斑节对虾杆状病毒的超微结构

应用超薄切片技术，研究斑节对虾卵细胞和各变态期病毒及其包涵体的分布和超微结构。在糠虾前期各期未找到病毒，而糠虾后期各期的肝和中肠上皮细胞核中则有典型的病毒及其包涵体存在。这提示着ＭＢＶ可能不经由卵细胞传播给子代。病毒粒子单个散在于核质和包涵体基质中，一端钝圆，另一端稍尖，形似葵花子，而不是如文献所言的长圆柱体，长度２７０－３００ｎｍ，直径平均７５ｎｍ，由囊膜、衣壳和核心三部分组成，囊膜上无纤突。这     

斑节对虾杆状病毒的检测及感染率调查

本文报告了进境斑节对虾亲虾及其仔虾，成虾中的斑节对虾杆状病毒的包涵体和病毒颗粒的检测方法和病毒的感染率，检测结果显示，亲虾和虾苗的病毒感染率分别为２３．１％和６２．５％。     

肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的PCR复合检测

肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒是常见的2种DNA对虾病毒,在虾类养殖业中经常会出现混合感染。因此,建立这2种病毒的复合检测方法显得尤为重要。根据基因库中肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的保守序列,设计了肝胰腺细小病毒和斑节对虾杆状病毒的特异性引物,对这2种病毒PCR复合检测的反应条件和试剂浓度进行优化,退火温度55℃,主要试剂Mg2+终浓度为3mmol/L,dNTP终浓度为0.4 mmol/L,引物终浓度为0.8μmol/L。进一步比较了在优化后的PCR反应体系下,检测单种病毒和同时检测这2种病毒的灵敏度差异。     

斑节对虾（Penaeus monodon）暴发性病害的病原超微结构观察

斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ）暴发性病害的病原超微结构观察ＳＵＰＥＲＭＩＣＲＯＳＴＲＵＣＴＵＲＥＯＢＳＥＲＶＡＴＩＯＮＯＮＰＡＴＨＯＧＥＮＯＦＥＸＰＬＯＳＩＶＥＤＩＳＥＡＳＥＯＦＢＬＡＣＫＴＩＧＥＲ（ＰＥＵＡＥＵＳＭＯＮＯＤＯＮ）邓国成李焕...     

感染白斑综合症病毒中国对虾雄性生殖系统的PCR检测与电镜观察

通过人工投喂携带WSSV的毒饵，对性腺发育成熟的中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）雄虾（♂）进行感染实验。采用nest-PCR（巢式PCR）技术，检测感染后的中国对虾雄性生殖系统受WSSV感染情况，同时选取感染严重的虾样进行电镜观察。巢式PCR检测结果表明，感染组中国对虾的精巢、输精管和精囊均被WSSV感染，其中精囊呈阳性的最多，输精管次之，精巢最少。通过电镜进一步观察发现，WSSV粒子只存在于精巢、输精管和精囊的结缔组织中，而在其他组织和生殖细胞中均未发现病毒粒子。其中，精巢中WSSV粒子存在于精巢内两个生精小管之间的结缔组织；输精管中WSSV粒子存在于管壁的结缔组织；精囊中WSSV粒子也只存在于精囊内膜的结缔组织和精荚膜的结缔组织中。PCR检测和电镜观察结果均表明，WSSV粒子能感染中国对虾的雄性生殖系统且对性腺感染存在着一定的组织特异性。     

利用核酸探针技术检测斑节对虾杆状病毒的初步试验报告

通过对各地送检样品进行检测,发现苗期带毒类型,与中国对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒具有同源性,故采用核酸探针技术检测苗期带毒苗是有效的。该技术为我省对虾养殖业的早期诊断及对虾的检疫提供一条快捷有效的途径。     

