间接免疫酶组织化学法检测雏鹅感染鸭疫里默氏杆菌的研究

应用鹅源血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)作为抗原免疫兔制备兔抗RA的IgG，建立了检测雏鹅感染鸭疫里默氏杆菌的间接免疫酶组织化学法(Indirect Immunoperoxidase Staining，IIS)，该法与大肠杆菌（O1、O8、O79、O138)、鸭沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌(5：A)感染发病和死亡雏鹅组织不出现阳性反应而与RA感染发病死亡雏鹅组织出现特异性阳性反应。RA人工发病死亡雏鹅可在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、回肠、直肠、肺脏、十二指肠、空肠和盲肠检测到RA抗原，RA抗原分布于细胞胞浆、组织间隙和血液，检测RA人工感染病例与RA肝脏分离符合率为100％，检测临床可疑病例的血清1型RA的阳性率(92.96％)比细菌分离率(75．12％)高。该法具有特异、直观和敏感的特点，可用于雏鹅RA人工感染和临床感染的诊断、检测及RA感染雏鹅后抗原定位和RA致病机理的研究。     

鸭疫里默氏杆菌明胶酶的纯化及特性分析

为阐明鸭疫里默氏杆菌明胶酶的特性,试验以液化明胶的AF株为研究对象,纯化了其明胶酶,并对该酶进行热稳定性、蛋白化学修饰剂抑制作用、金属离子及络合物的影响和致病性等特性分析。结果表明,鸭疫里默氏杆菌AF株的培养上清经超滤浓缩、70%硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、疏水柱层析和凝胶柱层析,可获得纯化的明胶酶,SDS-PAGE显示单条带,相对分子质量约59000。该酶在65℃迅速失活,Cu2+、Cd2+、Mn2+、Hg2+对酶活性有强烈的抑制作用,络合物EDTA和EGTA的抑制作用可被Ca2+逆转,PMSF、NBS和AAD可抑制其活性。明胶酶对雏鸭具有毒力,能缩短鸭疫里默氏杆菌致病菌株感染的潜伏期和致死动物的时间,显著提高动物的死亡率。以上结果表明,鸭疫里默氏杆菌明胶酶是一种具有致病作用的金属蛋白酶。     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌荚膜免疫的研究

用盐浸法提取了I型鸭疫里默氏杆菌(RA)的荚膜,并制成油佐剂疫苗.其免疫原性测定结果表明:用荚膜粗提物免疫雏鸭可得到很好的免疫保护效果(9/10).同时进行了RA荚膜油佐剂疫苗与各常规佐剂疫苗的免疫效力比较,免疫保护效果依次为:荚膜油乳剂苗、油乳剂灭活苗、蜂胶灭活苗、铝胶RA灭活苗、无佐剂RA灭活苗.结果显示,鸭疫里默氏杆菌荚膜免疫的研究为进一步研制亚单位疫苗打下基础.     

鸭疫里默氏杆菌免疫原性研究

本研究对Ｉ型鸭凤里默氏杆菌的荚膜提取物的免疫的性进行了研究,结果表明,荚且提物和经过苯酚抽纯化后的荚膜提取物经２次免疫７日龄北京鸭后对同源细菌的攻毒保护率分别为９０％和７０％;采用ＥＬＩＳＡ检测荚膜提取物免疫后抗体产生的免疫组,前者抗体下降速度较后者慢。     

鸭疫里默氏杆菌研究现状

为调查鸭疫里默氏杆菌的研究现状，方法：综述了鸭疫里默氏杆菌的诊断方法、致病机理、疫苗研制、耐药性现状以及药物防治方面取得的重大成果，结果：发现各方面研究成果显著，总结：提出检测不同地区RA的优势血清型和耐药性，成为一项常态化的工作。     

