雌激素对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期变化规律的影响

目的 研究雌激素对乳腺上皮细胞增殖及细胞生长周期变化规律的影响。方法 选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200 μmol/L雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在0、12、24、48、72 h后检测各组细胞增殖及细胞周期。结果 培养12 h时,50 μmoL/L雌激素组的OD值显著高于对照组及100 μmoL/L雌激素组(P＜0.05),且极显著高于200 μmoL/L雌激素添加组(P＜0.01);培养至12 h时,对照组及添加50 μmoL/L雌激素组其G1期极显著高于其他两组(P＜0.01),对照组S期极显著高于其他各组(P＜0.01),添加100 μmoL/L雌激素组其G2期极显著高于其他各组(P＜0.01)。结论 添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞的增殖,且50 μmoL/L、12 h时雌激素促进乳腺上皮细胞的增殖效果最好。添加雌激素不影响乳腺上皮细胞在各时期时细胞生长的基本规律,各雌激素添加组在12 h时的细胞周期由G1、S期向G2期转化较快。     

紫贻贝消化系统的组织学和组织化学研究

对紫贻贝消化系统进行了组织学和组织化学研究。紫贻贝消化系统由消化腺－肝胰遥和消化道－食道、胃（包括晶杆囊）、肠和直肠组成。消化腺为复管腺,腺上皮有消化细胞和嗜碱性细胞两种类型。消化道管壁由粘膜层、粘膜下层和外膜组成,无肌层。粘膜上皮主要为单层柱状纤毛细胞。组织化学研究表明：消化嗜碱性细胞富含蛋白质和ＲＮＡ,消化细胞富含脂类和多种酶类：蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶、酸性磷酸酶及碱性磷酸酶。消化道中酶的     

紫贻贝消化系统的组织学和组织化学研究

对紫贻贝消化系统进行了组织学和组织化学研究。紫贻贝消化系统由消化腺－肝胰遥和消化道－食道、胃（包括晶杆囊）、肠和直肠组成。消化腺为复管腺,腺上皮有消化细胞和嗜碱性细胞两种类型。消化道管壁由粘膜层、粘膜下层和外膜组成,无肌层。粘膜上皮主要为单层柱状纤毛细胞。组织化学研究表明：消化嗜碱性细胞富含蛋白质和ＲＮＡ,消化细胞富含脂类和多种酶类：蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶、酸性磷酸酶及碱性磷酸酶。消化道中酶的     

Prevention of Brca1-mediated mammary tumorigenesis in mice by a progesterone antagonist

Women with mutations in the breast cancer susceptibility gene BRCA1 are predisposed to breast and ovarian cancers. Why the BRCA1 protein suppresses tumor development specifically in ovarian hormone-sensitive tissues remains unclear. We demonstrate that mammary glands of nulliparous Brca1/p53-deficient mice accumulate lateral branches and undergo extensive alveologenesis, a phenotype that occurs only during pregnancy in wild-type mice. Progesterone receptors, but not estrogen receptors, are overexpressed in the mutant mammary epithelial cells because of a defect in their degradation by the proteasome pathway. Treatment of Brca1/p53-deficient mice with the progesterone antagonist mifepristone (RU 486) prevented mammary tumorigenesis. These findings reveal a tissue-specific function for the BRCA1 protein and raise the possibility that antiprogesterone treatment may be useful for breast cancer prevention in individuals with BRCA1 mutations.     

鹌鹑泄殖腔腺的组织形态学观察

本文报道了鹌鹑泄殖腔腺的显微结构和超微结构。雄性泄殖腔腺的腺上皮可按细胞的大小,细胞质的嗜色性,分泌颗粒的电子密度和细胞核异染色质量等方面,将柱状细胞分为两种类型。比较雄体和雌体泄殖腔腺的胚后发育表明,雌成体泄殖腔腺相当于雄性胚后发育至23日龄左右的水平,结构简单,分泌活动较低。根据泄殖腔腺发育的测微数据与睾丸发育增重数据分析,表明二者的胚后发育有显著的正相关关系。     

番鸭(Cairina moschata)甲状腺的显微与亚微结构

番鸭甲状腺实质由大小不一、近似球形的滤泡组成,其上皮细胞呈低立方形至扁平形.电镜下的滤泡上皮细胞,胞质内存在多量由被吞饮的胶状质与溶酶体相结合的胶质滴,线粒体外围有以核糖体规律排列的粗面内质网,网腔内多被低密度的无定形内容物所扩大.番鸭甲状腺实质存在滤泡旁细胞(C细胞).经Ehrlich苏木素染色的滤泡旁细胞呈球形、体积大、染色较浅,单个散在或2个并列位于滤泡外围的结缔组织内,不与滤泡腔接触,可明显与滤泡上皮细胞相区别.     

