Cpg DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗免疫效果的影响

为明确Cpg DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗免疫效果影响,为有效防控猪伪狂犬病提供依据,试验在猪伪狂犬野毒阴性育肥场进行,随机选择90头猪,分为3组,每组30头,分别设为猪伪狂犬病疫苗+Cpg DNA佐剂组(A)、猪伪狂犬疫苗组(B)、间隔30天两次免疫猪伪狂犬疫苗组(C),比对A、B、C组猪只首免前、二免前、二免后30天、出栏前猪伪狂犬苗免疫抗体水平。结果显示:在合格率方面:Cpg佐剂参与的免疫与间隔30天二次免疫猪伪狂犬病疫苗组相当,且均优于一次免疫伪狂犬疫苗组。在抗体平均值方面:Cpg佐剂参与组能够更快的刺激机体对猪伪狂犬病毒的免疫反应,产生保护性抗体。此次试验证明:Cpg DNA佐剂对猪伪狂犬病疫苗有增效作用,免疫抗体上升快,持续时间长。     

猪伪狂犬病概述

文章对猪伪狂犬病的病原、检测方法、疫苗研究、国内外净化措施进行概述,为猪伪狂犬病的深入研究和防控净化提供参考。     

家兔校验猪伪狂犬病灭活疫苗免疫效果的初步研究

用2种猪伪狂犬病(PR)油乳剂灭活疫苗免疫PRV抗体阴性家兔,每组免疫3只,并设不免疫兔作为空白对照.定期采血,用乳胶凝集试验和中和试验测定抗体效价.乳胶凝集试验在免疫后7 d检测到抗体,中和试验在免疫后21 d检测到抗体.家兔于免疫后28 d攻毒,免疫组均无明显临床症状,空白对照组全部死亡,证明家兔免疫后乳胶凝集效价≥1:45.3或中和试验抗体效价≥1:8时,可以抵抗强毒的攻击.     

猪的伪狂犬病研究进展

综述了近年来猪伪狂犬病的研究进展，并对其诊断和防治提供参考。     

伪狂犬病病毒囊膜蛋白ISCOMs免疫原性测定

应用伪狂犬病病毒囊膜蛋白与Quil A结合制备囊膜蛋白免疫刺激复合物(PRV-ISCOMs)，并通过ELISA、血清中和试验和淋巴细胞转化试验(Brdu-ELISA法)测定其诱导小鼠体液和细胞免疫应答水平。结果如下：1)小鼠分别接种3、7、10ug的PRV-ISCOMs后，于接种后PI7d血清中可测出ELISA IgG而抗体，随后抗体水平逐渐升高。间隔21d加强免疫后，FLISA IgG抗体水平进一步提高，且中和抗体效价均在1：22以上，而未加佐剂的囊膜蛋白对照组均无中和抗体；2)淋巴细胞转化试验初步结果表明PRV-ISCOMs能诱导小鼠的细胞免疫应答。3)免疫保护力测定显示免疫鼠能抵抗强毒攻击。上述结果表明PRV-ISCOMs具有良好的免疫原性，能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。     

家兔效验猪伪狂犬病灭活疫苗免疫效果的初步研究

用2种猪伪狂犬病（PR）油乳剂灭活疫苗免疫PRV抗体阴性家兔,每组免疫3只,并设不免疫兔作为空白对照。定期采血,用乳胶凝集试验和中和试验测定抗体效价。乳胶凝集试验在免疫后7 d检测到抗体,中和试验在免疫后21 d检测到抗体。家兔于免疫后28 d攻毒,免疫组均无明显临床症状,空白对照组全部死亡,证明家兔免疫后乳胶凝集效价≥1∶45.3或中和试验抗体效价≥1∶8时,可以抵抗强毒的攻击。     

猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析

本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV） gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612 bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21（DE3）,经诱导表达、纯化得到目的蛋白,进行Western blotting分析验证并分析免疫原性。结果表明,表达的gB蛋白大小为30 ku,主要以包涵体形式存在,复性后浓度为106 μg/mL,且具有良好的反应原性。应用市售试剂盒检测到样品中含13份PRV阳性血清和16份阴性血清,利用检出的阳性血清,初步可建立以PRV gB蛋白为包被抗原的PRV抗体ELISA检测方法。     

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及免疫原性初步研究

采集浙江某猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑、脾脏等组织病料,经PCR检测为猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒感染,用BHK-21细胞进行病毒的分离培养,结果显示该病毒能引起典型的细胞病变,第4代病毒液毒价达10^7.0 TCID_50/mL;PCR和动物回归试验结果表明该分离株为PRV,并将其命名为PRV ZJ株。将第4代病毒液制备成油乳剂灭活苗,免疫2 kg左右家兔,免疫后28 d采血并攻毒,测定其免疫原性,结果显示血清中和指数为13490,保护率为100%。本试验结果表明PRV ZJ株有很好的免疫原性,为进一步开展疫苗研究奠定基础。     

Expression and Immunogenicity Analysis of Porcine Pseudorabies Virus gB Protein

In order to study the expression and immunogenicity of porcine pseudorabies virus (PRV) gB protein,the specific primers were designed with the template of PRV preserved in the laboratory, and the 612 bp conserved gene fragments were amplified and sequenced, then it was cloned into the expression vector pET-28a and transformed into E.coli BL21 (DE3), the target protein was obtained after induced expression and purification.Western blotting was performed to analyse its immunogenicity. The results showed that gB protein was 30 ku, which mainly expressed in the form of inclusion body, and the concentration of the protein was 106 μg/mL, with well reactogenicity. 13 PRV positive serum and 16 negative serum in the samples were detected using ELISA Kit on sale, using positive serum, the PRV antibody detection method was initially established with the PRV gB protein as antigen package.     