鸭疫里默氏杆菌病原及其防控关键技术研究

文章回顾了鸭疫里默氏杆菌的病原鉴定、主要抗原、耐药机制等若干基础问题的研究进展,分析了鸭疫里默氏杆菌全基因组测序工作的完成对进一步深入开展致病机理研究和疫苗研发的重要意义。同时,从我国水禽生产的角度对鸭疫里默氏杆菌病的防控关键技术进行了详细阐述。     

I型鸭疫里默氏杆菌荚膜免疫的研究

用盐浸法提取了I型鸭疫里默氏杆菌（RA）的荚膜,并制成油佐剂疫苗。其免疫原性测定结果表明：用荚膜粗提物免疫雏鸭可得到很好的免疫保护效果（9／10）。同时进行了RA荚膜油佐剂疫苗与各常规佐剂疫苗的免疫效力比较,免疫保护效果依次为：英膜油乳剂苗、油乳剂灭活苗、蜂胶灭活苗、铝胶RA灭活苗、无佐剂RA灭活苗。结果显示,鸭疫里默氏杆菌英膜免疫的研究为进一步研制亚单位疫苗打下基础。     

鸭疫里默氏杆菌病疫苗研究进展

鸭疫里默氏杆菌病是危害水禽养殖健康发展的主要疫病,本文从疫苗的应用类型及免疫机理两方面对该病疫苗近年来相关研究进行了综述.     

雏番鸭鸭疫里默氏杆菌病的诊治

１９９９年６～８月间，广东省南海市多个番鸭养殖场发生了一种急性败血性传染病，经流行病学调查、临床症状、病理变化和实验室检验，诊断为鸭疫里默氏杆菌病，经采取综合防治措施后，疫情得到了控制，现将对该病的防治体会介绍如下。l流行病学经对２０多个发病鸭群的调查，发现发病日龄最小的为９天，大的则在３８天，大部分于１５日龄左右开始发病，一直到４０多日龄出售时仍有发病，发病率为１２％～７５％，死亡率为７％～６６％，附近饲养的麻鸭等不发病，气候突变。环境恶劣、饲养密度大、不同日龄鸭群混养等都易于诱发本病，春冬、…     

浅谈鸭疫里默氏杆菌病及其防控措施

鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,由鸭疫里默氏杆菌引起,是一种急性、慢性细菌性传染病。各日龄阶段鸭均能感染,2～3周龄鸭感染后死亡率最高。鸭场一旦发病,细菌可长期存在,很难根除,给养鸭业造成了严重的经济损失。文章综述了鸭疫里默氏杆菌的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及防控措施,以期为鸭疫里默氏杆菌病的防控提供参考。     

鸭疫里默氏菌明胶酶对小鸭部分血液指标影响

用鸭疫里默氏菌明胶酶以颈静脉方式注射10日龄健康鸭,于注射后3、6、9、12 h测定部分血液指标.结果显示,注射明胶酶后雏鸭红细胞、白细胞和淋巴细胞数量显著减少(P<0.05或P<0.01);血清谷草/谷丙转氨酶活性、碱性磷酸酶活性及总胆固醇和血清葡萄糖水平显著升高(P<0.05或P<0.01).结果表明,鸭疫里默氏菌明胶酶对10日龄鸭的谷草转氨酶等血液指标影响明显.     

鸭疫里默氏菌感染对雏鸭部分免疫学指标的影响

给10日龄健康鸭颈部皮下接种鸭疫里默氏菌建立感染的动物模型,于24h、48h、72h、96h测定雏鸭部分免疫学指标。结果显示,鸭疫里默氏菌(RA)感染可导致T淋巴细胞活性,血清总补体活性,白细胞吞噬和杀菌功能,红细胞免疫功能降低,脾淋巴细胞增殖活性和分泌IgG能力随感染的严重程度增加而下降。研究结果表明,RA感染能引起雏鸭部分免疫功能的变化,具有免疫抑制作用。     

