苹果叶片再生的改进及转抗虫基因植株的获得

用分别含有全部改造和垢Ｂｔ基因植物表达载体ＰＢ４８，７和ＰＢ４８．６的土壤农杆菌转化苹果优良品种（红富士、早生富士、辽伏）的叶片外植体，经过对ＭＳ培养基成分调整，在Ｎ量保持不变的条件下以（ＮＨ４）２ＳＯ４取代ＮＨ４ＮＯ３，使得转化后再生频率大增，现已获得２３２株转化再生植株，这些植株可以在含５０ｍｇ．Ｌ＾－１的卡那霉素培养基上生长，选出部分植株作ＰＣＲ检测，表明Ｂｔ基因已被导入这些苹果品种中。     

雄性毛白杨离体叶片再生及抗虫基因转化

用雄性毛白杨试管植株无菌叶片作外植体，筛选出诱导不定芽分化、增殖和生根培养基。在组培室的光照条件下培养３７ｄ，平均每片叶产生２５个不定芽。已建立雄性毛白杨最佳转化和再生系统。用含有完全改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．７和部分改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．６转化雄性毛白杨，经在含有卡那霉素的培养基上选择和ＰＣＲ检测，已获得初步确定的转基因植株。     

741杨离体叶片再生及抗虫基因转化

用７４１杨［Ｐｏｐｕｌｕｓａｌｂａ（ｐ．ｄａｖｉｄｉａｎａ×Ｐ．ｓｉｍｏｎｉｉ）×Ｐ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）］试管植株无菌叶片作外植体，经研究，筛选了诱导不定芽分化、增殖和生根培养基；暗培养５～１５ｄ能提高不定芽分化的诱导率。无根或生根试管植株两类叶片均可用作外植体。建立了７４１杨最佳转化和再生系统。用含有完全改造的Ｂｔ基因表达载体ｐＢ４８．７转化优良杨树新品种－７４１杨，经在含有卡那霉素培养基上选择和ＰＣＲ检测已获得初步确定的转基因植株。     

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包理法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上     

寒地粳稻外源基因转化途径研究初报

试验研究了寒地粳稻（ＤＳ２＃）成熟胚为受体的ＪＱ７００型基因枪转化，寒地粳稻（ＤＳ３＃）下胚轴愈伤悬浮细胞与细胞团为受体的农杆菌ＬＢＡ４４０４共培养转化，以及寒地粳稻（ＤＳ２ＧＧ＃）未受精胚囊为受体的花粉管通道等转化途径的初步尝试。结果首先在基因枪转化途径上得到突破——成功地将ＮＰＴⅡ基因、ＧＵＳ基因及抗虫基因（Ｂ．ｔ）的ＤＮＡ片段导入寒地粳稻（ＤＳ２＃）成熟胚。以ＧＵＳ基因组织化学法检测外源基因的表达，结果转化水稻细胞的短暂表达为阳性。经过一系列组织培养过程，诱导获得了绿色转基因水稻植株，取其叶片进行外源基因的稳定遗传与表达检测，结果ＧＵＳ基因组织化学检测亦为阳性，Ｏｌｙｍｐｕｓ倒置显微镜镜检结果——转基因水稻（ＤＳ２＃）植株叶片的叶脉等维管组织中ＧＵＳ基因表达更强烈。本文只是对转化途径进行研究，关于Ｂ．ｔ基因的整合与表达的检测工作正在进行中     

旋毛虫ES抗原结构基因TSPGⅡ重组表达质粒构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ,从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ．     

拟南芥ATLP-3基因在转基因烟草中的整合和表达

将拟南芥ＡＴＬＰ－３基因从质粒ｐＵＣＴＬ亚克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１中,得到了质粒命名为ｐＢＩＴＬ。被亚克隆到重组质粒ｐＢＩＴＬ的ＡＴＬＰ－３基因通过农杆菌ＬＢＡ４４０４介导法导入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｃｏ Ｌ．ｖａｒ Ｇｅｘｉｎ Ｎｏ．１）。通过卡那霉素抗性筛选,得到１９株再生烟划植株。ＰＣＲ（用根据ＣａＭＶ３５ｓ启动子和ＮＯＳ终止子序列合成的引物）分析表明,ＡＴＬＰ－基因是在     

培养基中氮磷钾对马铃薯试管苗生长的影响

马铃薯试管苗培养基氮磷钾含量的研究结果表明,培养基中单以铵态氮或尿素作氮源不利于幼苗生长,而完全以硝态氮作氮源,幼苗可正常生长。将ＭＳ培养基中氮源调整为（ＮＨ４）２ＳＯ４２０００ｍｇ／Ｌ、ＫＮＯ３３０００ｍｇ／Ｌ,可使植株生长量（鲜重）提高７８％,叶片大小（长度）增加１６．９％。增加培养基中钾的含量,可促使植株生长粗壮,节间缩短。     

