兔出血症病毒两种感染途径的致死性比较研究

为提高猪瘟活疫苗的外源性兔出血症病毒(RHDV)的检测敏感性,进行了RHDV对家兔感染途径的致死性比较试验,以便筛选出具有较高致死性的感染途径。将RHDV通过皮下、静脉两种途径感染家兔,比较了家兔两种感染途径的半数致死量(LD_(50)),同时对1批污染RHDV的脾淋源猪瘟活疫苗采用皮下、静脉两种途径注射家兔进行RHDV检测。结果表明,静脉途径对家兔的LD_(50)是皮下途径的126倍;污染疫苗的检测应用也表明家兔感染的静脉途径比皮下途径更加敏感,提高了猪瘟活疫苗外源性RHDV污染的检出率;RT-PCR证实了注苗死亡家兔的肝脏组织含有RHDV。本试验可为《中国兽药典》的修订提供数据参考。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血凝试验检测猪瘟免疫抗体的比对报告

<正>基层兽医部门实验室普遍采用正向间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟免疫抗体,为了获得正向间接血凝试验和酶联免疫吸附试验两种检测方法之间存在的关系,笔者进行了本次猪瘟免疫抗体检测试验,并分别比较了2种方法的符合率和合格样品检出率。1疫苗及免疫程序1.1免疫疫苗试验所用疫苗为猪瘟活疫苗(脾淋源),为中牧实业股份有限公司成都药械厂生产。疫苗经检查无     

猪瘟脾淋毒活疫苗中兔瘟外源病毒检测方法的建立及应用

为检测商品化猪瘟脾淋毒活疫苗中RHDV污染,根据兔出血症病毒VP60基因保守序列设计引物,建立了检测兔出血症病毒一步法反转录一聚合酶链(RT-PCR)方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该一步法RT-PCR对RHDV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对兔出血症病毒检测的灵敏性为10皮克总RNA量,应用该方法,检测了20批猪瘟脾淋源活疫苗样品,以上结果表明该一步法RT-PCR方法检测     

中华人民共和国农业部公告

为全面加强猪瘟疫苗管理，进一步提高猪瘟疫苗质量，切实保证猪瘟疫苗免疫效果，我部兽医局组织制定了政府采购专用猪瘟活疫苗（脾淋源）制造及检验规程（暂行）（附件一）、质量标准（暂行）（附件二）、说明书（暂行）（附件三）和内包装标签（暂行）（附件四），以及政府采购专用猪瘟活疫苗（细胞源）制造及检验规程（暂行）（附件五）、质量标准（暂行）（附件六）、说明书（暂行）（附件七）和内包装标签（暂行）（附件八），现予发布，自发布之日起施行。     

场间种猪群猪瘟E2蛋白灭活疫苗与猪瘟活疫苗免疫效果对比

为准确了解、比对不同种猪场猪群免疫猪瘟E2灭活疫苗与猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗效果。对A、B、C、D、E、F 6家猪场1 672头母猪免疫对应猪瘟疫苗后,分别采集6家猪场的20头、30头、10头、20头、10头、10头共计100头母猪的血清样品进行间接ELISA检测。结果显示100份样品中猪瘟抗体阳性率100%;其中免疫猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗组A、B、C场抗体效价OD均值分别为2.0662、2.0029、1.8147,离散度分别为41.86%、28.89%、43.85%;免疫猪瘟E2灭活疫苗D、E、F场抗体效价OD均值分别为2.6587、2.2537、2.4862,离散度分别为21.75%、7.72%、9.76%;经两样本均数比较T检验分析,2个试验组内抗体效价OD值差异不显著,2个试验组间抗体效价OD值差异极显著。     

两种不同猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果比较

为比较猪瘟疫苗E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活疫苗对育肥猪免疫效果和生产成绩的影响,以便为规模猪场在选择猪瘟疫苗时提供参考。本试验从汉中某代养场选取了一批健康的断奶仔猪分成三组,A组免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗（简称E2亚单位疫苗）,B组免疫猪瘟活疫苗（脾淋源）,C组为对照组不做猪瘟疫苗免疫。免疫60 d后各组随机抽取10、15和12份血样用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测猪瘟抗体水平。结果表明接种的两种猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果差异极显著（P<0.01）,其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥猪抗体阻断率和降低离散度,并且有助于育肥猪的健康生长。     

在猪瘟活疫苗生产中用反向血凝与家兔检验进行中间检测结果的比较

在猪瘟活疫苗生产中用反向血凝与家兔检验进行中间检测结果的比较姜昌筠何琨安徽生物药厂合肥２３００２２我厂生产猪瘟活疫苗中间检测一直用家兔测定猪瘟兔化毒的毒价。从１９９５年开始，才将反向血凝试验用于中间检测，作者对这两种方法进行了试验比较，现报告如下。１...     

