广西眼镜蛇神经毒素的原核表达

利用拼接PCR法从广西眼镜蛇基因组DNA中获得CT成熟肽序列,序列分析显示,广西眼镜蛇与其他地区眼镜蛇的CT基因成熟肽序列具有较高的同源性,同时成功构建了pET30 a(+)-CT原核表达载体;研究结果表明,利用拼接PCR的方法能有效拼接两个外显子序列,广西眼镜蛇CT基因具有较高的保守性,CT基因可在大肠杆菌中表达。     

东亚钳蝎神经毒素基因BmKCT的克隆与表达

从蝎毒腺中提取总RNA,通过RT-PCR得到东亚钳蝎神经毒素BmKCT的cDNA,将其连接到pUCm-T载体中。序列分析表明,该基因开放阅读框架编码59个氨基酸残基,其中24个为信号肽,其余35个为成熟肽,与Genebank上登录的相同。将蝎神经毒素cDNA再经PCR扩增除去信号肽序列,克隆到pTrcHisA表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导可高效表达分子质量为10ku左右的融合蛋白。表达产物约占菌体总蛋白的25%。     

昆虫生长调节剂的生物活性测定

室内生物测定表明，卡死克对飞蝗毒力高、胃毒作用强．致死中浓度为５．６ｐｐｍ。温度对卡死克毒效的发挥具有显著影响，若虫的死亡速率随着温度的升高而加快．死亡时间明显缩短。卡死克具有显著的杀卵效果。飞蝗低龄若虫对药剂的敏感性强，死亡率高。经卡死克浸叶饲喂施药剂的飞蝗雌成虫寿命比正常雌成虫的明显缩短约２０ｄ，产卵量减少约６０～８０％。     

小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备

为了获取小鼠Ii编码基因,利用原核表达系统进行诱导表达,提取纯化目的蛋白并制备其相应抗体,应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清.结果扩增出了与预期大小相同的700 bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii基因同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5 ku的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体.成功克隆了小鼠Ii编码基因,有效进行了诱导表达,并制备了具有良好免疫学活性的特异性抗Ii抗体.     

山麻鸭SHH基因克隆和组织表达

本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878 bp,包含了5′UTR 113 bp和编码序列765 bp,编码255个氨基酸.氨基酸序列同源性比对发现,山麻鸭SHH基因与其他禽类的同源性较高,在物种间的保守性高.山麻鸭SHH基因在下丘脑表达量显著高于垂体和各级卵泡组织(P0.01);而在大黄卵泡中表达极显著低于大白卵泡和小黄卵泡(P0.01).本研究克隆获得SHH基因部分序列并检测其组织表达规律,为后续功能研究打下基础.     

山羊 IL-15基因克隆、组织表达谱分析与表达

白细胞介素15(Interleukin-15,IL-15)是一个多功能细胞因子,在免疫系统和非免疫系统中都有重要作用,包括刺激T细胞增殖和激活自然杀伤细胞,可引起肌肉萎缩性刺激和肌肉收缩反应.但是,在山羊中该基因的研究尚未见报道.该研究采用RT-PCR方法克隆了山羊肌肉IL-15基因,使用荧光定量的方法构建该基因组织表达谱.序列分析表明山羊IL-15包含486bp全长编码序列,该序列编码162个氨基酸,可形成4-α-螺旋的空间结构,其核苷酸和氨基酸序列与绵羊(97.55%,94.48%)和牛(95.91%,92.02%)的同源性最高,与鸡的同源性最低(48.59%,27.89%).荧光定量检测表明该基因在肌肉和脾中相对表达量最高,在大脑中相对表达量最低.进一步通过PCR方法获得缺失长信号肽的成熟肽蛋白基因序列,重组到原核表达载体pET32a(+)中进行原核表达,获得29kDa的融合蛋白,并通过Western blot方法进行了鉴定.这些结果说明IL-15序列在哺乳动物间是保守的,在山羊中的功能与其他动物相似.成功构建的山羊IL-15表达系统为进一步研究山羊该基因的功能及应用奠定了基础.     