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

为了提供有效的伪狂犬病疫苗，用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株（TK^-/gG^-/LacZ^＋），研制了伪狂犬病基因缺失疫苗，并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定，同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测；同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明，疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为10^5.0 TCID50；10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的，免疫猪能抵抗强毒的攻击；疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明，4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效，并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。     

猪伪狂犬病病毒双基因缺失突变株(HB-98株)安全性、稳定性和免疫原性测定

对以伪狂犬病病毒鄂A株为亲本毒株构建的TK和gG双基因缺失突变株（PrV HB-98株）的增殖能力、安全性、毒力稳定性和免疫原性进行了测定。结果表明，PrV HB-98株在BHK-21细胞上的增殖滴度为10^7.0 TCID50／0．1mL以上，与亲本毒株相当，但高于Bartha株；与PrV鄂A株相比，病毒量为10^7.0TCID50的PrV HB-98株不引起BALB／c小鼠的死亡，毒力也低于Bartha株；将PrV HB-98株在PK-15细胞连续培养25代和在猪体内上连续继代5次，各代次突变株TK基因和LacZ基因能被稳定扩增，未出现毒力回复现象．表明该毒株具有良好的遗传稳定性；以10^5.0、10^6.0、10^7.0TCID50等3个不同剂量的PrV HB-98株接种于妊娠50～60d母猪和1日龄仔猪，母猪均能正常产仔．仔猪也未出现任何临床症状，证明该毒株有较好的安全性。另外，以10^5.0TCID50的PrV HB-98株接种于妊娠50～60d母猪和1日龄仔猪，分别于接种后28d和20d，用10^7.0TCID50 PrV鄂A强毒进行攻击．结果免疫猪都能抵抗强毒的攻击．获得保护，表明该毒株具有很强的免疫原性。综合上述结果表明，PrV HB-98株可以作为候选毒株．用于伪狂犬病基因工程疫苗的研制。     

Effects of Different Adjuvants on the Immunogenicity of PCV2-Cap Protein

The study was aimed to prepare vaccines with different adjuvants,and research its effects on immunogenicity.The PCV2 Cap gene with its signal peptide removed was connected to pET-28a vector,and then was induced to express,using sodium deoxycholate（DOC）and low concentration of urea to dissolve the inclusion body.Different adjuvants,such as alum-based adjuvants,liposome adjuvants,propolis adjuvants,white oil adjuvants and Freund adjuvant were prepared,together with protein purified to make up subunit vaccines,and commercial inactivated vaccine as positive control,immuning mice,and ELISA method were used to detect changes in concentrations of animal serum antibody and cytokines,evaluated the immune protective effect.Results showed that the expression product in the form of inclusion body,using the DOC could omit dissolving inclusion body protein renaturation steps,and the purification method was simple,the capsid protein obtained had high purity.ELISA assays showed that PCV2-Cap had good immunogenicity.And we found that the water system adjuvants had high immune activity,this could provide important previous experimental data for the commercialization of the subunit vaccine.     

不同佐剂对猪圆环病毒衣壳蛋白免疫原性的影响

试验旨在研究猪圆环病毒不同佐剂疫苗的制备及其对免疫原性的影响。将去除信号肽的PCV2（porcine circovirus type 2,PCV2）Cap蛋白基因连接在pET-28a载体上,进行诱导表达,用脱氧胆酸钠（DOC）和低浓度尿素对表达产物进行溶解,制备氢氧化铝胶体佐剂、脂质体佐剂、弗氏佐剂、白油佐剂、蜂胶佐剂,并与纯化的PCV2-Cap蛋白混合制成亚单位疫苗,以商品化的灭活疫苗作为阳性对照,免疫小鼠,并使用ELISA方法检测动物血清中抗体及细胞因子含量的变化,评估其免疫保护效果。结果显示,表达产物以包涵体的形式存在,使用DOC溶解包涵体可省略蛋白复性步骤,且纯化方法简单,获得纯度较高的衣壳蛋白;ELISA检测结果表明PCV2-Cap蛋白能诱导产生特异性较高的抗体;水系佐剂制备的亚单位疫苗具有较高的免疫活性,为亚单位疫苗的商品化提供重要的数据支持。     

动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展

动物支原体可引起肺炎、关节炎、乳腺炎等一系列重要疾病,临床上常表现为慢性、持续性感染,给养殖业造成严重的经济损失.亚单位疫苗具有安全高效、成本低廉等优点,是支原体疫苗研究的重要发展方向.本文主要介绍了重要动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展,以期为今后动物支原体病亚单位疫苗研究提供参考.