从烟草悬浮细胞制备辅酶Q10的初步研究

采用细胞悬浮的方法,从４个烟草品种（系）中筛选出辅酶Ｑ１０含量较高的黄花大金元,以其悬浮培养细胞为材料,比较了几种植物生长调节剂对细胞生长和辅酶Ｑ１０含量的影响。结果表明,０．１￣０．２ｍｇ／Ｌ的ＢＡ和ＫＴ对烟草细胞有显著的促进作用,但使辅酶Ｑ１０含量略有降低;０．５￣８．０ｍｇ／Ｌ的２,４－Ｄ可显著提高辅酶Ｑ１０含量,但当其浓度高时对细胞生长不利;ＩＡＡ和ＮＡＡ对烟草细胞生长和辅酶Ｑ１０含量均无     

培养条件对烟草细胞生长和CoQ10含量的影响

双红花大金元品种的烟草为材料,采用细胞悬浮培养方法,对影响烟草生长和ＣｏＱ１０含量的细胞培养条件、ＰＨ、温度、接种量、扔床转速及装液量等进行了研究。结果表明,烟草细胞在培养基原始ＰＨ４．０～８．０下均能生长,但在ＰＨ６．０时细胞生长最地,ＣｏＱ１０含量最高;接种量仅能影响细胞培养周期,而不影响ＣｏＱ１０的形成,但超过２８℃则不利于烟草细胞的生长,ＣｏＱ１０总量并不增加;摇床转速和装液量对细胞生长和     

猪心中提取和纯化辅酶Q10（联产CytC）

辅酶Ｑ１０和细胞以素Ｃ是促生物氧化酶类生化药物,本试验从猪心中提了和纯化辅酶Ｑ１０,并联产细胞以素Ｃ。猪心以酸性水液粗提,细胞色素Ｃ经人造沸石吸附,洗脱,盐析,三氯乙酸沉淀,弱酸性阳离子吸附,真空干燥得２２５ｍｇＣｙｔＣ／ｋｇ猪心,纯度７９％,提取后的猪心渣,用醇皂化法,经硅胶桂层板,无水乙醇结晶,重结晶,每千克猪心中撮辅酶Ｑ１０７５ｍｇ,含量为９５．３％。     

烟草细胞培养生产辅酶Q10的动力学研究

烟草细胞培养是获得辅酶Q10的一条有效途径。在黄花烟草细胞株培养过程中,对生物量、总糖、辅酶Q10的含量进行监测,建立起在烟草细胞悬浮培养过程中细胞生长、蔗糖消耗、辅酶Q10生成的动力学方程模型,各方程曲线与实验点拟合较好,相关系数均达到99%以上。     

NC89烟草悬浮细胞生产辅酶Q10的条件优化

研究了NC89烟草悬浮细胞的最佳培养方案,为进一步提高辅酶Q10的产量提供理论依据.通过单因素试验和正交试验考察了培养基种类、蔗糖浓度、接种量、转速、pH值和装液量对烟草细胞生长及辅酶Q10合成的影响.结果表明:接种量对细胞的生长及辅酶Q10合成的影响作用极显著;蔗糖浓度对二者的影响均不显著,优选蔗糖浓度为20g·L-1;装液量对辅酶Q10合成的作用显著,而对细胞生长作用不显著;优选转速为110r·min<-1>,pH值为6.2.可见,适于NC89烟草细胞生长及辅酶Q<,10>合成的优选培养条件为White基本培养基,附加蔗糖20g·L-1,装液量为20mL(100mL三角瓶),接种量75g·L-1,初始pH值为6.2,摇床转速为110r·min-1.在该条件下细胞产量和辅酶Q10含量分别为16.653g·L-1和14.780mg·L-1.     

烟草细胞悬浮培养生产CoQ10的动力学研究

以烟草（Nicotiana tabacum L．）细胞作为材料，用改良后的培养基进行悬浮培养，在培养周期内不同的培养阶段，对烟草细胞生长和培养基中碳源、硝态氮、磷酸盐等无机元素含量的变化及烟草细胞内CoQ10合成的情况进行了测定．结果表明，在细胞培养周期内，细胞生长与次生代谢产物的合成基本上同步；培养基中碳源、硝态氮和磷酸盐的消耗曲线与细胞生长的3个阶段基本上一致．     

乙酰辅酶A对银柴胡细胞生长特性及保护酶活性的影响

利用细胞悬浮培养技术,研究不同浓度的乙酰辅酶A对银柴胡细胞生长特性及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性的影响.结果表明,在培养液中银柴胡细胞的生长曲线均呈S形,培养周期为12 d.在M3(MS+乙酰辅酶A 0.001μg/ml+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L)的细胞干重、细胞数目均明显高于其他处理及对照;M3处理可有效增强银柴胡细胞活力、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性.     

Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响

用Ｃｕ＾２＋对红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）培养细胞中紫杉醇形成的影响进行了研究。在红豆杉细胞悬浮培养２０ｄ即指数生长期末,每１Ｌ细胞悬浮培养物中加入３０μｍｏｌ ＣｕＣｌ２,Ｃｕ＾２＋促进紫杉醇形成的作用最大。添加ＣｕＣｌ２对红豆杉细胞生长没有明显影响,但引起培养细胞中可溶性蛋白质含量、苯丙氨酸解氮酶活性及培养基ｐＨ值的变化。     

BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究

[目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果]细胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ml,牛血清的最佳含量为5%,BHK21细胞培养液理想pH为7.0~7.2,采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论]为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。     

粘虫胚胎细胞继代培养条件的研究

对粘虫胚胎细胞的继代培养条件进行了研究。结果表明,ＴＣ－１００（ＳＩＧＭＡ）培养基最适合细胞生长。不同血清浓度和ｐＨ的培养基对细胞生长影响很大,以１０％小牛血清浓度和ｐＨ６．２的培养基对细胞传代培养最为适宜。细胞生长依赖于细胞接种密度,以 ５×１０~５细胞／ｍＬ细胞接种密度对细胞生长最为适宜。适于细胞培养的最适温度范围是２６－２９℃。     

鱼类干细胞育种技术回顾与展望

鱼类是优质动物蛋白的重要来源,其中养殖鱼类占重要地位,而通过选择育种、杂交育种等传统方法和分子辅助育种、基因编辑等新技术培育优良品种是鱼类养殖业健康持续发展的关键.近年来,鱼类干细胞技术特别是细胞移植和诱导技术快速发展,为鱼类优良品种培育提供了新的技术途径.介绍了鱼类干细胞育种的现状及应用,总结了鱼类干细胞育种技术面临...     

北京鸭视网膜移动性无长突细胞的分布

利用视神经溃变试验和Nissl染色法研究了北京鸭视网膜移动性无长突细胞 (dACs)的形态、大小与密度分布。北京鸭dACs是位于视网膜节细胞层的小神经元 ,核深染 ,胞质很少 ,细胞体呈圆形或卵圆形 ,细胞大小均一 ,平均面积为 19～ 2 5 μm2 。在视网膜中央有一个dACs高密度区即中央高密度区 (CA ,386 0个·mm-2 ) ,dACs的密度由视网膜中央部向视网膜周边部逐渐降低 (TP ,约为 1780个·mm-2 ;NP ,约为 176 0个·mm-2 )。试验结果表明北京鸭视网膜中央部和周边部的dACs大小差异不明显 ,但dACs在节细胞层密度分布不均 ,呈现由视网膜中央部至周边部密度梯度递减的变化     

仔猪肠黏膜上皮细胞体外培养及其对小檗碱适应性的研究

为了体外分离培养和鉴定仔猪肠粘膜上皮细胞,探讨小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全剂量。本试验取刚出生未吃初乳的仔猪小肠的回肠段,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ进行消化处理,获得原代仔猪肠粘膜上皮细胞,用免疫组化法对培养的仔猪肠粘膜细胞进行鉴定,用MTT检测法测定硫酸小檗碱对仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度。结果表明:免疫组化法分离培养的细胞膜呈棕黄色,为粘膜上皮细胞。硫酸小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度为20μmol/L。     

鸽骨骼肌卫星细胞的分离、培养及成肌特性

【目的】探讨白羽王鸽Columba livia骨骼肌卫星细胞的分离、培养和鉴定的方法,建立完整的家鸽骨骼肌卫星细胞的培养体系。【方法】选择孵化16 d的鸽胚作为试验材料,采用组织块贴壁法和胶原酶消化法分离胸肌的骨骼肌卫星细胞并绘制其生长曲线。待卫星细胞分化出肌管后,采用免疫荧光法检测肌球蛋白重链(MyHC)的表达;在细胞分化出肌管前、后分别提取总RNA,采用RT-qPCR方法检测Desmin、Pax7、MyoG和MyoD1基因在细胞分化出肌管前、后的相对表达量。【结果】组织块贴壁法和胶原酶法均能成功地分离出骨骼肌卫星细胞,其生长曲线呈"S"型;该细胞经含体积分数为20%FBS的DMEM高糖培养液培养7 d后视野中出现大量明显可见的肌管,成肌特异性标志MyHC表达呈阳性。RT-qPCR结果表明,Desmin和MyoG基因分化后的相对表达量分别是分化前的5.68和10.38倍,而Pax7和MyoD1基因分化前的相对表达量分别是分化后的7.01和5.51倍。【结论】建立了鸽骨骼肌卫星细胞的培养体系,为今后进行家鸽肌肉发育的研究提供细胞模型。     