低剂量对虾白斑综合征病毒粗提液对斑节对虾体内潜伏期病毒及血细胞的影响

利用含3×103、6×102、2×102copies/mL的对虾白斑综合征病毒(white spot syndromevirus,WSSV)粗提液和PBS液人工注射感染携带病毒量约1×105copies/g的斑节对虾,通过实时定量PCR法、显微镜观察法研究了感染后斑节对虾发病死亡率、肌肉内WSSV含量及总血淋巴细胞数和不同种类血细胞的比例组成变化。结果表明,3种浓度下斑节对虾累积死亡率分别为93.33%±2.89%、56.67%±5.77%和45.00%±5.00%,对照组没有发生死亡。注射3×103copies/mL的浓度组,在注射后30 min时,对虾肌肉内的病毒含量达到最低值(3.54×104copies/g),而后持续上升至48 h时达到最高值(3.12×108copies/g)后再次下降;另两个感染组,在注射后1 h时,肌肉内病毒含量达到最低值(分别为1.11×105、9.54×104copies/g),在感染后6 h时出现一个次高值(分别为1.58×105、1.11×105copies/g),而后又降低,在48 h时达到最高值(分别为1.48×107、5.46×106copies/g)后下降;对照组对虾肌肉内病毒含量没有出现显著变化。不同感染浓度组,斑节对虾总血淋巴细胞数波动幅度和出现峰值的时间不同,特别是注射3×103copies/mL组,对虾总血淋巴细胞数在12和48 h时出现极低值(分别为3.48×106、4.05×106/mL);3个感染组除个别时间点外,对虾总血淋巴细胞数的变化规律与肌肉中WSSV的扩增规律成负相关。4个处理组,半颗粒细胞比例在感染初期呈现明显上升的趋势,后期比例虽有起伏但均维持在较高水平;颗粒细胞和透明细胞比例在感染初期均呈现明显下降的趋势,中期均略有上升,但后期颗粒细胞比例显著低于初期,而透明细胞比例则与初期无显著性差异。     

首例斑节对虾越冬亲虾发生杆状病毒的皮下及造血组织坏死症研究

湛江长洪对虾苗种实验场的斑节对虾转入越冬池后３～１０ｄ内发生暴发性死亡，症状与北方地区杆状病毒的皮下及造血组织坏死症一致。病理学研究表明，所有发病虾样的皮下组织、造血组织、结缔组织、肝胰腺血窦、淋巴器官等细胞核均存在严重的ＨＨＮＢＶ病灶，只有２０％的发病对虾肝胰腺中观察到轻微感染的ＭＢＶ包涵体。ＨＨＮＢＶ单抗的酶联免疫染色，可对ＨＨＮＢＶ的病灶产生特异性着色，对虾组织结构和ＭＢＶ包涵体均不着色。在山东培育三代并养殖１６个月的斑节对虾中也观察到与湛江发病的越冬亲虾相同的情况。以上说明，近年来在广东一带ＨＨＮＢＶ是值得重视的病原，其危害可能重于ＭＢＶ。对于发生过对虾暴发性流行病的群体来说，不宜用来作为亲虾。     

斑节对虾白斑综合症病毒部分基因组文库及核酸探针检测法

通过分离纯化白斑综合症病毒（ＷＳＳＶ）粒子,抽提病毒ＤＮＡ。用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ或ＳａｌⅠ酶切后,克隆入质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫＳ中,从而建立了ＷＳＳＶ部分基因组文库。估计ＷＳＳＶ基因组ＤＮＡ在１６５ｋｂ以上。将ＷＳＳＶ ＥｃｏＲⅠ克隆片段标记制备为探针。进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、打点杂交和原位杂交,其结果证明了克隆片段对ＷＳＳＶ特异,并为检测ＷＳＳＶ提供了方法。通过对部分基因组文库序列     

斑节对虾杆状病毒在感染对虾中肠腺中的分布

利用组织切片法研究了斑节对虾杆状病毒（MBV）在养殖早期班节对虾及养成期斑节对虾中肠腺各部位的分布特点。斑节对虾的中肠腺可分为头部、亚头部、中部、亚尾部和尾部等5个部分，其上皮细胞包括E细胞、F细胞、B细胞和R细胞等4种类型。头部和尾部均以E细胞为主、亚头部、中部和亚尾部均以R细胞为主。在感染度较轻的样本中，MBV一般只感染F细胞、R细胞和B细胞。感染度较重时，E细胞也同时受累。在养殖早期虾和养成期虾中，MBV相对感染度在中肠腺各部分的分布均以中部最高，而且以中部的中间最高，离中部越远，相对感染度越低。     

斑节对虾虾苗活力检测方法

该研究通过肉眼观察、镜检,进行干露、饥饿、盐度突降、福尔马林等抗性试验,并采用病毒检测等方法,以期建立评估斑节对虾（Penaeus monodon）虾苗活力和质量标准。结果表明,斑节对虾健康虾苗具有趋光性、集群性,体表光洁,肌肉透亮,肠胃食物充盈等特性。测试虾苗干露时间以15min为宜,健康虾苗干露后能立即恢复活力,而病弱虾苗多出现死亡、昏迷现象;虾苗的成活率随饥饿时间的延长而降低,随福尔马林浓度升高和时间延长而降低,随盐度突降幅度增加而降低。健康虾苗能忍受100～200μL·L^-1福尔马林溶液30min,成活率近100％;在盐度20～30下虾苗的成活情况较好,而其在淡水中仅能存活1h。对虾苗进行病毒检测,可以避免养殖中因虾苗携带病毒而可能导致的病毒性疾病的暴发。     

