球毛壳菌(Chaetomium globosum)小热休克蛋白HSP22.4基因克隆及表达

小热休克蛋白(sHsps_)是生物体中参与防御反应的内源细胞保护因子。为了研究球毛壳菌中(Chaetomiumglobosum)中的小热休克蛋白(AY491980)。对球毛壳菌的小热休克蛋白进行了克隆和在大肠杆菌中进行了表达。BlastX分析表明球色壳菌的小热休克蛋白与粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)小热休克蛋白在氨基酸上的序列同源性最高,为65%。将HSP22.4基因编码区插入原核表达载体pGEX-4T-2、构建成表达质粒pGEX-HSP。利用pGEX-HSP质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,结果发现在50kD处有一特异性融合蛋白带,与预期相符,说明HSP22.4基因已经在大肠杆菌中表达。本研究为进一步研究小热休克蛋白的功能奠定了基础。图6参15。     

木霉菌和毛壳菌对板栗疫病的抗生作用

哈茨木霉Trichoderma harzianumT88菌株、深绿木霉T.atrovorideT95菌株和螺旋毛壳Chaetomium spiraleND35菌株与板栗疫病菌Cryphonectria parasiticaLY菌株的平板对峙培养结果表明,木霉菌对营养和空间有强烈的竞争作用,表现在可使病原菌菌丝消解,对病菌菌丝的生长有明显的抑制作用;毛壳菌生长速度较慢,但可形成抑菌带,使病菌不扩展。室内水培枝条接种试验结果表明,接种拮抗菌的拮抗效果好,而且先接种拮抗菌后接种病原菌的处理比拮抗菌和病原菌同时接种的处理效果还好,毛壳菌没有木霉菌的作用明显。接种枝条的木霉菌、毛壳菌和病原菌的再分离结果表明,T95和ND35的定殖能力强。     

生防因子螺旋毛壳ND35的细胞壁降解酶与重寄生作用

1　IntroductionSomespeciesofthesaprophyticascomycetegeneraChaetomiumKunzeexFr .arepotentialantagonistsofseveralplantpathogenicfungi ,forexampleRhizoctoniasolaniandPythiumultimumwhichcauseseedlingdamping -offandVenturiainaequaliswhichcausestheapplescabChae…     

球毛壳菌对樟子松的侵染规律研究

榆林风沙区樟子松枯死主要发生在10—15年生幼龄林上，7月上旬至8月下旬为感病高峰期，翌年4月中旬至5月中旬为死亡高峰期。病菌孢子在整个生长季均能放散与传播，降雨节律及降雨量直接影响孢子的扩散与数量。人工接种发现：病菌的侵入期主要在6月中旬至8月中旬，潜育期半个月，侵入途径是伤口，病株感病部位及枯死枝是病原菌的越冬场所，密度高，植被盖度大的林分感病重。     

油茶种子EST文库构建及主要表达基因的分析

为研究油茶种子在油脂转化高峰期的基因表达并分离克隆与油脂合成等有关的重要基因,以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库;随机挑取2 327个克隆进行3'端测序构建EST文库.将数据完整并无X、N的1 979条cDNA序列与NCBI核酸数据库的非冗余序列进行同源性比较,确认763条cDNA序列与核酸数据库中其他物种的DNA序列具有很高或较高的同源性,可确认266种基因;有1 216个克隆序列为未知功能的基因序列.各类基因表现出不同的表达丰度,其中贮藏蛋白基因、与基因表达调控相关的基因、抗逆相关基因、种子成熟和胚胎发育相关的基因等为高丰度表达,与脂肪酸代谢相关的基因等为中丰度表达,另外还有大量的其他基因和未知功能基因在种子中表达.各类基因表达的数量和趋势与种子接近发育成熟阶段相吻合.     

毛白杨内生菌优势种毛壳ND35室内拮抗作用的研究

对毛白杨内生真菌区系种群分析 ,筛选出优势种毛壳ND35 ,并测试了它对 6种常见林果病害病原真菌的拮抗作用。结果表明 ,毛壳ND35是一种广谱性拮抗菌 ,对供试的 6种病菌存在不同程度的抑制作用。可降低病菌菌丝的生长率和孢子的萌发率 ,并对小核菌的菌核进行重寄生 ,从而抑制其萌发。毛壳ND35的菌丝还产生吸器、附着枝等结构对立枯丝核菌 (Rhizoctoniasolani)等病菌的菌丝进行重寄生 ,在显微镜下可观察到病菌的菌丝被缠绕、穿透、断裂等现象。抑菌带和抑菌圈的产生证明抗生活动是毛壳ND35的主要拮抗作用机制之一。对活体毛白杨组培苗进行人工接种试验 ,结果用毛壳ND35预先接种的苗木发病率为零 ,明显低于只接烂皮病菌的对照发病率 5 3 33%,进一步证实了毛壳ND35对植物病害的生物防治潜能。     

落叶松LaIAA2基因的克隆及表达分析

以落叶松扦插生根率存在显著差异的2个优良全同胞无性系茎和根为材料,利用抑制消减杂交(SSH)技术构建正、反2个落叶松扦插生根过程差别表达cDNA文库。序列分析获得1个AUX/IAA基因片段。运用Race技术,成功获得这个Aux/IAA基因的全长。同时,运用实时定量PCR和半定量PCR技术分析这个基因的表达谱,结果表明:LaIAA2基因在茎中高表达,叶中低表达。在生长素处理后,LaIAA2基因表达明显增加,表明这个基因受生长素调控。     

