胚胎移植技术在扩繁德系西门塔尔牛核心群中的应用

13头德系西门塔尔供体牛连续4次重复超排,生产胚胎654枚（头均50.31枚）,可用胚胎335枚（头均25.77枚）;4次冲胚的平均回收胚数,可用胚数差异均不显著（P>0.05）。移植受体牛278头次（鲜胚移植115头,冻胚移植118头,双半胚移植45头）,妊娠率55.04%（153/278）,共获得犊牛137头。其中鲜双半胚和鲜胚移植妊娠率显著高于冻胚（64.44%,60.87% vs 45.76%）（P<0.05）。45枚鲜胚二分后移植到45头受体牛,29头妊娠,其中11头产双胎,双犊率为37.93%（11/29）,存活犊牛29头。     

波尔山羊胚胎克隆的研究

以波尔山羊早期胚胎卵裂球作为核供体进行核移植,比较受体卵母细胞来源以及不同发育阶段胚胎的卵裂球对核移植重构胚的融合率的影响,研究Vero细胞对重构胚体外发育的影响,检测重构胚发育成为个体的能力。结果表明:以体内成熟和体外成熟卵母细胞做核移植受体,重组卵的融合率分别为85.7%和88.7%,二者之间差异不显著(P>0.05);以来源于8,16,32细胞阶段的卵裂球做核供体,重组卵的融合率分别为91.6%,86%,89.2%,三者之间差异不显著(P>0.05);融合后的重构胚与Vero细胞单层共培养,卵裂率65.5%和桑椹胚率32.7%均高于单纯TCM199培养的53.1%和10.6%(P<0.05);移植18枚融合后的重构胚于2只受体山羊输卵管,结果未获得妊娠;移植经体内培养得到的3枚桑椹胚于受体山羊子宫内,获得妊娠1只,总体的妊娠率为33%(1/3),怀孕的受体羊维持妊娠到期,产下1只母羔,初生重3.45 kg,一周岁时体重达到42.5 kg。通过自然交配产下一对波尔山羊羔。     

胚龄对Dorper羊冷冻胚胎移植效果的影响研究

通过胚胎移植技术 ,将 4胚龄、 5胚龄、 6胚龄、 7胚龄Dorper羊冷冻胚胎共计 1 1 9枚移植到 1 1 9只中国优秀地方绵羊品种—小尾寒羊体内 ,观察统计不同胚龄冷冻胚胎的移植妊娠率。以产羔记录统计的 4胚龄、 5胚龄、 6胚龄、 7胚龄冷冻胚胎的移植妊娠率分别为 4 3 75 %、6 5 1 2 %、 6 3 6 4%和 4 5 4 5 %。该试验结果表明 ,胚胎发育阶段即胚龄对冷冻胚胎移植效果具有明显影响。     

影响山羊胚胎移植效果的因素初探

为探讨最佳的胚胎移植方案,提高胚胎移植效率,试验以不同受体山羊为研究对象,比较了不同受体品种、移植胚胎数目、不同季节等因素对胚胎移植效果的影响。结果表明：不同品种受体和移植季节对胚胎移植效果影响不显著（P＞0.05）;胚胎移植数目对妊娠率没有显著影响（P＞0.05）,但移植一枚胚胎的胚胎受孕率显著高于移植二枚和三枚胚胎（P＜0.01）。     

奶牛性别控制胚胎移植试验

将分选X型冻精与常规冻精品质进行比较,结果显示:分离x精子精液密度、活率、存活指数等各方面均明显低于常规冻精(P0.05);使用分选X型冻精4支进行体内受精胚胎生产,结果显示:对排卵数小于17枚的供体母牛进行体内受精胚胎生产效果良好,大于17枚则部分未受精;分选X型冻精奶牛鲜胚双胚移植与分选X型冻精奶牛鲜胚单胚移植进行比较,结果显示:性控奶牛鲜胚双胚移植与单胚移植产犊率差异不大,双胚移植经济效益较高;分选X型冻精与常规冻精所产母犊比较,结果显示:性控胚胎移植所产犊牛出生时和60日龄时体重与常规冻精所产犊牛差异不显著(P0.05)。     

