LAMP法在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

对LAMP试剂盒的准确性、特异性和灵敏度进行鉴定,同时对11枚体外胚胎和38枚体内胚胎进行性别鉴定。结果表明:血样DNA的鉴定结果与实际性别吻合;LAMP试剂盒的灵敏度很高,且只对牛有特异性;对胚胎样品的鉴定结果与实际性别吻合。     

利用胚胎染色体分析法验证PCR鉴定小鼠胚胎性别技术的研究

 本实验用小鼠切割胚制备了73枚囊胚和扩展囊胚的染色体性别鉴定标本，将其中26枚胚胎的活组织样品（含5-10个细胞）进行聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,简称PCR），以检测Y染色体性别决定区（Sex determining region of the Y,简称SRY）片段的存在，并鉴定胚胎的性别。26个样品中有24个的性别鉴定结果和染色体分析的结果相符，从而证明用PCR鉴定小鼠胚胎性别技术的准确率为92.3%(24/26)。     

巢式PCR扩增SRY基因进行奶牛胚胎性别鉴定

依据牛Y染色体上SRY基因的特异序列设计、合成2对内外引物,从妊娠奶牛血浆中提取胎儿游离DNA,富集、浓缩后进行特异性巢式PCR扩增以鉴定奶牛早期胚胎的性别.结果表明,巢式PCR扩增SRY基因对不同发育阶段奶牛胚胎性别鉴定的平均准确率为80％,其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄的性别鉴定准确率分别为60％、85,7％、92,3％.试验证明该方法可行,准确率较高.     

应用巢式及复合PCR对小鼠早期胚胎进行性别鉴定

根据小鼠SRY基因，设计并合成内外两对巢式PCR引物；同时。根据ZFY—ZFX基因的同源性，设计合成其共同的巢式PCR引物，对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定。雄性样品可扩增262bp的SRY基因和137bp的ZFY—ZFX基因片断，而雌性样品只能扩增137bp的ZFY-ZFX基因片断，其鉴定结果与已知性别一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增，通过常规PCR与巢式PCR、复合PCR的比较。确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎，其中雄性12枚，雌性8枚，鉴定准确率为95．2％。     

安哥拉山羊胚胎的手术回收和移植

对３５只安哥拉山羊超排处理，配种后第３天放置阴道海绵栓，第６日由子宫手术回收胚胎。３１只发情配种的供体，共回收胚胎２０４枚，平均每只供体获可用胚４．３±３．９６枚。其中卵巢有功能黄体无大卵泡的６只供体，回收胚胎５１枚，回收率为８７．１５％±１５．９８％，平均每只获可用胚８．１±２．９６枚。卵巢上有大卵泡、或子宫及输卵管有病变者可使回收率和可用胚胎数严重降低。由于配种后放置了阴道栓，８只有黄体退化倾向的供体，平均每只仍获得可用胚４．６枚。移植桑椹胚和囊胚的５１只受体，３６只妊娠，妊娠率为７０．６％．移植４～１６细胞胚胎的对照组，妊娠率为５１．６％．本研究还证明，移植单胚较移植双胚的胚胎成羔率提高２８％以上     

家畜繁殖生物技术研究现状及趋势

牛胚胎移植技术已趋于成熟。我国新疆牧科院用一步细管法移植牛冻胚受胎率达41%;牛和羊鲜胚四分胚移植也产下1头犊牛和6只羔羊。家畜体外受精,因卵子体外成熟和受精卵体外培养尚不过关,目前仍停留在实验室阶段。胚胎性别鉴定,1990年Koopman发现单拷贝基因,该基因是Y染色体的性决定区,命名为SRY,可利用PCR技术制成雄性特异DNA探针盒,进行马、牛、羊、猪早期胚胎性别鉴定。北京农学院等单位用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别鉴定准确率达100%。英、日、法等国已获得牛胚胎细胞核移植后代;我国也获得1只核移植兔。北农大和新疆牧科院合作以绵羊精子为载体导入牛生长激素基因rMTbGH DNA成功,外源基因整合率为3%。     

PCR法进行胚胎性别鉴定的研究进展

通过胚胎性别鉴定,可控制家畜后代性别比例,获得巨大经济效益。早期胚胎性别鉴定的方法有,核型分析法,H-Y抗原法,X-连接酶检测法和PCR扩增法等。PCR法因其简单、快速、准确等优点,成为目前比较理想的胚胎性别鉴定方法。笔者对性别决定基因、PCR法胚胎性别鉴定的几个关键环节进行了综述,并对其前景进行了展望。     

初情期前母猪胚胎移植试验

１７７枚受精卵或２－细胞期胚胎，手术法移植到８头发情同期化的青年母猪体内，结果有４头妊娠，其中３头受体足月产仔２２只，另一头受体在妊娠８８天后宰杀，发现有６个发育正常的胎儿。移植受体妊娠率为５０％，移植卵成仔（胎）率为１５．８％。     

