■NPR1同源基因全长cDNA的分离与表达分析

NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选■(Prunus salicina var. cordata)叶片全长均一化cDNA文库,分离■叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷施一年生■嫁接苗嫩叶,采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明,共获得了4个NPR1同源基因的全长cDNA,分别命名为PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3,其长度分别为2 442、1 827、2 244和2 615 bp,其ORF长度分别为1 788、1 770、1 767和1 782 bp,分别编码596、590、589和594个氨基酸的蛋白质;氨基酸序列比对结果表明,■这4个NPR1同源基因的编码区均含有BTB/POZ和ANK两个保守域及核定位信号(NLS);PsNPR1与拟南芥的AtNPR1和At NPR2聚为一簇,PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3与拟南芥的AtNPR3和At NPR4聚为另一簇。PsNPR1在喷施1.0 mmol·L^-1水杨酸的叶片中表达量最高;PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2在响应1.0 mmol·L^-1水杨酸诱导过程中表达量持续上升,30h表达量最高,之后呈下降趋势,因此,水杨酸诱导抗病基因高表达的最佳处理浓度为1.0 mmol·L^-1,最佳响应时间为30 h。     

U+3B8FNPR1同源基因全长cDNA的分离与表达分析

 NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选U+3B8F（Prunus salicina var. cordata）叶片全长均一化cDNA文库,分离U+3B8F叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷施一年生U+3B8F嫁接苗嫩叶,采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明,共获得了4个NPR1同源基因的全长cDNA,分别命名为PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3,其长度分别为2 442、1 827、2 244和2 615 bp,其ORF长度分别为1 788、1 770、1 767 和1 782 bp,分别编码596、590、589和594个氨基酸的蛋白质;氨基酸序列比对结果表明,U+3B8F这4个NPR1同源基因的编码区均含有BTB/POZ和ANK两个保守域及核定位信号（NLS）;PsNPR1与拟南芥的AtNPR1和AtNPR2聚为一簇,PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3与拟南芥的AtNPR3和AtNPR4聚为另一簇。PsNPR1在喷施1.0 mmol ? L-1水杨酸的叶片中表达量最高;PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2在响应1.0 mmol .  L-1水杨酸诱导过程中表达量持续上升, 30 h表达量最高,之后呈下降趋势,因此,水杨酸诱导抗病基因高表达的最佳处理浓度为1.0 mmol ? L-1,最佳响应时间为30 h。     

外源水杨酸对梨叶片叶绿素荧光特性的影响

研究外源水杨酸诱导后鸭梨茎尖组培苗叶片中叶绿素荧光参数的变化。结果表明,在MS继代培养基上添加0.02、0.2、2.0 mmol/L水杨酸培养后,叶片叶绿素初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)升高;提高了叶片PSⅡ原初光能转换效率(Fv/Fm)、最大电子传递速率(ETRmax)和非光化学猝灭系数(NPQ);表明水杨酸对梨叶片光合机构的稳定及周转具有促进作用,浓度以0.2mmol/L效果较好。     

梨轮纹病菌弱毒株携带产黄青霉病毒水平传染力测定

梨轮纹病是由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）引起。前期获得了感染葡萄座腔菌产黄青霉病毒（Botryosphaeria dothidea chrysovirus 1,BdCV1）引起弱毒的梨轮纹病菌菌株LW-C和LW-1,为进一步明确BdCV1介导弱毒菌株是否具有作为候选田间生防资源的潜力,将LW-C和LW-1分别与地理来源不同的梨轮纹病菌（B. dothidea）分离株和危害梨树严重的梨腐烂病菌（Valsa pyri）分离株XJ-28进行对峙培养试验,测定获得携带病毒的衍生菌株生长速率及致病力。研究结果显示轮纹病菌菌株弱毒因子BdCV1均能以一定频率水平传染至不同种类致病菌株中,可引起部分受体菌株生长速率下降,不同程度地抑制其生长。接种梨枝条和果实,原始受体菌株所形成病斑扩展长度约为带毒衍生菌株的2倍至4倍,表明病毒可抑制其受体菌株致病力。以上研究结果揭示了BdCV1可水平传染至不同种类受体菌株中,寄主范围广,具有作为生防因子应用于梨真菌病害中的可行性。     