OsWRKY79基因克隆和植物表达载体的构建

WRKY是植物体中重要的转录因子,克隆水稻Os WRKY79基因将为其在植物体内的定位和功能研究奠定基础.根据GenBank公布的Os WRK Y79基因序列设计特异引物,以RT-PCR法从水稻幼苗中克隆OsWRKY79基因,将其亚克隆至含有GFP基冈的pBinGFP表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒pBinGFP-Os WRKY79.     

瓯柑NIN和Sus基因克隆、序列分析与表达

以瓯柑果肉为材料,分离瓯柑中性转化酶（NIN）和蔗糖合成酶基因（Sus）,了解其序列特征,并对瓯柑NIN,Sus在不同组织的表达进行分析。结果显示：该研究首次从瓯柑果实中克隆获得NIN和Sus基因CDS全长序列,分别为1 932 bp和2 418 bp,预测分别编码643和805个氨基酸。序列比对结果显示：3个基因均高度保守,与NCBI网站上其他物种的序列同源性均高于70%,与柑橘类物种的同源性接近100%。NIN和Sus蛋白的相对分子量分别为72.18和92.19 ku,理论等电点（pI）分别为6.882和6.051。系统进化树结果显示：瓯柑NIN属于α组,推测可能定位于质体;瓯柑Sus属于Sus Ⅰ组。实时荧光定量PCR结果显示：瓯柑NIN,Sus基因在茎中表达量均最高,叶其次,果肉中表达量最低;NIN在果皮中的表达量比果肉高,Sus则处于相同水平。在果实不同发育阶段,NIN,Sus基因均在花后120 d表达最强,随后下降,接近成熟表达维持在较低的水平。结果表明：2个基因在瓯柑不同组织间的表达具有不同程度的差异性,在果实发育前期表达水平略高,随着成熟表达水平降低。     

鸭梨肌动蛋白2基因克隆和表达分析

根据其他植物肌动蛋白2基因(Actin2)的保守序列设计一对简并性引物,从鸭梨叶片中克隆到1个编码肌动蛋白的基因,命名为PbACT2。PbACT2基因cDNA全长为1 180bp,开放阅读框1 134bp,编码377个氨基酸。氨基酸比对分析表明,该基因编码的氨基酸与其他陆生植物肌动蛋白基因具有较高的同源性。研究证明,PbACT2在鸭梨不同器官和不同发育时期的表达基本一致,说明该基因的表达较为稳定。     

小麦TaWASI2基因克隆和表达

为了探讨小麦中wasi基因的结构与功能, 以大麦basi基因的EST为基础 ,通过电子克隆结合RT-PCR方法分离克隆获得了608 bp的小麦α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂基因TaWASI2.序列分析显示,所克隆的基因片段包含513 bp的开放阅读框,编码一个含有170个氨基酸的多肽,具有保守的STI结构域.通过半定量PCR对TaWASI2基因的表达特性分析表明: TaWASI2基因在种子发育过程中表达量逐渐增加;在胚乳中表达高于其他组织.     

人源性TAT-Fab抗体的表达优化及生物活性测定

为了提高抗体的表达水平,获得有保护作用的人源性破伤风抗毒素Fab(TAT-Fab)抗体,对人源性TAT-Fab抗体在大肠杆菌中的表达条件进行优化并测定其体内外生物学活性.ELISA显示所表达的TAT-Fab抗体可特异性结合破伤风外毒素,且优化后的表达水平较优化前提高近5倍;表达产物经超滤分离浓缩后,Western-blot显示在分子量约50 kDa处有一TAT-Fab抗体的特异性表达条带;小鼠保护实验显示其可特异性中和破伤风外毒素,明显延长小鼠的生存时间.以上结果表明所制备的人源性TAT-Fab抗体在体内外均具有中和破伤风外毒素的效应,为人源性破伤风抗毒素的研制和生产提供了实验依据.     

试论农林院校IT类专业应用型本科教学创新

在对农林院校IT类专业本科教育的目标明确定位的基础上,围绕课程体系的基本架构、课程内容选择与组织,以及课程评价方法等改革与创新进行了探讨.针对师资队伍、教材、实验实习条件,以及教学管理等方面的保障问题提出具体建议.     

