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1.
禽传染性支气管炎病毒免疫原基因的PCR获取及其酶切鉴定 总被引:3,自引:1,他引:3
分绍用RT-PCR(反转录-聚合酶链反应)获取禽传染性支气管炎病毒M41株和广东地方致弱株D41免疫原(S1)基因的详细方法,所用引物为IBV Beaudette株S1基因两侧的对应序列,跨幅为1.7kb,结果表明,两株病毒所获的PCR产物与预期的一致;用此对引物,以IBV D41株S1基因PCR产物为模板,扩增出一样的DNA片段,试验还显示,国内外几家公司有关RT和PCR的分子生物学试剂可以兼用 相似文献
2.
在胰岛素定点突变体合成中,对不对称PCR反应中突变位点的引物和末端引物的比例以及退火温度进行优化。结果表明:PCR反应5′末端引物与突变引物的配比为50:1~100:1;第2轮PCR反应退火温度在65~70℃较为理想。 相似文献
3.
用PCR和核酸探针杂交检测了3种毒株在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的IBV,结果表明:在胚鸡中繁殖3种毒株IBV(H120,HK,M41)及,PCR最早检出时间20-24h,克隆探针最早检出时间为24-30h;用克隆核酸探针检测人工感染鸡,12h后能从肾脏中检出病毒。对7只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和PCR扩增,有5中均呈阳性反就 相似文献
4.
针对禽传染性支气管炎病毒(IBV)血清型众多、临床检测不易的难题,用我国自已研制的2株IBV单克隆体,通过多种方法的比较与鉴定,建立起活用于定性检测IBV的包被鼠源IBV单抗的Mab-ELISA方法,其操作程序是:包被鼠源IBV单抗-被检测病毒-鸡抗IBV高免血清-兔抗鸡IgG(AGP效价1:32)-羊抗兔IgG-HRP;用本方法对国内46个IBV分离株及NDV、AIV-H9N2、PPMV-I等的检测,表明其具有较好的特异性和敏感性。 相似文献
5.
参照了已表的IBV Beaudette株全基因组序列,自行设计合成了3和引物(youl+、you2-youM+),引物you1+和you2-在S1基因两侧,跨幅约1610bp,引物you2-和youM+在S1基因的3’端,跨幅约530bp。用这两对引物对5个IBV地方分离株(HN2,HN4,JX1,SC2和SC1)进行RT-PCR,均成功地扩增出相应大小的目的片段。病毒在电镜下观察中以形态多变的冠状病毒粒子。 相似文献
6.
鸡传染性支气管炎病毒D41株S1基因部分序列的测定 总被引:4,自引:0,他引:4
廖明 《华南农业大学学报》1998,19(2):55-59
通过反转录及变退火温度PCR方法扩增出含先导序列的IBV广东地方分离株D41的S1基因cDNA,长度约1.7kb.利用双脱氧链终止法对其5′端测序,准确读到342个碱基,并确定了翻译起始密码子ATG的位置. 相似文献
7.
禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以含传染性支气管炎病毒(ZJ971毒株)S1基因的质粒PBS为模板,根据其序列设计引物进行PCR扩增,得到1.7kb左右的S1基因产物;用XbalI和BamHI酶切纯化,并在T4DNA连接酶的作用下,定向克隆到植物表达载体PBI121中,PCR及酶切鉴定表明,质粒经三亲交配已导入根癌农杆菌中。 相似文献
8.
用IBV陕西分离株X,Fu,W和H株人工感染40日龄和19日龄的雏鸡复制人工病例,对其临床症状、大体病变和病理组织学变化进行了较详细的研究。结果表明,IBV陕西分离株具有较强的致病力,不仅能引起雏鸡发生呼吸道症状,而且可致严重的肾脏损伤,对19日龄鸡引起的临床症状和病理损害均比40日龄鸡更为严重。感染40日龄和19日龄鸡后,潜伏期、致死雏鸡的时间与病程分别为38 ̄72h和32 ̄40h,96h和48 相似文献
9.
IBV S1基因RT—PCR产物的分子克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了在两条引物的5‘端加有不同酶切位点的IBV D41株S1基因PCR产物与pUC18进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法,经回收的插入片段的分子量大小及HaeⅢ酶切分析,证明获得了两株重组质粒转化子。 相似文献
10.