番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究

在ＴＭＶ外壳蛋白（ＣＰ）基因的５′和３′端分别合成寡聚核苷酸引物Ｐ１和Ｐ２，并分别引入ＣｌａＩ和ＢａｍＨＩ位点，采用ＰＣＲ技术扩增ＴＭＶＣＰ基因，用ＣｌａＩＢａｍＨＩ消化后重组到ｐＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔＫＳ＋中，并将该基因与ＣＭＶＣＰ基因重组在同一个表达载体ｐＥ３上获得双价ＣＰ基因表达载体ｐＥＴＣ２，转化番茄，获得再生植株。通过点杂交、ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，证实２、１２和１３号为转ＴＭＶ和ＣＭＶＣＰ基因的工程植株。工程植株在温室中表现正常，比对照植株表现出明显的抗性。     

水稻半矮秆基因对根系氮吸收的影响

本文比较了半矮秆基因ｓｄ１的等基因系农林２９号（ｓｄ１Ｓｄ１）和ＳＣ４（ｓｄ１ｓｄ１）的氮吸收特点和根细胞长度、干物质产量等．结果表明：半矮秆品系ＳＣ４的株高、根细胞长度显著小于农林２９号．成熟用植株干重、茎叶干重也显著小于农林２９号．ＳＣ４单株糙米产量比农林２９号低２０％．ＮＨ４￣＋—Ｎ吸收量和ＮＯ３￣３－Ｎ吸收量都与植株干重呈显著正相关．基部节间伸长期至成熟期ＳＣ４的ＮＯ３￣－—Ｎ吸收量显著低于农林２９号，尤其节间伸长期至开花期两者差异更大．半矮秆基因在高产育种中起重要作用，但在超高产育种中有局限性．     

农杆菌介导半夏凝集素基因对油菜的遗传转化

以3～4d苗龄的甘蓝型油菜品种陇油2号带柄子叶为转化受体材料,通过农杆菌LBA4404介导将半夏凝集素抗虫基因（pta）导入,获得抗卡那霉素的抗性植株3株。实验中还对影响油菜遗传转化的外源激素种类和配比进行了研究,结果表明,在预培养阶段1．0mg／L 2,4-D与0．2mg／L6-BA配合使用比单独使用2,4-D效果好,在幼苗分化阶段2．5mg／L6-BA、0．1mg／L NAA和0．5mg／L GA3配合使用有促进芽分化、抑制根分化的作用。     

烟草甲虫高毒力苏云金杆菌的分离与筛选

对云南7个优质主产烟区收集的450份烤后烟样,运用4%NaCl培养基选择分离法,分离出苏云金芽孢杆菌475株。其中对含毒蛋白基因cryⅠ及cryⅤ的18个Bt菌株用2龄烟草甲虫进行生物毒力测定,试验9 d后,9个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过80%;试验12 d后,5个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过95%。同时对分离出的Bt菌进行PCR毒素蛋白基因鉴定,含cryⅠ毒素蛋白基因的Bt菌有7株,出菌率为1.47%;含cryⅤ毒素蛋白基因的Bt菌11株,出菌率为2.32%;没有含cryⅢ毒素蛋白基因的Bt菌。因此,为进一步用苏云金芽孢杆菌防治烟叶仓贮害虫提供了科学依据。     

硝酸铵和植物生长调节剂对花烛愈伤诱导和植株再生的影响

以花烛(Anthurium andraeanum Lind.)品种阿拉巴马和塞拉叶片为外植体,研究硝酸铵和植物生长调节剂对花烛愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,将硝酸铵用量减少至MS配方量的1/4时,阿拉巴马和塞拉叶片愈伤诱导率分别显著提高285.9%和458.5%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为改良MS(1/4NH4NO3)+TDZ 0.4mg/L+2,4-D 1.0mg/L;不定芽分化和试管苗增殖的最适培养基为1/2MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.5mg/L,添加适量生长素(IBA 0.2mg/L)有利于试管苗生长。     

转Bt基因棉花的研究应用及问题与对策

20世纪80年代初Bt毒蛋白基因被克隆并转化到植物当中,转Bt基因棉花的应用已取得了相当的效益。但随着转Bt基因棉花的种植,也出现了许多问题,诸如抗药性的产生、抗虫谱狭窄、表达水平低等。现在转抗虫基因棉花的研究主要围绕着转多基因抗虫棉的培育,采用特异启动子调控外源抗虫基因在棉株体内的高效表达,修饰Bt基因以改善Bt毒蛋白的杀虫效能,重视外源与内源抗虫系统间的协调性,加强现代基因工程与传统抗虫育种相结合和筛选广谱性抗虫基因培育广谱性抗虫棉花,等等。     

苹果组培苗离体叶片诱导不定芽分化

以福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片为试材,研究了植物生长调节剂、基因型、暗培养、AgNO3对苹果叶片不定芽分化的影响.结果表明:福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片分化最佳培养基分别为MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.20 mg/L,MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.10 mg/L,MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.05 mg/L;基因型是决定苹果组培苗叶片分化的重要因素,3个苹果品种叶片分化不定芽的能力从大到小依次是福早红、鲁加6号、鲁加3号;暗培养可以明显促进苹果叶片进行脱分化,提高叶片的分化率,苹果叶片暗培养处理的最佳时间为15 d;AgNO3抑制苹果叶片愈伤组织的形成,不能促进其叶片不定芽的形成.     