优质绵羊冷冻胚胎引进及胚胎移植试验

2014—2015年先后从澳大利亚西奥谷河育种公司引进萨福克和肉用美利奴肉羊冷冻胚胎773枚。解冻后可用于移植的胚胎为739枚,移植受体羊739只。其中,A级胚胎553枚,B级胚胎186枚,且A级胚胎移植受胎率为50.27%(278/553),明显高于B级胚胎的39.25%(73/186),差异显著。同时,对比了大尾羊和细毛羊2种受体羊品种间的受胎率,结果为差异不显著。不同饲养条件下胚胎移植受胎率结果显示,全舍饲羊受胎率为39.56%(178/450),放牧羊受胎率为49.48%(143/289),两者差异显著。大规模进口肉羊冷冻胚胎进行移植在基层生产单位的成功应用,为肉羊产业发展提供了优良的种质资源。     

利用胚胎冷冻法保护马头山羊地方良种的方法学研究

为了研究利用胚胎冷冻技术保护马头山羊品种的可行性,以及探讨最佳的保种方案,该研究结合品种标准和分子标记辅助选择技术,选择25只有代表性的马头山羊母羊进行超数排卵、胚胎冷冻及移植研究.结果表明,INHA基因在马头山羊有多态位点,GG型供体母羊超排后只均获胚胎数(15.75±0.42)和只均可用胚胎数(14.90±0.38)均最高(P>0.05);中等膘情、上胎产4羔以上的母羊超排效果最好(P<0.05),可用胚胎率达94%以上;P4+LHRH-A3组超排后只均获胚胎15.63枚、只均可用胚胎14.75枚,显著高于对照组(CIDR+FSH+PG)(P<0.05);公母比例1:1、间隔8h本交或人工授精后可用胚胎率达94%以上,能显著提高超排效果(P<0.05),但本交组和人工授精组之间差异不显著(P>0.05);间隔2个月进行重复超排对超排效果无显著影响(P>0.05).细管玻璃化冷冻解冻后胚胎形态正常率(84.09%)和囊胚发育率(63.51%)显著高于OPS冷冻法(P<0.05);不同解冻方法和解冻时水浴温度对胚胎质量无显著影响(P>0.05).受体羊经CIDR处理后同期发情率达85.71%,高于孕酮海绵栓处理组(78.57%),经产母羊移植妊娠率(46.67%)高于育成母羊(37.50%),但均无显著性差异(P>0.05).表明运用胚胎冷冻法保护马头山羊品种资源是可行的,并探讨了一套最优化的操作规程.     

奶牛冷冻胚胎规模化移植效果研究

为了提高奶牛良种化程度,对奶牛冷冻胚胎的规模化移植效果进行了研究。结果表明:PG二次肌注法的发情率显著高于(P<0.05)PG一次肌注法,两种方法的发情同期率均超过85%,受体牛发情时间多集中在肌注PG后48～72h;胚胎解冻后的复苏率达到82.58%,且早期囊胚与囊胚的复苏率要高于桑椹胚(P>0.05);共移植受体牛218头,受胎97头,受胎率为44.5%,且春、秋季的移植效果差异不显著(P>0.05)。为奶牛冻胚的规模化移植研究提供了参考依据。     

布尔山羊异地采集胚胎与移植效果的研究

将55只饲养管理条件和超排处理方法相同的成年布尔山羊随机分成试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组。各组供、受体羊的比例为1:13。试验Ⅰ、Ⅱ组分别经3和6h,在采卵前2~4h运抵采胚、移植地点,对照组在原饲养地采胚\移植。结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ组供体羊平均每只采集有效胚12.91和13.38枚,对照组为15.30枚,但差异不显著。而膘情较好的试验Ⅰ组受胎率最高(71.29%),流产率最低(2.68%)。膘情较差的试验Ⅱ组受胎率最低(51.68%)流产率最高(9.09%);膘情居中的对照组受胎率(65.66%)和流产率(3.08%) 介于前二者之中。     