竹材木质素降解菌的筛选与鉴定*

竹材木质素的降解一直是制约竹材资源利用的重要影响因素。文章通过对49 份腐烂的竹材样品进行平板划线分离纯化得到74 株真菌,利用PDA- 愈创木酚变色及PDA- 苯胺蓝退色反应,初步筛选出具有木质素降解酶能力的4 株木质素降解菌,通过酶活力测定对初筛得到的4 株木质素降解菌进行复筛,发现FG-22 菌株具有较好木质素降解能力,对FG-22 降解菌株进行形态学和分子生物学鉴定,确定FG-22 为杂色云芝（Trametes versicolor）。     

油茶EST文库中不饱和脂肪酸合成关键酶基因的序列分析

采用生物信息学方法,从随机测序而构建的油茶优良无性系湘林1号种子EST文库中初步鉴定了与茶油脂肪酸形成相关的大部分关键酶基因,并对其中几个直接控制不饱和脂肪酸的形成与转化的基因进行了相应的序列分析．     

一株高效石油降解菌的筛选及降解能力初探

为了有效降解石油开采过程中产生的含油污泥中的石油,达到油泥资源再利用的目的,选育高效石油降解菌,为石油污染生物修复提供菌种资源和技术支持。通过连续富集传代培养,从页岩油泥中分离出一株高效石油降解菌YH1-1,经过形态学、生理生化以及16S rRNA序列分析,鉴定YH1-1为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。该菌在温度30℃、初始培养pH值7.0条件下降解质量浓度50 g/L的油泥,经气相色谱(GC)分析,28 d降解率可达87%,说明该菌可有效降解石油烃。因此,醋酸钙不动杆菌YH1-1在开发研制石油污染生物修复菌剂方面有较好的应用前景。     

休眠期珙桐种子cDNA文库构建及EST分析

以休眠期的珙桐种子为材料,利用SMARTTM cDNA Library Construction Kit构建珙桐种子的cDNA文库.结果表明:该文库的滴度为1.5×106 pfu·mL-1,重组率为98%,cDNA文库插入片段大小主要集中在0.5～1.0 kb.随机测序获得148个EST序列,拼接成127个uniEST,经网上BlastN及BlastX分析,其中75个序列是已知功能的基因标签,相似性较高,而32个序列在GenBank中相似性较低,13个序列在GenBank中没有匹配.这些数据有助于对珙桐种子的相关功能蛋白及分子机制的研究.     

枣抑制消减cDNA文库构建与分析

枣树具有独特的开花结果特性,为获得枣花发育基因,以金丝4号枣不同发育时期的花蕾和同时期的叶片cDNA互为试验方和驱动方,利用抑制消减杂交技术分别构建了枣花和枣叶抑制消减杂交cDNA文库(SSH文库)。枣花和枣叶SSH文库重组率分别是92.05%和90.26%,插入片段长度均介于200~2 000 bp之间,主要集中于1 000 bp左右。分别从枣花和枣叶SSH文库中随机挑选1 000个阳性克隆进行DNA测序、组装拼接,结果显示枣花SSH文库中获得96条unigene,其中contigs 43个,singletons 53个,96条unigene预测得到73个ORF,经过同源比对分析获得有注释的序列20条,按功能分为7类;枣叶SSH文库中获得86条unigene,其中contigs 45个,singletons 41个,86条unigene预测得到70个ORF,经过同源比对分析获得有23条注释的序列,按功能分为6类。     

油茶种子cDNA文库构建中的问题与对策

以湘林1号和湘林．1号油茶优良无性系近成熟种子为材料．总结了构建油茶种子cDNA文库过程中存在的一些关键问题和应采取的对策．为今后油茶和其它油料植物种子的mRNA提取、构建高质量的cDNA文库及ESTs文库等提供技术参考和理论指导。     

Construction and Characterization of cDNA Library from Water-Stressed Plantlets Regenerated in vitro of Populus hopeiensis

In order to isolate and clone water-stress-responsive genes, total RNA was extracted from water-stressed plantlets regenerated in vitro of Populus hopeiensis using a QIAGEN RNeasy Plant Mini Kit. CDNA, synthesized by LD-PCR with the SMART cDNA Library Construction Kit, was n vitro packaged into a phage λTriplEx2 vector. The resulting primary library and amplified library have a titer of 1.68×10i6 and 1.69×109 pfu·mL–1 respectively. The combination ratio reached 98.8% and the average size of inserts was about 800 bp. In addition, the percentage of inserted fragments (> 400 bp) was approximately 90%. The results indicate that a cDNA library has been successfully constructed.     

矿山型东南景天cDNA表达文库构建与耐镉基因筛选

以筛选出的镉超积累矿山型东南景天为材料,经镉胁迫后提取总RNA,纯化mRNA,利用改良SMART技术合成了全长cDNA,回收500 bp以上cDNA大片段克隆到改造过的大肠杆菌/酵母穿梭载体pYES2.0G中,建成东南景天镉全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行PCR鉴定,插入片断大小在1 000 bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求,为将来筛选克隆与东南景天抗重金属相关基因奠定了基础。