葱、蒜粗提取液对贮藏期梨黑斑病的防治研究

以苹果梨为试验材料,研究葱、蒜粗提取液对梨黑斑病室内毒力测定和梨果实体内损伤接种的影响,结果表明:葱、蒜粗提取液在200m L/L抑制率分别为39.87%、90.65%,EC50分别为669.031、6.304mg/L,说明大蒜抑制率较好。进一步损伤接种试验结果表明:蒜粗提取液对梨黑斑病菌有抑制作用,200m L/L浓度蒜粗提取液抑菌效果最好。     

不同储藏方式对梨果实硬度及PPO活性的影响

以“520”梨和“晚香”梨为试材,研究了不同贮藏条件对果实硬度和PPO酶活性的影响.结果表明:低温且外包保鲜袋的梨果实,果肉软化速度相对缓慢;与对照相比,对于外包有保鲜袋和没有保鲜袋的处理,在不同温度下,温度越低,PPO酶的活性越低,果实软化速度越慢;不同贮藏温度对梨果实的硬度和PPO酶活性的变化均具有一定程度的影响,低温与保鲜袋的结合处理可以保持梨果的硬度.     

萝卜雄性不育系和保持系的POD和SOD同工酶酶谱分析

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对萝卜（ＲａｐｈａｎｕｓＳａｔｉｖｕｓＬ．）５对雄性不育系和保持系的过氧化物酶（ＰＯＤ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的同工酶酶谱进行了分析。取材部位是成株茎上的叶片和开花前１～２天的花蕾。结果表明，在花蕾上，所有的不育系都具有４条相同的ＰＯＤ谱带，所有的保持系都具有２条相同的ＰＯＤ谱带，而ＳＯＤ谱带，不管是不育系还是保持系，都只有３条相同的谱带；在叶片上谱带的表现规律性不强。因此初步认为花蕾上ＰＯＤ同工酶电泳谱带的增加与萝卜雄性不育系花的败育有关，而花蕾上ＳＯＤ同工酶与萝卜雄性不育系花的败育无关。     

不同发酵条件对苹果轮纹病拮抗细菌生长的影响

对1株苹果轮纹病细菌No.1菌株的发酵条件进行了探索,确定了其最佳培养基组成及培养条件。单因素发酵试验和正交试验结果表明,在含酵母浸膏5g、蔗糖20g、蛋白胨10g的1000mL液体培养基中,菌体生长量最大;细菌生长所需的最佳碳源为淀粉,最佳氮源为酵母浸膏和蛋白胨;当温度为28℃,pH7.0,在250mL三角瓶中装40mL液体培养基,接种量体积分数为5%,培养时间96h时,菌体生长量最大;在酸性条件下(pH4),细菌几乎不生长。     

不同培养条件对苹果轮纹烂果病病菌的影响

近年来 ,苹果轮纹烂果病发生严重 ,给苹果生产造成了很大的损失 ,严重影响了苹果的质量和产量。造成苹果轮纹烂果病的病原菌有2种类型 ,一类是贝伦格葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengerianade Not.) ,即苹果干腐病菌 ,另一类是贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型 (Botryosphaeria berengeriana deNof.f.sp piricola) ,即苹果轮纹病菌。在生物学特性方面 ,对这 2种病原菌已有过较多报道。作者于 1 998～ 1 999年做了不同培养条件对苹果轮纹病病原菌菌丝生长影响的试验 ,现将试验方法和结果报道如下。1　材料和方法　　供试菌种为苹果轮纹病菌和苹…     

水杨酸对鸭梨果实PG、PME和呼吸速率的影响

在鸭梨果实生长发育前期,呈现一个水杨酸(SA)含量高峰,高峰过后,果实进入快速生长期。随着果实的成熟,SA含量下降。用SA喷施研究表明,不同处理时期、不同处理浓度对果实多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果胶甲脂酶(PME)活性影响不同,其中于果实成熟前一个月(8月中下旬)喷施0.02mmol/LSA作用最强,7月上中旬各浓度处理对其作用不明显;圆片培养研究进一步表明0.02mmol/LSA可明显抑制PG和PME活性。喷施0.002～0.2mmol/LSA均明显抑制果实呼吸速率。     

外源水杨酸对鸭梨叶片内源多胺含量的影响

以鸭梨为试材,研究了外源水杨酸对叶片内源多胺含量变化的影响.结果表明:不同浓度水杨酸处理对多胺含量变化的影响不同,低浓度的水杨酸处理在一定的时间内提高了叶片内源多胺的含量,而高浓度的水杨酸则抑制内源多胺的合成.在田间试验中,5月26日至7月26日腐胺和亚精胺含量显著提高,精胺含量无显著变化.     