鸭疫里默杆菌重庆、四川地区分离株ompA基因的遗传变异性

为研究鸭疫里默杆菌(R.anatipestifer)外膜蛋白A(OmpA)的遗传变异性,探讨与R.anatipestifer的血清型分类间的关系,对R.anatipestifer重庆、四川地区分离株进行了生化鉴定、16SrRNA基因和OmpA的遗传多样性分析。结果显示,除DY1210株不液化明胶及DZ1212株和JJ1212株水解七叶苷外,其他分离株生化特征均一致。R.anatipestifer所有分离菌株16SrRNA基因序列相似性达99%以上,均属于同一簇。ompA基因序列分3个基因群(Ⅰ群7株、Ⅱ群8株、Ⅲ群1株),其编码氨基酸序列分3个簇(Ⅰ簇8株、Ⅱ簇7株、Ⅲ簇1株),且不同血清型菌株属于同一基因群或氨基酸簇,同一血清型属于不同的基因群或氨基酸簇。结果表明,R.anatipestifer所有分离菌株ompA所属基因群或氨基酸簇与其血清型没有明显的联系。     

鸭传染性浆膜炎母源抗体消长规律及其对后代雏鸭的保护

为研究鸭传染性浆膜炎母源抗体消长规律及其对后代雏鸭是否具有保护力,本研究采用鸭传染性浆膜炎疫苗于产蛋前免疫种鸭,并利用间接ELISA方法检测不同时间点收集的鸭蛋中卵黄抗体和对应批次孵育出的雏鸭血清抗体变化规律,以及后代雏鸭从出壳开始母源抗体的变化规律。结果表明,接种疫苗后卵黄抗体和传递到雏鸭体内血清抗体变化规律一致,接种后第6 d检测到抗体出现,27 d抗体达到峰值,之后缓慢下降。后代雏鸭母源抗体随日龄的增加逐渐降低,1日龄最高,21日龄后母源抗体消失。攻毒试验表明母源抗体对雏鸭具有一定的保护力。本研究为防治鸭传染性浆膜炎制定合理的疫苗免疫程序提供了实验依据。     

鸭疫里默氏杆菌免疫原性研究Ⅱ.荚膜提取物免疫原性测定

本研究对Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌的荚膜提取物的免疫原性进行了研究，结果表明，荚膜粗提物和经过苯酚抽提纯化后的荚膜提取物经２次免疫７日龄北京鸭后对同源细菌的攻毒保护率分别为９０％和７０％；采用ＥＬＩＳＡ检测荚膜提取物免疫后抗体产生规律显示，二者刺激机体产生的抗体水平有一定的差异，荚膜粗提物免疫组抗体水平高于纯化后的免疫组，前者抗体下降速度较后者慢。     

感染RA和DVHV雏鸭免疫功能动态变化研究

为深入探讨鸭免疫器官指数、T淋巴细胞和细胞因子动态变化与病毒性肝炎和传染性浆膜炎发生与发展的相互关系,并比较分析缙云麻鸭与绍兴鸭免疫功能与抗病性能,为蛋鸭抗性选育提供依据,试验分别以鸭疫里默杆菌(RA)和肝炎病毒(DVHV)人工感染3日龄缙云麻鸭与绍兴鸭,分析在不同的感染期脾脏、胸腺和法氏囊指数以及外周血淋巴细胞ANAE 阳性率和细胞因子的动态变化.结果表明:缙云麻鸭和绍兴鸭攻毒感染RA与DVHV后的死亡时间与脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、外周血液淋巴细胞ANAE 阳性率及IFN-γ水平均呈现正相关(P＜0.01或P＞0.1);绍兴鸭感染DVHV后的死亡时间与IL-2也呈正相关(P＜0.1),但缙云麻鸭和绍兴鸭攻毒感染RA以及缙云麻鸭感染DVHV后的死亡时间与IL-2呈负相关(P＜0.1或P＞0.1).说明雏鸭感染RA和DVHV后的死亡时间与脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数、外周血液淋巴细胞ANAE 阳性率及IFN-γ水平动态变化相关,而与血清IL-2水平的相关性还有待进一步研究.     