一株兔瘟病毒野毒株的分离与鉴定

为了对南部县某兔场疑似兔出血症病毒(RHDV)NB毒株进行鉴定,试验采用血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验、家兔接种试验、家兔免疫攻毒试验、VP60基因的同源性比对。结果显示:NB毒株能凝集人"O"型红细胞,HA效价为12 log2,其血凝性能被RHDV疫苗毒株AV33株的抗血清抑制;NB毒株注射健康非免家兔,家兔在48h内死亡,具有典型的兔病毒性出血症(RHD)的临床症状和病理变化;RHDV(AV33)组织灭活疫苗免疫家兔后,家兔能抵抗NB毒株的攻击;NB毒株与AV33毒株的VP60基因同源性为96.12%,氨基酸序列同源性为97.59%。     

一株兔病毒性出血症病毒野毒WF株的分离与鉴定

对山东省潍坊某兔场送检的疑似兔病毒性出血症病料进行细菌学检验、血凝性、特异性鉴定,并进一步进行毒力鉴定和免疫原性测定。结果显示:RHDV WF株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价为1∶2048,RHDV抗血清可特异性抑制RHDV WF株对人"O"型红细胞的凝集,RHDV WF株对家兔的LD50为10-6.5/m L,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。取第5代RHDV WF株制备灭活苗,用1.0mL免疫试验兔,免疫后第14天攻毒,对RHDV的保护率达100%。     

兔病毒性出血症病毒DY株的分离鉴定

对山东省东营某兔场送检的疑似兔病毒性出血症病料进行细菌学检验、血凝性及特异性鉴定,并进一步进行毒力鉴定和免疫原性测定。结果显示:RHDV DY株对人"O"型红细胞具有高度血凝性,血凝效价为1:4 096,RHDV抗血清可特异性抑制RHDV DY株对人"O"型红细胞的凝集,RHDV DY株对家兔的LD50为10~(-6.5)/m L,是一株对家兔具有高致病力的强毒株。取第5代RHDV DY株制备灭活苗,用1.0m L免疫试验兔,免疫后第14天攻毒,对RHDV的保护率达100%。     

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。     

中国首例兔出血症病毒2型(RHDV2/b/GI.2)的鉴定及病理学观察

本试验旨在鉴定四川金堂某兔场疑似兔出血症病毒2型（RHDV2）感染疫情的病原,并分析病兔的病理组织学变化。利用血凝试验和RT-PCR检测病死兔内脏组织中的病原,取病变组织制作病理切片,观察分析各组织的病理组织学变化,同时应用病兔肝脏悬液感染幼兔,分析该毒株的致病力。血凝试验结果显示,所采集病死兔肝脏样品能凝集人"O"型血红细胞;RT-PCR扩增及测序结果显示,多对引物均能从样品中扩增出RHDV2特异性条带;病理组织学观察结果显示,病兔多脏器严重出血、肿胀,淋巴细胞和中性粒细胞大量浸润,气管黏膜、肝脏、肺脏出血尤为严重;动物试验结果显示,该毒株毒力较强,含毒肝脏悬液能在24 h内迅速致死幼兔。本研究经临床诊断、核酸检测及测序证实了此次疫情确由RHDV2感染引起,动物试验和病理组织学观察表明该毒株毒力较强,可引发脏器严重出血,造成病兔急性死亡,RHDV2的出现提示病毒的跨境传播情况不容乐观,应引起更大的重视。     

应用单克隆抗体ELISA阻断试验快速检测兔出血症病毒抗体的研究

利用抗兔出血症病毒(RHDV)的特异性单克隆抗体(McAb)建立了ELISA阻断试验用以检测血清抗体,并与血凝抑制(HI)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较。结果ELISA阻断试验敏感性超过HI,更远胜于ID,具有灵敏、特异、准确等优点,适于大批血清样品的快速检测。     