外源水杨酸对低温下黄瓜幼苗CsFAD的表达调控

为探究外源水杨酸（SA）对低温下黄瓜幼苗脂肪酸组成的影响,采用根系施用SA的方法,测定了正常生长温度和低温（8 ℃）条件下SA处理对黄瓜幼苗叶片中脂肪酸含量、组分,以及脂肪酸去饱和酶基因（CsFAD）表达水平的影响。结果表明：根系施用SA能降低叶片中因低温引起的丙二醛积累和相对电解质渗漏,维持细胞膜稳定性;低温引起叶片中总脂肪酸含量减少,C_18︰3等多不饱和脂肪酸相对含量降低,C_18:0、C_18:1等脂肪酸比例升高,脂肪酸双键指数降低;根系施用SA后,叶片中总脂肪酸含量、脂肪酸不饱和度及双键指数均得以恢复;低温诱导叶片中CsFAD的表达,低温下外源施用SA可进一步促进CsFAB2.1、CsFAB2.2、CsFAD2.1、CsFAD6和CsFAD7等的表达。总之,SA可以诱导黄瓜幼苗中CsFAD的表达,维持细胞膜脂肪酸不饱和度,提高细胞膜稳定性,诱导耐低温性。     

外源水杨酸对低温胁迫下黄瓜幼苗根系脂肪酸不饱和度的影响

为了阐明水杨酸(SA)诱导黄瓜幼苗耐冷性的作用机理,以28℃/18℃(昼/夜)为对照,测定了外源SA对低温胁迫(8℃/8℃)下根系脂肪酸总量、组分、不饱和度以及脂肪酸去饱和酶基因(CsFAD)表达水平的影响。结果表明:低温提高了根系总脂肪酸含量和饱和脂肪酸组分C16︰0、C18︰0的相对含量,并降低了多不饱和脂肪酸C18︰3的比例,根系脂肪酸不饱和度和双键指数降低;而低温下外源施用SA后,脂肪酸组分的变化得到显著缓解,饱和脂肪酸C16︰0的相对含量降低,不饱和脂肪酸C18︰3相对含量升高,脂肪酸不饱和度升高。进一步分析CsFAD的表达水平,发现低温胁迫下,根系CsFAB2.1、CsFAB2.2和CsFAD5表达受到抑制,CsFAD3和CsFAD7的表达升高;施用SA可以解除低温对CsFAB2.1、CsFAB2.2、CsFAB2.3的抑制,CsFAD2.1和CsFAD3的表达也有所升高。低温胁迫下外源施用SA可以诱导黄瓜幼苗根系FAD基因表达,提高脂肪酸不饱和度,提高幼苗耐冷性。     

外源水杨酸对黄瓜幼苗盐胁迫伤害的影响

利用营养液培养方法研究了外源SA对盐胁迫下黄瓜幼苗生长、叶绿素和类胡萝卜素含量、丙二醛及脯氨酸含量的影响。结果表明:外源SA能够显著提高盐胁迫下黄瓜幼苗的干鲜重、叶绿素和类胡萝卜素含量,显著减少丙二醛和脯氨酸的积累,从而减轻盐胁迫伤害,促进黄瓜植株生长。     

杧果生长期喷施水杨酸处理对果实采后品质和病害的影响

 在杧果（Mangifera indica L. 'Zihua'）生长期分别用1和0.1 mmol·L-1水杨酸（清水为对照）进行3次喷施处理,果实采收后于13℃,85%~95% RH的环境下进行贮藏,并定期取样进行观察测定。结果表明,0.1mmol·L-1水杨酸处理能延缓杧果果实衰老,显著抑制果实病斑扩展,有效降低果实的接种发病率;而1mmol·L-1水杨酸的作用却相反。     