鸭疫里默氏杆菌病发病机理的研究Ⅱ.人工感染雏鸭病理形态学变化

以实验病理学方法对人工感染Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌(含菌量3×109CFU/mL)的20日龄天府肉鸭进行了系统病理组织学研究.眼观特征为全身浆膜及各组织器官的被膜纤维素渗出物;心脏、肝脏、脾脏肿大,胸腺、法氏囊缩小,脑水肿.病理组织学变化表现为纤维素性心包炎,肝周炎、气囊炎、脾炎和脑膜炎,腺胃和小肠出血性或坏死性炎,胰腺细胞、肌胃黏膜上皮及砂囊腺上皮细胞变性与坏死,肾小管变性与局灶性坏死,胸腺和法氏囊淋巴细胞减少.结果表明鸭疫里默氏杆菌病侵害多种组织器官,引起功能障碍致雏鸭发病死亡.     

鸭疫里氏杆菌免疫原性研究Ⅰ.荚膜的形态学观察及荚膜物质的提取

本研究应用电镜对Ⅰ型鸭疫里氏杆菌的荚膜进行了初步观察,在电镜下,负染的菌体周围呈一电子透明层;未经抗体处理的细菌超薄切片,荚膜在菌体周围呈松散的絮状结构,而应用同源抗体处理后,荚膜则呈一均匀层。同时在超薄切片中还看到细菌的空泡和外膜结构。采用十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）成功地提取了培养物上清液中的荚膜成分,经过测定比较,加入５ｍＭＣＴＡＢ时效果最佳。     

鸭疫里默氏菌感染对鸭肠道菌群结构的影响

试验旨在分析鸭疫里默氏菌（RA）感染不同时期鸭肠道菌群结构变化规律，探讨鸭疫里默氏菌对鸭肠道微生物的影响及引起鸭致病的可能机制。采用细菌16S V4-V5区扩增通用引物，扩增鸭疫里默氏菌未感染组（鸭疫里默氏菌感染0 d组），鸭疫里默氏菌感染后1、2、3、5、9和14 d的鸭直肠内容物样本DNA，将扩增得到的产物进行DNA建库后基于Ion S5^TMXL测序平台测序。测序得到的Raw Reads数据总量为4 710 688条序列，平均每个样本84 119条序列。共注释到数据库的操作分类单元（OTUs）数目为4 528。Alpha多样性分析结果表明，菌群多样性指数Shannon和Simpson在鸭疫里默氏菌感染组和未感染组间差异不显著（P>0.05），菌群丰富度指数Chao1、Ace、Observed-species和PD-whole-tree在鸭疫里默氏菌感染后0~5 d逐渐降低，从5~14 d又逐渐增加，尤其在鸭疫里默氏菌感染后3和5 d均显著低于未感染组（P<0.05）。Beta多样性分析表明，未感染组与6个时间点的感染组间菌群差异均显著（P<0.05），其中，未感染组与感染后3 d的物种差异最大，之后依次为感染后2、5、9、1和14 d。物种丰度聚类热图显示，在未感染组和不同时间感染组，物种丰度相对较高的微生物菌属均不同。在门水平，鸭疫里默氏菌感染组主要以厚壁菌门（Firmicutes）、unidentified-Bacteria、拟杆菌门（Bacteroidetes）、梭杆菌门（Fusobacteria）及变形菌门（Proteobacteria）为主；在属水平，Bacteroides在感染组和未感染组均为优势菌属，感染组中弯曲杆菌属（Campylobacter）和梭杆菌属（Fusobacterium）明显增加。本试验分析了鸭疫里默氏菌未感染组和感染不同时间组肠道菌群的差异，寻找到一些特征菌属，可为鸭疫里默氏菌的致病性研究提供理论依据。