基因重组抗原酶联免疫法检测兔出血症病毒抗体及其标准化

以重组兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白为抗原，建立了RHDV抗体间接ELISA检测方法。优化的试验反应务件为：重组VP60的包被质量浓度为1．0mg／L，用10％牛血清封闭，以大肠杆菌提取物稀释被检血清以消除非特异性反应。将所建立的ELISA与现行血凝抑制(HI)试验比较发现，不同免疫状态的兔血清的RHDV ELISA抗体与HI抗体均呈正相关。对11个RHD免疫兔场1130份血清样品的抗体检测表明，各免疫兔群血清RHDV抗体水平不完全一致，D值在1．09～1．76之间，显著高于非免疫兔(0．05)及SPF兔(0．02)，低于高免兔(2．34)。在此基础上，研制了RHDV抗体酶联免疫检测试剂盒，测定了其主要指标，制定了各成分的质量控制标准，为兔群进行免疫学监测及评价疫苗的免疫效果提供了便利。     

Detection of rabbit haemorrhagic disease virus antigen in tissues by immunohistochemistry

Formalin fixed liver, spleen, kidney, heart, lung, duodenum and appendix tissues from nine rabbits, experimentally infected with rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV), were investigated for evidence of RHDV antigen by the direct avidin-biotin peroxidase complex immunohistochemical method. In all the rabbits examined, RHDV antigen was detected in degenerative and necrotic hepatocytes of the liver tissues. The area involved coincided with histopathological lesions on serial liver sections. The RHDV antigen was expressed in the cytoplasm of the hepatocytes, suggesting that RHDV replicated in these cells. RHDV antigen was also detected in the spleen. The results of immunohistochemistry were supported by the demonstration of RHDV protein by Western blot analysis and of RHDV particles by protein A-gold immunoelectron microscopy in the liver homogenate from all the rabbits that were examined.     

应用免疫组化PAP法检测兔出血症病毒抗原的动态分布

应用免疫组化PAP法检测了人工感染成年患兔、30～40日龄患兔以及自然感染患兔体内兔出血症病毒（RHDV）抗原的动态分布。结果表明,在成年患兔的肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸以及幼兔的肝、肾、脾中检出了RHDV抗原;无论在成年或幼龄患兔,RHDV抗原主要位于受侵害细胞胞浆中,少部分位于核中;在成年患兔,RHDV抗原阳性细胞的数量随病程发展而增加,而在幼龄患兔,这种增加趋势不明显。本文还分析了RHDV抗原在患兔体内的动态分布与病变形成之间的关系。     

1例兔出血症病毒2型感染疫情的诊断

旨在了解河南疑似兔出血症病毒2型(RHDV2)的感染情况,并对RHDV2的致病性进行初步分析。本研究采集病死兔的肝组织,利用微量血凝试验、RT-PCR扩增及测序、VP60基因系统进化树分析和动物回归试验进行病原鉴定。微量血凝试验结果显示,组织样本悬液能够凝集人“O”型血红细胞;RT-PCR扩增、测序及序列分析结果显示,检测到RHDV2特异性条带,片段大小为829 bp;系统进化树分析结果发现,分离的病毒与我国四川发现的首例RHDV2毒株SC2020/04的VP60基因相似性高达98.2%;临床病例的剖检显示病死兔胸腺、气管、肺、肝、脾、肾等实质性器官出血较为严重;动物回归试验发现攻毒组家兔死亡率为100%,平均死亡时间为65.8 h,RT-PCR扩增均检测到RHDV2特异性条带。本研究首次在河南兔场检测到RHDV2,为RHDV2的防控提供了科学参考。     

西藏兔病毒性出血症的研究--病原鉴定及疫苗免疫效力试验

１９９４年６￣７月,西藏林芝地区家兔大批急性死亡同,经过流行病学调查,临诊断症状观察,病理剖检等结果与兔病毒性出血症特征相符。进一步作病毒学检查表明,病变组织超薄发切片经电子显微镜观察发现有大量直径约３０ｎｍ的球状裸听病毒粒子,自然病死兔肝组织匀交涉 清能凝集入）型红细胞,而且血凝兔出血症病毒阳性抗血清所抑制,致病性试验结果表明,该病毒对兔有很强的致病性;用西藏自然病死兔肝组织匀浆试制的矩形疫苗兔