影响西门塔尔牛超数排卵效果的因素研究

为探讨影响西门塔尔牛超数排卵效果的因素,提高供体母牛利用率,加速胚胎移植技术产业化。以头均回收胚数和头均可用胚数为主要技术指标,在湖北和内蒙古乌拉盖进行超排试验,比较经产牛与青年牛、中科院产与加拿大产FSH两种不同超排方案及不同季节等因素对超排效果的影响。结果表明：（1）在农区,青年母牛的头均回收胚数和头均可用胚数分别为9.8、7.5枚,经产母牛分别为7.5、4.2枚,青年母牛显著高于经产母牛(P<0.05);在牧区,青年母牛头均回收胚数和可用胚数分别为10.3、8.4枚,经产母牛分别为8.0、5.5枚,青年母牛显著高于经产母牛 (P<0.05)。（2）在农区,使用中科院产FSH的头均回收胚数和可用胚数分别为8.0、4.8枚,使用加拿大产FSH分别为9.0、5.9枚,中科院产FSH与加拿大产FSH之间差异不显著(P>0.05);在牧区,使用中科院产FSH头均回收胚数和可用胚数分别为8.8、5.5枚,使用加拿大产FSH分别为9.5、6.5枚,中科院产FSH与加拿大产FSH之间差异亦不显著(P>0.05)。（3）在牧区,方案A(FSH+PG)的头均回收胚数和可用胚数分别为7.5、4.8枚,方案B(CIDR+E2+P4+FSH+PG)分别为10.5、8.0枚,方案B显著高于方案A (P<0.05);在农区,方案A的头均回收胚数和可用胚数分别为7.0、4.2枚,方案B分别为9.6、7.1枚,方案B亦显著高于方案A (P<0.05)。（4）在牧区,夏季的头均回收胚数和可用胚数分别为9.6、7.5枚,春季分别为6.0、3.5枚,夏季显著高于春季(P<0.05);在农区,春季的头均回收胚数和可用胚数分别为8.2、5.4枚,秋季分别为9.0、6.7枚,春季与秋季之间差异不显著(P>0.05)。结论：（1）青年母牛可作为供体牛的首选;（2）中科院产FSH能获得好的超排效果,且价格便宜,应为超排首选;（3）CIDR+E2+P4+FSH+PG法的超排效果优于FSH+PG法,前者为首选超排方案;（4）牧区应在夏季超排,农区应在春季和秋季超排。     

无角道塞特羊胚胎移植技术研究

（西北农林科技大学生物工程研究所,陕西杨凌712100）     

鸭胚胎代用蛋壳培养的研究

采用两种方法进行了鸭胚胎代用蛋壳培养,旨在提高出雏率。方法Ⅰ将新鲜种蛋的胚胎转移至代用蛋壳Ⅰ内培养,72h后转移至代用蛋壳Ⅱ内培养至出雏。方法Ⅱ将正常孵化72h后的胚胎转移至代用蛋壳Ⅱ后培养至出雏。方法Ⅰ组出雏率为19.2%(10/52);方法Ⅱ组出雏率为40.4%(21/52)。从第6天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅰ组显著低于方法Ⅱ组和对照组(P<0.05或P<0.01)。第16天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅱ组显著低于对照组(P<0.01)。结果表明方法Ⅰ和方法Ⅱ两种方法均能获得雏鸭,方法Ⅱ优于方法Ⅰ。     

Interspecific hybridisation betweenLimonium perigrinum Bergius andLimonium purpuratum L.