丛枝菌根真菌和水杨酸对番茄幼苗耐盐性的影响

以番茄为试材,采用接种丛枝菌根(AM)真菌摩西球囊霉(Funneliformis mosseae)和施用外源水杨酸(SA)的方法,研究了盐胁迫下番茄生长、光合作用、抗氧化物酶活性等的变化,以期为AM真菌与水杨酸在提高番茄耐盐性方面的应用提供理论支持。结果表明:6 g·L^-1 NaCl胁迫下,接种摩西球囊霉、施加外源水杨酸(400μmol·L^-1 SA)或摩西球囊霉和水杨酸联用3种处理均明显增加了番茄根和茎叶的质量,提高了叶绿素含量和气孔导度、蒸腾速率、电子传导速率和光化学猝灭系数等光合指标。接种AM真菌和施加水杨酸提高了抗氧化物酶和超氧化物歧化酶活性,摩西球囊霉和水杨酸提高番茄抗盐性具有明显协同效应。表明接种AM真菌摩西球囊霉配合施用外源水杨酸能协同提高番茄耐盐胁迫。     

脱落酸和水杨酸对越冬期茶树叶片抗寒生理指标的影响

以3 a生‘黄山种’茶苗为试材,研究了喷施外源脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)对越冬期茶树叶片抗寒性相关生理指标的影响。结果表明:ABA和SA可抑制茶树叶片细胞膜透性的增加和可溶性蛋白含量的降低,提高可溶性糖的含量;ABA处理的叶片,冻害发生指数随着浓度的增加而降低,以25 mg/L处理效果最好;SA处理的叶片,冻害发生指数随着浓度的增加呈现先增加后降低的趋势,以3 mmol/L处理效果最好。     

木霉菌对苹果主要真菌病害的抑制及其在土壤中的定殖作用

以胶东半岛老的果园中土壤为试材,采用逐步稀释法,涂平板于孟加拉红培养基中,根据形态和分子方法鉴定分离木霉菌。分离出的木霉菌与苹果主要病害对峙培养在不同pH的培养基上,观察不同pH条件下,对真菌病害的抑制效果。土壤有机质和pH是目前胶东果园的主要问题,采用正交法设计,研究了不同的土壤条件对木霉菌生长的影响。结果表明:在不同pH条件下,木霉菌抑制苹果病原真菌的效果不同,木霉菌在不同的pH条件下对腐烂病(Valsa mali)和炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)均可以抑制,但对轮纹病(Physalospora piricola Nose)只有在pH 6.0时没有效果外,其它pH时都对轮纹病有抑制作用。在土壤pH 6.5和土壤有机质含量为75 g·kg^-1时,最有利于木霉菌定殖。同时还发现木霉菌对土壤的pH具有调节作用,无论在碱性条件下,还是酸性条件下,均可以使土壤pH趋于中性,另外木霉菌可以增加土壤有机质含量,特别是在高土壤有机质含量的情况下,增加更加显著。总之,分离出的木霉菌对苹果腐烂病、炭疽病和轮纹病抑制效果好。土壤pH和有机质含量对木霉菌的生长有影响,高土壤有机质含量和中性土壤有利于木霉菌定殖。另外,木霉菌能有效地改良土壤有机质含量和土壤pH。     

水杨酸对NaCl胁迫下黄瓜种子活力及抗盐性的影响

以黄瓜种子为试材,采用SA进行浸种处理,研究SA对缓解黄瓜种子盐害的效应。结果表明:不同浓度SA浸种能在一定程度上提高黄瓜种子抗盐能力,其发芽率、发芽势和发芽指数均较对照组高,而种子MDA含量和外渗液电导率均低于对照组。其中0.50 mmol/L SA处理的种子的发芽率、发芽势和发芽指数最高;而0.75 mmol/L SA处理对种子MDA含量和外渗液电导率的降低效果最佳。适当浓度外源SA能够提高NaCl胁迫下黄瓜种子的活力,保护细胞膜的完整性,从而提高种子的抗盐性。