Lactose synthetase: progesterone inhibition of the induction of alpha-lactalbumin

Lactose synthesis in the mammary gland is dependent on the hormonally controlled synthesis of the two protein components of lactose synthetase, alpha-lactalbumin and a galactosyltransferase. Prolactin induces the synthesis of both proteins in mammary gland explants treated with insulin and hydrocortisone, but the induction kinetics cannot account for the asynchronous synthesis of the two proteins that are observed in vivo. Progesterone appears to take part in the control of lactose synthesis and acts to repress the formation of alpha-lactalbumin throughout pregnancy. At parturition, when the concentration of progesterone in the plasma decreases, the rate of alpha-lactalbumin synthesis increases.     

人溶菌酶密码子优化及其在牛乳腺细胞中高效表达

【目的】分析牛乳腺中7种主要乳蛋白基因密码子使用偏好性,筛选高频密码子和低频密码子,依据其对人溶菌酶基因进行密码子局部优化和全局优化,通过牛乳腺上皮细胞等多种细胞对优化效果进行分析评价,为提高重组人溶菌酶表达量,开发新型、高效、安全的重组人溶菌酶提供理论依据。【方法】利用CodonW和EMBOSS等软件对7种主要牛乳蛋白和人溶菌酶基因密码子偏好进行生物信息学分析,筛选牛乳蛋白基因高频、低频密码子并根据牛乳蛋白基因密码子使用偏好对人溶菌酶基因翻译起始区前22位密码子（LYZop22）和全局密码子(LYZop)分别进行优化。构建人溶菌酶-荧光素酶融合表达载体（pGL3-LYZcw/op22/op）和人溶菌酶过表达载体（pcDNA-LYZcw/op22/op）,将上述载体分别转染牛乳腺上皮细胞(BMEC)、牛成纤维细胞（BFFC）和C127小鼠乳腺上皮细胞等3种细胞,通过荧光素酶、实时荧光定量PCR及Western-blot等方法检测密码子优化对溶菌酶表达的影响。【结果】牛乳蛋白基因密码子偏好以GC结尾,GC3s平均含量为0.537±0.062,而人溶菌酶GC3s含量为0.407,偏好以AT结尾;聚类结果表明,牛乳中酪蛋白与乳清蛋白类基因在密码子使用偏好性上也存在一定差异。依据筛选获得的牛主要乳蛋白基因5个高频密码子（RSCU>1.5）和7个低频密码子（RSCU<0.5）对人溶菌酶基因密码子进行优化并转染多种细胞进行表达效果分析。荧光素酶分析发现,相比野生型溶菌酶密码子（LYZcw）,翻译起始区密码子优化类型LYZop22分别在BMEC、BFFC细胞中提高1.48倍（P<0.01）和1.30倍（P>0.05）;而全局密码子优化类型LYZop分别在BMEC、BFFC中提高2.2倍（P<0.01）和2.44倍（P<0.01）,说明密码子优化能明显提高人溶菌酶在多种细胞中表达量。实时荧光定量PCR结果表明,LYZop22相比LYZcw在BMEC和BFFC细胞中分别提高了2.08倍（P<0.05）和1.5倍（P>0.05）,而LYZop则分别提高了22倍（P<0.01）和17.8倍（P<0.01）,mRNA表达水平与密码子优化后的mRNA二级结构稳定性呈正相关。Western-blot结果也进一步表明,密码子优化后的LYZop22和LYZop能明显提高重组人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞中的表达量。上述结果表明,根据牛乳腺中主要乳蛋白基因密码子使用偏好进行密码子优化,能显著提高人溶菌酶在牛乳腺上皮细胞及成纤维细胞中的表达量,且溶菌酶基因全局密码子优化效果优于翻译起始区密码子优化效果。【结论】通过生物信息学分析获得了牛乳蛋白基因使密码子使用偏好及高低频密码子;依据牛乳蛋白密码子使用偏好性对人溶菌酶密码子优化能显著提高重组人溶菌酶mRNA水平和蛋白水平的表达量,为今后利用生物反应器高效生产重组人溶菌酶奠定基础。     

斑腿树蛙消化道组织学的初步研究

[目的]研究无尾两栖类的消化道组织。[方法]采用解剖学与组织学方法研究斑腿树蛙的消化道。[结果]结果表明,斑腿树蛙消化道分为口咽腔、食道、胃、十二指肠、回肠和大肠。消化道管壁由黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层构成。食道为复层柱状纤毛上皮,胃和肠都为单层柱状上皮。胃和十二指肠的黏膜皱褶最丰富。食道腺为复泡状腺,胃腺属于单管状腺。具有十二指肠腺,回肠和大肠无多细胞腺体。杯状细胞存在于食道、十二指肠、回肠和大肠中,但食道、十二指肠中较少,回肠和大肠中较为丰富。[结论]斑腿树蛙肌层均为平滑肌,内层环肌较厚,外侧纵肌较薄。     

