定,鉴定出5个化合物:咖啡酸甲酯(1)、香草醛(2)、2,5-二羟基苯乙酮(3)、白首乌二苯酮(4)和β-谷甾醇(5)。     

一种硒代蛋氨酸衍生物的合成表征与安全性评价

以L-硒代蛋氨酸、月桂酰氯和油酰氯为主要原料通过肖顿-鲍曼缩合和酯化反应得到了N-酰基-L-硒代蛋氨酸衍生物,产物运用核磁共振(NMR)技术(~1H NMR,~(13)C NMR)表征确认。采用噻唑蓝(MTT)比色法研究了目标化合物对人体正常肝细胞(HL-7702)和大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)的细胞毒性。结果表明,合成的目标化合物对人体正常肝细胞(HL-7702)和大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)细胞毒性较低,当2种目标化合物的浓度达1 920μmol/L时,细胞存活率均大于75%,证明合成的硒代蛋氨酸衍生物是一种低毒的硒代化合物,对于扩大硒代蛋氨酸在油脂类食品和农产品加工领域的应用具有一定潜力。     

一株海洋真菌与细菌共培养次级代谢产物的研究

对海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 43300共培养的次级代谢产物进行分离纯化与结构鉴定,综合运用多种色谱方法从共培养发酵产物中分离得到5个化合物,采用NMR等光谱方法并参照文献将其分别鉴定为吲哚-3-乙酸(1)、青霉酸(2)、diorcinol (3)、orcinol (4)和paraherquanide N (5)。同时采用质谱-分子网络及GNPS平台技术鉴定了3个吲哚生物碱类化合物notoamide B (6)、paraherquanide F (7)和paraherquamide E (8)。该研究表明,共培养是激活微生物沉默基因簇,发现抗生素类化合物的一种有效方法。     

山羊睾丸支持细胞分离培养及其氧化应激效果研究

为探究在体外培养过程中山羊睾丸支持细胞(GSCs)存在的氧化应激问题,采用2步酶消化法分离和纯化GSCs,通过形态学观察、MTT法、油红染色和流式细胞鉴定细胞活度和纯度,再用不同浓度的H2O2处理GSCs,研究GSCs的活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及其DNA指数(DI)的变化。结果表明:GSCs形态为多角形状;在培养至第5天时GSCs活性最强;油红O染色鉴定多数细胞胞质含有红色的脂滴;GATA4阳性细胞率达到88.27±3.29%;添加50μmol/L H2O2组细胞存活率与对照组相比差异不显著(P0.05),其它各组均显著低于对照组(P0.05);添加50μmol/L H2O2组MDA含量和SOD的活性均与对照组无显著性差异(P0.05),而其他各组均与对照组有显著差异(P0.05);细胞DNA倍体检测发现添加50μmol/L H2O2时,细胞DI为1.08±0.01,未出现异倍体;其他各组细胞DI分别为1.15±0.02、1.20±0.03、1.26±0.03和1.32±0.01,均有异倍体产生。本研究分离纯化了GSCs,并进行培养和鉴定,200μmol/L H2O2处理GSCs后,SOD活性显著降低,MDA含量显著增加,出现明显的异倍体,200μmol/L H2O2是建立GSC氧化应激模型的适宜浓度,以此为后期建立GSC氧化应激模型提供研究基础。     

霉变玉米分离真菌YMF-7产物中毒素成分的识别

[目的]研究霉变玉米分离的真菌YMF-7代谢产物中的毒性成分。[方法]利用海虾毒性指标,采用Sephadex LH-20、硅胶和HPLC等柱色谱技术对YMF-7毒性菌株发酵物进行毒性追踪分离。[结果]共分离得到2个化合物,结构鉴定为化合物1为Gliotoxin(6),化合物2为Gliocladin(7)。经海虾毒性测定,结果表明,化合物1对海虾的LC50值为0.34μg/ml,化合物2对海虾的LC50值为2.10μg/ml。[结论]该2种化合物为YMF-7发酵物中的主要毒性成分。     