中国对虾一种杆状病毒的ELISA检测方法

从患暴发性传染病的中国对虾的组织中分离一种病毒，经差速离心、密度梯度离心及Ｓｈｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱层析纯化了一种形状为杆状的病毒。提纯病毒核酸电泳为一条带，分子量为２０ｋｂ。将提纯病毒免疫新西兰获得较高抗血清并初步建立了酶联免疫中附测定检测方法。     

池塘养殖斑节对虾的生长特性

对池塘养殖的斑节对虾的生长特性进行研究。不同生长发育阶段的1500尾斑节对虾的体长、体重生长参数进行测量和分析。结果表明,(1)池塘养殖斑节对虾体长和体重呈幂函数关系,♂∶W=2·0×10-5×L~(2.9498);♀:W=2·0×10-5×L~(2·9633);(2)同大多数对虾种类一样,斑节对虾也表现出雌、雄生长的差异。养殖前期,雌、雄虾的体长、体重生长差异不明显,雄虾略高于雌虾,在59·6d后,雌虾体长生长速度高于雄虾;雄虾体重的生长拐点出现在144·5d左右,雌虾体重的生长拐点出现在195·3d左右;(3)采用von Bertallanffy生长方程,拟合出池塘养殖斑节对虾体长、体重生长方程为:♂∶Lt=178.9(1-e-0·0093(t-28·2)),Wt=87·97(1-e~(-0·0093(t-28·2)))2·9498;♀∶Lt=233·7(1-e~(-0·0065(t-28·2))),Wt=208·96(1-e~(-0·0065(t-28·2)))2·9633。     

Detection of monodon baculovirus and white spot syndrome virus in apparently healthy Penaeus monodon postlarvae from India by polymerase chain reaction

The simultaneous presence of monodon baculovirus (MBV) and white spot syndrome virus (WSSV) in apparently healthy postlarvae of Penaeus monodon from different hatcheries in India was studied by nested polymerase chain reaction (PCR). MBV could be detected in 54% of the samples. However, only 15% of samples were positive by non-nested reaction. WSSV could be detected in 75% of samples, 19% being positive by non-nested reaction. The results show simultaneous presence of WSSV and MBV in many samples at various degrees of infection. Only 14% of the samples analysed were negative for both viruses.     

斑节对虾基因组微卫星分离及其序列特征研究

采用(CA)_(12)(AG)_(12)及(TA)_(16)生物素标记探针及磁珠富集法构建了斑节对虾Penaeus monodon基因组微卫星富集文库。随机挑选254个克隆进行PCR筛选,得到51个候选克隆(20．1%)。其中,32个克隆来源于CA-文库,另19个克隆来源于AG-文库。测序发现48个克隆含有微卫星重复单元,通过序列比对,最终获得40个具有特异微卫星序列的阳性克隆。微卫星(GA/CT)_N及(CA/GT)_n 2碱基重复序列分别占所有分离的微卫星数目的20．7%及60．4%。此外,还检测到其它多种微卫星重复类型,如(AT)_n、(GC)_n、(TGG)_n、(AAG)_n、(AAT)_n、(GAA)_n、(GTGC)_n、(GCGT)_n、(GGTTA)_n、(GTGCGT)_n,占检测到的微卫星数目的18．9%。获得的微卫星序列中属于完全型序列的有76条(68．5%),不完全型序列的有22条(19．8%),另有13条属于复合型序列(11．7%)。微卫星(GT/CA)_n 2碱基重复次数(3～52次)要远大于(GA/CT)_n 2碱基次数(3～27次)。获得的微卫星序列长度大小范围为129～601 bp,平均为286 bp。研究为进一步开展斑节对虾分子育种及资源评价分析提供了基础资料。     

Dietary potassium requirement of juvenile grass shrimp Penaeus monodon

ABSTRACT: A feeding trial was conducted to estimate the minimal dietary potassium (K) requirement for juvenile grass shrimp Penaeus monodon . Purified diets with seven levels (0, 0.3, 0.6, 0.9, 1.2, 1.5, 2.0 g/100 g) of supplemental potassium were fed to P. monodon (mean initial weight 0.75 ± 0.01 g) for 8 weeks. Each diet was fed to three replicate groups of shrimp. The rearing water contained 360 mg/L potassium. Weight gain and protein efficiency ratio (PER) of shrimp improved as dietary potassium supplementation level increased up to 1.5 g K/100 g diet and thereafter declined significantly ( P < 0.05). Feed efficiency (FE) of shrimp also showed a similar trend. However, whole body K concentration of the shrimp kept an increasing trend up to 2.0 g K/100 g diet. Analysis of the weight gain (percent) and PER of the shrimp by polynomial regression indicate that the minimal dietary potassium requirement in growing P. monodon is approximately 1.2 g/100 g.