姜曲海母猪子宫雌二醇和孕酮受体含量的变化

以长白母猪为对照,分析了1月龄、发情期和间情期姜曲海母猪子宫细胞质雌二醇受体(CER)和细胞核雌二醇受体(NER)以及细胞质孕酮受体(CPR)和细胞核孕酮受体(NPR)。3个时期该猪子宫CER分别为351、410和367fmol/mgDNA,其Kd值分别为7.1、4.8和4.0nmol;子宫NER分别为245,1390和620fmol/mgDNA,Kd值为3.7、6.6和4.4nmol;CPR分别为251、364和147fmol/mgDNA;NPR分别为232、337和184fmol/mgDNA。在发情期和间情期,姜曲海母猪子宫NER以及与细胞质受体的比值均比长白母猪高,说明此时姜曲海母猪子宫对雌二醇具有较高的敏感性。性成熟后,试验猪的雌二醇受体和孕酮受体均受它们配体激素的调节。     

Regulation of leptin in involution of mammary gland

Leptin,a protein hormone produced and secreted predominantly by white adipose tissue,has a critical role in the regulation and coordination of energy metabolism.Leptin is produced in the mammary gland by the fat tissue or by the mammary epithelium.In vitro study has shown that leptin triggers apoptosis in mammary epithelial cells.Mammary gland involution is characterized by extensive apoptosis of the epithelial cells.At the onset of involution,STAT3 is specifically activated.Various studies show that leptin act as a paracrine and autocrin factor to influence mammary epithelial cell proliferation and differentiation.This paper reviewed the function of leptin to the involution of mammary gland.     

奶山羊乳腺上皮细胞系的建立

乳腺上皮细胞系的建立为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺表达载体的检测提供有利条件。本研究建立了正常培养的奶山羊乳腺上皮细胞系。利用胶原酶和透明质酸消化法从奶山羊乳腺组织中分离并获得了纯化的乳腺上皮细胞,利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行了鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力检测等生物学性状的检测建立并鉴定了奶山羊乳腺上皮细胞系。结果表明,奶山羊乳腺上皮细胞在添加表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、转铁蛋白-硒钠、10%胎牛血清的DF12培养液中生长状态良好,细胞传至30代时仍保持旺盛的增殖活力。通过细胞传代及反复冻存和复苏实现了细胞系的长期保存,建立了乳腺上皮细胞系,获得了大量的乳腺上皮细胞。从而为开展奶山羊、奶牛等产奶动物乳腺生物反应器及泌乳机制的研究提供了便利条件。     

补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞增殖及ERK/CREB信号通路的影响

目的 探讨补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞（neural stem cells,NSCs）增殖及ERK/CREB信号通路的影响。方法 采用双侧卵巢切除术（OVX）结合大脑中动脉阻塞（MCAO）法复制去势雌性大鼠脑缺血复合模型,将造模后的36只大鼠随机分为双假手术组、复合模型组、雌激素组、雌激素+G15组、补阳还五汤组及补阳还五汤+G15组6组,每组6只,术后24 h给予相应药物灌胃连续干预14 d,同时每天腹腔注射BrdU、G15分别标记增殖细胞和阻断GPER-1。采用免疫荧光BrdU/Nestin双标法检测各组大鼠缺血侧海马齿状回NSCs增殖情况,免疫组化SP法检测ERK1/2、CREB1磷酸化蛋白表达水平。结果 补阳还五汤组和雌激素组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均增加,与复合模型组比较有显著性差异（P<0.05）,但补阳还五汤组要多于雌激素组（P<0.05）。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+G15组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均减少（P<0.05）。结论 补阳还五汤可以促进去势脑缺血雌性大鼠缺血侧海马DG区神经干细胞增殖,激活ERK/CREB信号通路,可能是其发挥类雌激素作用、促进内源性神经再生作用机制之一。     

体外培养的牛乳腺上皮细胞形态研究

通过有效的细胞培养方法获得了牛乳腺上皮细胞系,并系统观察了乳腺上皮细胞的长出、贴壁、聚集、迁移、分裂、分化、凋亡等一系列形态变化。结果发现,原代培养的乳腺上皮细胞大多数呈卵圆形,细胞之间连接成片,单层生长,如鹅卵石铺过路面,乳腺上皮细胞和成纤维细胞混生时分区生长,界线明显。传代的乳腺上皮细胞呈岛屿状聚集生长,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2～4枚;在含雌激素的培养液中,细胞出现双核或多核现象,但仍表现一定的接触抑制现象。多次传代后的乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,通过光镜观察,部分细胞仍保持较快的分裂增殖能力;部分细胞渐渐分化,出现长形细胞、三角形细胞。上皮细胞增殖分化可形成圆顶型结构,乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁,分泌到细胞外的乳汁流动形成网状结构。     