Summary Interspecific hybrids betweenLimonium perigrinum andL. purpuratum were obtained usingL. perigrinum as the female parent. No hybrids were produced by the reciprocal cross. Twelve- to 15-day-old embryos were rescued and cultured within their embryo sacs on modified B5 or KM medium. After two to three days the embryos were excised from their embryo sacs and re-plated on to fresh medium. When the embryo-derived plantlets had attained a length of 1 cm they were transferred to a modified MS medium containing BA and NAA for shoot proliferation. Plantlets were transferred to modified MS medium supplemented with IBA for 24 hours for root initiation then to a modified growth-regulator-free MS medium for root growth. After a further 28 days the plantlets were transferred to soil-less medium for acclimatisation. The hybrid characteristics of one of the 15 embryo-derived plants were determined by flow cytometry and by examination of morphological features. The mean DNA contents of 2C nuclei fromL. perigrinum, the hybrid andL. purpuratum were 13.98 pg, 16.81 pg and 19.37 pg, respectively. Mitotic and meiotic chromosome counts fromL. perigrinum andL. purpuratum showed that both parents and their hybrids had identical chromosome numbers (2n=24), and that the species were closely related. Morphological analyses of leaves and flowers showed that the hybrids displayed a number of features intermediate between both parents.Abbreviations B5 Gamborg et al. (1968) B5 medium - BA benzyl adenine - IBA indole-3-butyric acid - KM Kao and Michayluk (1975) medium - MS Murashige and Skoog (1962) medium - NAA napthalene-1-acetic acid - PVP polyvinylpyrrolidone     

奶牛性控胚胎体外生产的影响因素及控制措施

针对奶牛胚胎体外生产环节,对体外受精和培养等技术进行了研究,旨在建立奶牛性控胚胎体外生产技术体系。结果表明,卵母细胞外周卵丘细胞至少保持3层以上,在成熟基础液中添加10 ng/ml的EGF,利于核质成熟;在精子获能液中添加咖啡因降低精子的存活时间;牛胚胎前3 d用CR1aa+BSA培养,再用SOFaa+5%FBS培养,获得高的囊胚发育率,并且添加50 ng/ml IGF-I后胚胎的发育得到了很大的改善。利用性控精液进行体外受精,受精率有轻微下降,但对生产的胚胎发育质量无明显（P>0.05）影响,胚胎移植后受胎率为40%左右。     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力，应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明：两种处理方法（PG-FSH法与CIDR-FSH法）对波尔山羊的同期发情率无显著差异（P>0.05），波尔山羊同期发情率达到92.5%；CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于（P<0.05）PG-FSH法，而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著（P>0.05），说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明，移胚数量对受体妊娠率无显著影响（P>0.05），而对受体产羔率有极显著（P<0.01）的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

Development and characterization of interspecific hybrids of Trifolium alexandrinum×T. apertum using embryo rescue

This is the first report on the development of interspecific hybrids between Trifolium alexandrinum and T. apertum using embryo rescue and characterization of F₁ plants. T. apertum was used as the male parent and T. alexandrinum as the female parent. Development of interspecific hybrids under natural conditions is not successful and so embryo rescue was attempted. Of the several combinations tried, pollination 2 days after emasculation and embryos rescued 11 days after pollination was found to be the best. For embryo culture, EC3 medium consisting of MS basal supplemented with 2.3 μM kinetin and 3% sucrose was used. Germinated embryos were transferred to LSP3 medium 25 days after inoculation wherein most of the cultures showed multiple shoots that were split and subcultured on RL1 medium for rooting. After hardening, about 75% of hybrids were successfully transferred to the field. The hybrids, in general, showed morphological traits intermediate between the two parents; however, a few hybrids showed better growth than either parent. Some F₁ plants were almost 3 weeks later in flowering than the female parent. Pollen fertility among these plants ranged from 78 to approximately 100%. Chromosomal associations at diakinesis and isozyme banding patterns for acid phosphatase (ACP), superoxide dismutase (SOD) and peroxidase also confirmed the hybrid nature of the plants.