昆仑雪菊中血管紧张素转化酶活性抑制成分的分离鉴定

[目的]从昆仑雪菊中分离纯化抑制血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)活性成分,鉴定其化学结构,并评价其对ACE的抑制活性.[方法]以抑制ACE活性为指标,筛选出最佳的昆仑雪菊萃取溶剂,提取得到粗提物,活性跟踪分离纯化粗提物中的单体化合物,并对单体化合物的活性进行评价.[结果]最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到5个单体化合物,采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为咖啡酸甲酯;化合物2为脱镁叶绿素a;化合物3为β-香树脂;化合物4为异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;化合物5为对香豆酸甲酯.活性测试结果表明:化合物1、4和5都表现出了较强的抑制ACE活性,其中化合物4对ACE的抑制活性最强,IC50为(167.02±4.32) μmol·L-1,其次为化合物1和5,IC50分别为(237.74±5.82) μmol·L-1和(331.57±4.69) μmol ·L-1,提示这些化合物可能为昆仑雪菊中潜在的降血压物质.[结论]本研究结果为深入研究昆仑雪菊的降血压作用机制提供了物质基础.     

槲皮素多核铜配合物的制备及活性表征

槲皮素金属配合物具有多种生理活性,其中肿瘤细胞抑制活性是重要研究课题之一。选用槲皮素和苯甲酸铜合成槲皮素铜配合物,通过元素分析、红外、紫外对配合物进行分析;通过体外细胞实验检测配合物对肝癌细胞Hep3B细胞形态与细胞毒性的影响;应用凝胶电泳法,研究配合物对超螺旋p BR322 DNA的裂解作用,初步探索抗肿瘤作用机制。结果分析表明槲皮素和苯甲酸铜形成两种配合物,槲皮素和铜比分别为2:1和1:4配位形式,其中1:4配位为新型配合物。MTT实验表明两种配合物对肿瘤细胞具有抑制作用,且呈剂量依赖和时间依赖,配合物对Hep3B肝癌细胞的IC_(50)值分别为122.36μg·mL~(-1)和102.89μg·mL~(-1)。DNA裂解实验显示,两种槲皮素铜配合物具有核酸酶活性,能高效裂解DNA,1:4配位的新型配合物表现出较强的裂解能力。     

血红铆钉菇子实体化学成分GC-MS分析及 石油醚萃取物抗肿瘤活性组分筛选

为了分析血红铆钉菇子实体的化学成分并对其石油醚萃取物进行抗肿瘤活性筛选。试验采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS),通过硅胶柱层析对石油醚萃取物进行组分分离,采用CCK-8法测定各组分对人肺癌细胞(NCI-H460)和人胃癌细胞(SGC-7901)的增殖抑制作用。结果表明,从血红铆钉菇子实体中共鉴定出60个化合物,占提取物总量的96.074%。主要以烷烃类、醛酮类、酯类、脂肪酸类为主,分别占13.503%、17.317%、17.777%、25.738%。石油醚萃取物经硅胶柱层析分离共得8个组分(A、B、C、D、E、F、G、H),其中组分(A、B、C、H)对人肺癌细胞(NCI-H460)有增殖抑制作用,组分(A、B、C、F、H)对人胃癌细胞(SGC-7901)有增殖抑制作用,并均呈浓度依赖性。组分(A、B、C、H)对人肺癌细胞(NCI-H460)的IC_(50)分别为790.46、842.05、876.12、1 479.55μg/mL,组分(A、B、C、F、H)对人胃癌细胞(SGC-7901)的IC_(50)分别为619.29、465.45、1 137.88、1 096.11、754.48μg/mL。说明通过对血红铆钉菇子实体GC-MS分析及抗肿瘤活性筛选,石油醚萃取物组分(A、B、C、F、H)具有一定的抗肿瘤活性,可能含有抗肿瘤活性的单体化合物。