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性

为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法,从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞,并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力等生物学特性的检测,建立并鉴定麦洼牦牛乳腺上皮细胞系。结果显示,乳腺细胞形态良好,细胞接种存活率达91%,群体倍增时间26.97h,细胞生长曲线呈典型"S"型,细胞传至25代以上仍保持旺盛的增殖活力。可见,通过对细胞传代及反复冻存和复苏已成功建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞系,获得大量的乳腺上皮细胞,使麦洼牦牛物种在细胞水平上得以保存,为建立牦牛乳腺生物反应器及泌乳调控机制研究提供基础。     

水貂发情期卵巢动态结构研究

对发情期水貂卵巢进行系列切片，研究其卵泡生长，闭锁，排卵，间质腺细胞的形态结构及组织化学变化。水貂卵泡生长呈波浪式，卵泡闭锁分了３种类型，闭锁有腔卵泡内膜中上皮样细胞增殖，在原有卵泡腔的位置上形成新的间质腺组织。并对含有甘油三酯及磷酯的脂滴分布双及涉及到类固醇生物合成等方面的问题进行了讨论。     

雌二醇及其受体在北方山溪鲵精巢中的周期性分布

用免疫组织化学方法检测雌二醇(estradiol)及其受体(estrogen receptor)在北方山溪鲵(Batrachuperus tibetanus)精巢发育周期中的表达变化。结果表明,在4~5月,雌二醇及受体在精原细胞的胞质中强表达;6月,雌二醇在精母细胞的胞质中表达较弱,其受体在精母细胞的核质中有较强表达;7月,雌二醇及受体在精子细胞的胞质中表达;8月,雌二醇及受体在精原细胞的胞质中和变态后的精子头部有弱表达;9-11月,两者均在精原细胞的胞质中及精子头部有较强表达。说明雌二醇及其受体存在于整个精巢周期中,二者在生精细胞中的强弱变化基本一致,其变化规律与精子发育周期密切相关;雌激素受体多存在于生精细胞的胞质中,雌激素可能以非基因组效应调控细胞的增殖,并与精子的发育成熟密切相关。     

Influence on Cellular Signal Transduction Pathway in Dairy Cow Mammary Gland Epithelial Cells by Galactopoietic Compound Isolated from Vaccariae segetalis

The galactopoietic mechanism of Vaccaria segetalis is still unknown. Understanding dibutyl phthalate (DBP) separated from Vaccaria segetalis on the expression of lactation signal transduetion genes of mammary gland epithelial cells, including prlr, erα, akt1, socs2, pparγand elf5, will be helpful to reveal the molecular mechanism. Western blot and qRTPCR were used to study the change of prlr, erα, akt, socs2, pparγ, and elf5 expression at mRNA and protein level. Colocalization expression of prolactin receptor (PRLR) and estrogen receptor α (ERα) was observed by immunofluoreseence;the expression changes of miRNAs (21, 125b, 143, and 195) and the secretion of β-casein and lactose were detected byqRT-PCR and RP-HPLC. The results showed that Vaccaria segetalis active compound had similar fuctions as estrogen and/or prolactin (PRL) in dairy cow mammary gland epithelial cells (DCMECs), increased the expressions of prlr, erα, akt1,and elf5 genes, while repressed ppaγ expressions. DBP promoted socs2 mRNA expression, but its protein expressionswere repressed. Furthermore, both DBP and PRL could repress the expressions of miRNA-125b, miRNA-143 and miRNA-195 in DCMECs. DBP could repress the expression of miRNA-21, while the influence of PRL on miRNA-21 was not certain.DBP could promote the lactation ability of DCMECs by regulating the ER and PRLR cellular signal transduction pathway.     

Harderian gland: development and influence of early hormonal treatment on porphyrin content

The porphyrin content of the rat Harderian gland remains low until 12 days of age at which time both porphyrin content and concentration rapidly increase. Intraperitoneal administration of tetraiodothyronine (thyroxine) into newborn animals advances the appearance of porphyrin in the gland. Conversely, a single injection of cortisol acetate into newborns retards the appearance of porphyrin. The time of porphyrin appearance in the gland parallels the time for maturation of the evoked cortical response to visual stimulation in normal and hormone-treated animals.