根癌农杆菌介导LFY基因转化苹果的研究

将苹果杂交种（长富2号×新红星）种子打破休眠,经消毒处理后接种在MS培养基上获得无菌组培苗。以组培苗叶片为试材,通过不同激素组合试验,获得了适宜植株再生的培养基MS＋NAA 0.4 mg/L＋TDZ 2.0 mg/L。利用含LFY基因的根癌农杆菌EHA105转化苹果叶片,得到转LFY基因的阳性植株,经PCR和RT-PCR检测,有2株出现特异性条带,证明该基因已经整合到苹果基因组中。     

高温对转基因抗虫棉中Bt杀虫基因表达的影响

 Bt抗虫棉中Bt杀虫基因能否稳定表达是影响转基因抗虫棉应用前景和商品化生产的重要因素。以转基因双价抗虫棉139-20的R5代材料，通过不同温度处理，研究温度处理对Bt杀虫基因表达的影响。结果表明，温度变化影响抗虫棉早期的生长发育和Bt杀虫基因的表达，从而影响了抗虫棉生长发育过程中Bt杀虫蛋白含量降低的时间。高温处理后可使Bt杀虫基因在生长发育期中的沉默时间提前，导致Bt杀虫蛋白含量急剧降低，具体原因可能是由于转录后水平的基因表达调控，引起特异Bt 杀虫基因mRNA的降解。因此，在生产实际中，应予以提前采取措施，预防高温期棉铃虫危害。     

Nitrogen spraying affects seed Bt toxin concentration and yield in Bt cotton

Cotton bolls exhibit the lowest insecticidal efficacy among all organs of Bt cotton, which would ultimately affect the yield formation. The objective of this study was to investigate the effects of different urea concentrations on the seed Bt protein contents, seed cotton yield and the corresponding protein metabolism mechanism. The experiments were conducted during 2017–2018 cotton growing seasons. Two cultivars, Sikang 3(hybrid, SK3) and Sikang 1(conventional, SK1), were treated with six urea concentrations and their seed Bt protein contents were compared during boll formation period. The urea spray concentration had a significant effect on the seed Bt toxin content and seed cotton yield. Spraying of either 5 or 6% urea led to higher insecticidal protein contents and higher seed cotton yield for both cultivars. Moreover, the highest amino acid and soluble protein contents, as well as GPT and GOT activities, and lower protease and peptidase activities were observed at the 5 to 6% urea levels. Significant positive correlations between the seed Bt toxin and amino acid contents, and between the seed Bt toxin content and GPT activities were detected. The lower boll worm number and hazard boll rate were also observed with the 5 to 6% urea treatments, which may be the reason why nitrogen spraying increased the seed cotton yield. Therefore, our results suggested that the seed Bt toxin content and insect resistance were impacted markedly by external nitrogen application, and 5 to 6% urea had the greatest effect on insect resistance.     

转Bt基因抗虫棉Bt基因表达的时空动态

以转Bt基因抗虫棉 33B为材料 ,利用ELISA检测方法 ,通过对棉株不同发育时期和同一时期的不同组织或器官Bt晶体蛋白含量的测定 ,研究了转Bt基因抗虫棉Bt基因表达的时空变化。结果表明 ,随着棉株生育进程的推进和株体的老化 ,Bt晶体蛋白含量随着植株体内可溶性总蛋白含量的逐渐降低而降低 ,而Bt基因的表达强度从苗期到蕾期随着棉株营养生长的加快而呈上升趋势 ,至蕾期达到高峰 ,以后逐渐减弱。不同组织或器官Bt晶体蛋白的含量也有较大差异 ,表现在幼嫩组织或器官的含量较高 ,成熟组织或器官次之 ,衰老组织最低。这说明Bt基因表达强度的减弱和Bt晶体蛋白含量的降低是转Bt基因抗虫棉生育后期抗虫性降低的根本原因     

氨肽酶N(APN)与鳞翅目昆虫对Bt抗性的关系

使用Bt Cry毒素防治农业害虫是作物生产上的一个革命性的进步,受体与Bt杀虫蛋白结合能力的改变可能是昆虫对Bt产生抗性的主要原因。氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)是一类存在于昆虫中肠内的Bt毒素受体蛋白,通过讨论APN与Bt毒素的结合作用,综述了APN基因变异与鳞翅目昆虫Bt抗性相关的分子机理,并介绍了(Bt)Cry毒素与APN相关的作用方式新模型。