Gene clone, expression and enzyme activity assay of a cytosolic malate dehydrogenase from apple fruits

Malate dehydrogenase (MDH) ubiquitously exists in animals, plants and microoganisms, and catalyzes the interconversion from oxaloacetate to malate. Cytosolic NAD-dependent MDH gene (cyMDH) encodes a key enzyme crucial for malic acid synthesis in the cytosol which has not been extensively characterized in plants. In this study, a full-length cDNA of cyMDH was isolated from apple fruits with RT-PCR as well as 3′ and 5′ rapid amplification of cDNA ends, and designated as Mal-cyMDH (GenBank accession No. DQ221207). It contained a 996-bp ORF and its sequence analysis shows a high similarity to other plant cyMDHs. Phylogenetic analysis indicated that almost all the cyMDHs could be clustered into the same group and it was likely to represent the original MDH. A roughly 37-kDa fused protein was obtained by the recombinant prokaryotic expression and its enzyme activity assay showed that it mainly catalyzed oxaloacetate to malate. It was also discovered that the enzyme activity of cyMDH exhibited remarkable difference between the high-and low-acid apple germplasm. __________ Translated from Acta Horticulturae Sinica, 2008, 35(2): 181–188 [译自: 园艺学报]     

金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测

[目的]克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性.[方法]用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其...     

山核桃水通道蛋白CcPIP同源基因克隆与表达分析

利用RACE方法,在山核桃嫁接过程中扩增出山核桃水通道蛋白同源基因CcPIP。应用生物信息学软件进行分析,预测该序列编码294个氨基酸,具有6个跨膜区,有MIP家族信号序列和高等植物PIP高度保守序列。通过NCBI同源性比较分析表明,该基因与葡萄、菜豆等物种的水通道蛋白基因同源性达到99%。荧光定量RT-PCR分析表明,CcPIP基因在芽中的表达量最低,其次是雄花序,果实,幼叶和茎,而在根中表达量最高。在山核桃嫁接前后,CcPIP基因在接穗中表达趋势和在砧木中的表达一致。CcPIP基因的表达量在山核桃嫁接前砧木和接穗中都有强烈表达,但在嫁接后3 d急剧下降,分别在砧木和接穗中下降了5倍和2倍。在随后的11 d里,CcPIP基因的表达量在砧木和接穗中开始上升,至嫁接后14 d基因的转录水平比嫁接后3 d分别增加了7倍和4倍。该CcPIP基因参与山核桃嫁接成活的水分运输过程中起到基因表达调控的作用。     

林业管理人员信息化培训需求分析

随着以计算机和网络为核心的信息技术在林业行业的广泛应用,特别是林业电子政务和新技术的迅速发展,工业社会向信息化社会、传统办公型政府到信息化办公型政府的转变,信息化进程对林业管理人员的能力和素质提出了更新、更高的要求。在对林业管理人员的基本情况和信息化应用现状的调查中发现,林业管理人员对信息化培训的基本需求不断提高,并向多样化深层次发展。为提高林业管理人员的信息化能力和工作水平,需要对管理人员的信息化能力进行分析,并结合信息化工作的重要性及人员的发展目标,提出相应的培训方案。     

我国农业信息化建设的主要目标任务

本文探讨了未来我国农业信息化建设应坚持的基本理念，指出了我国未来农业信息化建设的主要目标任务是：强化农业信息化理论研究；开展农业虚拟网示范研究与农业信息网络的建设；进行农业信息资源系统化建设；加深农业信息资源的开发与利用；加强农业实用软件系统的研究和开发；确立农业信息化指标体系；建立健全农业信息化管理体制。     

农业信息化的发展方向与途径

农业信息化是指利用现代信息技术和信息系统为农业生产、供销及相关的管理和服务提供有效的信息支持 ,并提高农业的综合生产力和经营管理效率。农业信息化是一个内涵深刻 ,外延广泛的概念。在农业生产、分配、交换、消费的四个环节中。农业信息化通过普遍采用信息技术和电子信息装备 ,更有效、更合理地开发利用各种农业资源 (包括自然资源、人才资源和其它信息资源等 ) ,从而促进农业产业的现代化水平 ,推动农村经济发展 ,社会进步的动态演进过程     

河北省旅游信息化建设现状与对策

旅游信息化建设是21世纪旅游业发展的内在要求和必由之路。在对河北省旅游信息化建设现状进行分析的基础上,就其发展提出了建议。