3种培养体系下人胚胎干细胞神经诱导分化的比较

【目的】比较人胚胎干细胞在人胚胎成纤维细胞、鼠胚胎成纤维细胞饲养层和无饲养层3个诱导体系下形成神经上皮祖细胞的能力。【方法】将人胚胎干细胞在人、鼠胚胎成纤维细胞饲养层或无饲养层体系中诱导10 d后,检测其胚胎干细胞和神经上皮祖细胞相关基因(Oct4、Nestin、Pax6、Sox1、Sox2、Sox3、β-actin)的表达,用免疫荧光染色法检测神经上皮祖细胞抗原标记Pax6、Musashi、Nestin和胚胎干细胞抗原标记SSEA4的表达。【结果】3种诱导体系下均有神经上皮祖细胞形成,均表达神经上皮祖细胞抗原标记Pax6、Musashi、Nestin及Pax6、Nes-tin、Sox家族基因。无饲养层体系诱导后的细胞,Oct4基因的表达高于有饲养层体系;其SSEA4染色阳性细胞比例为(26.3±3.5)%,高于有饲养层体系;其Pax6和Musashi染色阳性细胞比例分别为(81.0±3.0)%,(79.0±4.4)%,均低于有饲养层细胞体系。【结论】人胚胎干细胞在有饲养层和无饲养层体系中均可诱导分化形成神经上皮祖细胞,但无饲养层体系的效率相对较低,且有未分化胚胎干细胞残余。     

SD大鼠肾小管上皮细胞两种原代培养及传代方法的比较

目的：建立较理想的大鼠肾小管上皮细胞原代培养、传代及鉴定方法。方法：采用肾小管节段贴块法及0．2％胰蛋白酶消化20min两种方法进行原代培养,以0．25％胰蛋白酶(A组)、0．125％胰蛋白酶-0．02％EDTA(B组)消化传代,利用免疫细胞化学方法鉴定细胞种类。结果：两种方法均能成功培养肾小管上皮细胞,但前者较好,小管节段贴壁早。B组成功传代(4代)并鉴定为肾小管上皮细胞,A组传代失败。结论：肾小管节段贴块、0．125％胰蛋白酶-0．02％EDTA消化是大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代的有效方法。     

鸭梨果实石细胞分化特性研究

以鸭梨为试材,利用透射电镜显微技术和组织化学技术对梨果实石细胞分化及次生壁形成过程进行研究。结果表明,石细胞分化始于开花第7天,原生质体收缩于细胞一侧,随后胞内出现颗粒状凝聚物,次生壁逐渐增厚,之后胞质继续收缩消失,早期形成的石细胞多以群体形式同时出现。石细胞次生壁形成是逐步进行的,即先形成纤维素或半纤维素网架结构,再进行木质化填充。透射电镜下石细胞分化过程中依次呈现出细胞核染色质凝聚、细胞核变形、核膜界限不清晰的现象;胞内出现同心层次的自噬泡,形成大量囊泡;细胞核消失,内质网断裂并大量增生,质膜向内突起形成泡状结构;次生壁增厚,胞内细胞器仅有线粒体和内质网,最终细胞质收缩消失。     

奶山羊乳腺上皮细胞的体外培养及形态观察

【目的】建立奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法,并对原代和传代细胞进行形态观察。【方法】分别采用组织块法和胶原酶消化法培养奶山羊原代乳腺上皮细胞,然后通过胰酶消化法结合反复贴壁法纯化细胞,免疫组化法鉴定细胞,并利用倒置显微镜观察细胞形态。【结果】组织块法和胶原酶消化法均能培养奶山羊原代乳腺上皮细胞;纯化获得的细胞呈卵圆形或多角形,形成典型的鹅卵石或铺路石样,且细胞角蛋白检测呈阳性;多次传代后乳腺上皮细胞出现分化现象,形态多样,增殖仍然旺盛。【结论】成功建立了一种简单易行、经济而实用的奶山羊乳腺上皮细胞体外培养方法。     

Characterization and fine mapping of a semi-rolled leaf mutant srl3 in rice

Moderate leaf rolling can maintain leaf erectness, improve light transmittance in the population, and improve light energy utilization, thereby increasing rice yield. This study used ethyl methanesulfonate (EMS) to treat Yunjing 17 (YJ17) and obtained a semi-rolled leaf mutant that was named semi-rolledleaf3 (srl3). We found that the rolled-leaf phenotype was due to the aberrant development of bulliform cells and the loss of sclerenchymatous cells. In addition, the shoot and root length of srl3 seedlings differed from the wild type. The srl3 mutant had significantly lower plant height and seed-setting rate but notably greater tiller number, panicle length, and primary branch number per panicle than the wild type. Genetic analysis showed that a single recessive nuclear gene defined the srl3 mutant, and it was precisely located in a 144-kb region between two insertion-deletion (InDel) markers, M8 and M19, on chromosome 2. In this region, no leaf-rolling-related genes have been reported previously. Thus, the study indicated that SRL3 is a novel leaf-rolling-related gene, and the results laid the foundation for the cloning and functional analysis of the SRL3 gene.     

猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的分离培养

为了获得高纯度的猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,对猪子宫内膜进行胶原酶消化,分离基质细胞和腺上皮细胞进行体外培养,研究其生长特性.结果表明:猪子宫内膜组织在37℃、通过1 g/L胶原酶Ⅰ消化90 min可以获得游离的腺体,对腺体进行培养时上皮细胞比例可达70％以上.培养过程中采用差速消化和差速贴壁可以成功分离腺上皮细胞和基质细胞.基质细胞最适贴壁时间为25 min,腺上皮为3h.纯化的基质细胞生长迅速,可传5代以上,上皮细胞生长缓慢,并且成片脱落.