肉羊胚胎移植成活的影响因素实例分析

【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P0.01);胚胎卵裂期与囊胚期移植妊娠率差异不显著(P0.05),但以2细胞移植的妊娠率最低;鲜胚与冻胚的妊娠率差异不显著(P0.05),2枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率,胚胎妊娠率随着胚胎质量而下降;囊胚与受体同期性差-24 h,妊娠率差异不显著(P0.05);放牧与舍饲的受体羊在胚胎妊娠率方面没有显著差异性(P0.05)。【结论】胚胎和受体因素对胚胎发生成功妊娠具有重要的影响。     

安格斯（Angus）牛冻胚洲际间引种试验

用安格斯牛７日龄冻胚１６枚，在液氮中保存８９４ｄ后，用３６℃水浴解冻（２５Ｓ），全部回收。在室温２７℃条件下，用１０％蔗糖一步脱除抗冻剂（甘油）１０ｍｉｎ后，移入２０％犊牛血清ＰＢＳ１０ｍｉｎ，再移人同样浓度的犊牛血清ＰＢＳ中１０ｍｉｎ，按常规形态鉴定方法．对胚胎评级，１０枚为可用胚胎，解冻后胚胎可用率为６２．５％，将１０枚可用胚胎用非手术法，移入发情周期与胚胎发育期同步的５头受体牛，结果２头妊娠，移植妊娠率为４０％。妊娠足月后，２头受体牛各产公犊１头，试验结果表明，在液氮中保存８９４ｄ之久的安格斯牛冻胚，进行洲际间引种能够成功，这也是安格斯牛冻胚洲际间引种，在我国首次获得成功。     

牛早期胚胎PCR法性别鉴定条件的优化

对牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系及反应程序进行了优化。结果显示,选用双套引物和连续复合PCR方法,先用雄性特异性引物进行10个循环,然后再加入牛特异性引物进行22个循环,共32个循环,可实现两种基因片段的同时扩增,保证了PCR的准确性。胚胎移植结果显示该方法准确可靠。     

杜泊绵羊冷冻胚胎移植

介绍了从新西兰引进的冷冻杜泊羊胚胎解冻后移植到同期发情湖羊和小尾寒羊母羊受体的方法步骤,并分析、评价了胚胎移植的效果。结果表明:受体羊总平均同期发情率为78.4%,胚胎移植利用率达49.1%,妊娠率达59.4%,产羔率达58.0%,羔羊出生重为4.7 kg(公)和4.3 kg(母),羔羊1月龄和3月龄体重分别为14.9kg和32.4 kg;不同批次和不同品种受体间胚移效果亦存在不同程度的差异;4批次试验共移植冷冻胚胎475枚,产羔266只,现存活245只。该研究建立了可靠而有效的杜泊绵羊冷冻胚胎移植技术,有望在畜牧业科研和生产中广泛推广应用。     

多重PCR鉴定水牛胚胎性别的研究

【目的】建立多重PCR鉴定水牛胚胎性别的技术体系,为下一步优化多重巢式PCR方法奠定基础。【方法】采用热裂解法、蛋白酶K+二硫苏糖醇（DTT）法和吐温-20+DTT法分别提取水牛卵裂球DNA,比较3种方法对G3PDH基因的扩增效果;同时设计1对检测引物和1对内标引物用于胚胎性别鉴定,提取胚胎DNA后进行多重PCR检测。【结果】吐温-20+DTT法具有良好的裂解效果,其有效检出率为97.1%;而经吐温-20+DTT法抽提的DNA用于多重PCR检测,其胚胎鉴定率达到100.0%。【结论】采用吐温-20+DTT法处理水牛胚胎样品后再进行多重PCR性别鉴定可以简化操作步骤、提高鉴定效率,但样品数量不宜太少。     

PCR技术在胚胎性别鉴定中的应用

家畜早期胚胎性别鉴定对畜牧业生产具有重要的现实意义。本文扼要介绍了胚胎分割技术和采用PCR技术鉴别牛、羊等家畜胚胎性别的操作程序,对影响该技术雌雄判定率的因素进行了综合分析。对这种方法的研究现状、各种技术细节的主要优缺点和发展前景进行了系统介绍。     

波尔山羊胚胎移植技术及应用效果研究

采用CIDR+FSH方法,对66只周岁波尔山羊进行超数排卵处理,63只超数排卵有效,有效率达到95.45%;平均每只羊冲取胚胎15.35枚,其中最高个体获得胚胎43枚。采用CIDR+PMSG方法对本地山羊进行同期发情处理,24h内发情率达到87.67%。对受体羊单胚移植后,两个情期的不返情率达62.76%,实际产羔率为51.46%。受体羊与供体羊的发情时间同步、晚12h、晚24h,胚胎移植受胎率差异不大,受体羊第二次手术与第一次手术移植对产羔率影响不大。     

应用巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别

为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

嵌套式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别体系的建立

应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优化,以准确鉴定牛早期胚胎性别.结果表明,在优化了的PCR反应体系下,中国荷斯坦公牛DNA样品得到178bp和262bp的两个条带,而母牛仅得到262bp的1个条带;静脉血样DNA性别鉴定结果与实际性别相符率为100%,表明本试验建立的体系完全可以用于牛早期的胚胎性别鉴定.