鸡肾型IBV分离鉴定及S1基因序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
2008年从河南省某肉用鸡场疑似感染肾型IB的病鸡中分离到1株IBV,对该分离毒株进行鸡胚矮小化试验、动物同归试验和m清学鉴定,试验结果表明分离株HeNan10/08为肾型IBV.采用RT-PCR技术扩增分离株的S1基因,并进行克隆和序列分析.结果表明,分离株HeNan10/08与BJ株S1基因的同源性最高,核苷酸序列同源性为99.9%,推导氨基酸序列同源性为100.0%;与M41的同源性最低,核苷酸序列为78.7%,推导氨基酸序列同源性为79.0%. 相似文献
11.
含有IBV S1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建 总被引:4,自引:0,他引:4
以含有鸡传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的重组质粒pUC18-S1.Holte和pUC18-S‘1.Holte为材料,分别构建了可表达IBV S1基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒pSXIVVI^+X3-S1.Holte(含IBV先导序列),pSXIVVI^+X3/4-S1.Holte(IBV先导序列为融合短肽),pAcGHL-C-S1,Holte。 相似文献
12.
报道了在两条引物的5′端加有不同酶切位点的IBVD41株S1基因PCR产物与pUC18进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法,经回收的插入片段的分子量大小及HaeⅢ酶切分析,证明获得了两株重组质粒转化子 相似文献
13.
赵新柳 《华南农业大学学报》1989,(3)
本文首次报道一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的反向被动血凝法(RPHA),并对其特异性、敏感性和实用性进行了探讨。还用该RPHA法比较了不同纯度抗原制备的抗体的免疫学特性和应用价值。最后,对单克降抗体(McAb)用于RPHA的可能性也进行了一些试验。 结果表明:1.用RPHA法检测IBV有快速、敏感、简便而准确的优点;2.病毒抗原经一次超速离心处理,即可达到RPHA的要求,3.抗体谱较窄或效价较低的McAb,可能不适用于IBV的RPHA方法。 相似文献
14.
应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌 总被引:6,自引:1,他引:6
利用聚合酶链反应(PolymeraseChainReacticn,PCR)技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素I相抗原基因,设计了一对各长20个碱基的引物,扩增269bp的片段。并用8个标准标沙门氏菌株和3个阴性菌株检查引物特异性,结果完全相符。采用50μL体积,NTPs200μmol,引物各1μmol,mg++3mmol,Taq酶2U。循环温度为97℃7min予变性后;94℃1min,60℃1min,35个循环后再延伸72℃7min。经电泳分析,灵敏度可达每毫升检出104个细胞,经二次扩增后,灵敏度还可提高。实验共检查了30个可疑样品,检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。 相似文献
15.
本实验挑选8株近年来山东省IBV分离株与疫苗株H120和491,利用SPF鸡分别制备了高免阳性血清,进行鸡胚交叉中和试验,计算其抗原相关系数,鉴定其血清型,并结合S1基因序列分析,研究其血清型和基因型之间的关系.结果显示:SDWF0608、SDLY0612、SDLY0701与疫苗株H120同属Mass血清型的不同亚型,其它5个分离株与H120和491不属于同一个血清型.结合S1基因序列分析发现,S1基因序列分析与血清中和结果二者不具有明显的相关性,8个分离株分属三个基因群,其中SDTA06111与H120等同属一个基因群,但血清中和实验显示它们不属于一个血清型;CK/CH/SD09/005与一个参考株独自构成一个基因群,其S1基因变异程度较大,并且能够与两个疫苗株发生交叉中和实验,但不属于一个血清型,它可能是一个基因重组后病毒. 相似文献
16.
本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒(IBV),收集尿囊液,用1%胰蛋白酶处理制备IBV血凝抗原,建立了血凝—血凝抑制(HA—HI)检测IBV抗体的方法,其特异性强、操作简便。另外,本试验建立Dot—ELISA方法用于检测IBV,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗IBV抗体,经PPA—DAB—H_2O_2系统显色,其检测结果与双抗体夹心ELISA的检测结果一致。两种诊断方法的建立为临床上检测病原和监测抗体提供了便捷的手段。 相似文献
17.
甘蔗白条病(Xanthomonas albilineans)PCR检验技术研究 总被引:2,自引:1,他引:2
应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测甘蔗茎白条病无症样品和细菌纯培养及DNA,并以改良半选择培养基(mXAM)加以验证。结果表明,PCR能特异性地检出白条黄单胞包括标准菌株33915ATCC和血清型Ⅰ,Ⅱ等19个菌株。但不能扩增其它5个分离自蔗茎的腐生黄单胞和13个其它属种的植物细菌。能够检出少至10pg靶细菌的总DNA或20个活细菌。PCR检测灵敏度较ELISA和DIA高100~1000倍。田间样品检测结果与实际发病符合度为93.46%。该项技术适用于国内外甘蔗种质资源交换和口岸检疫以及病害流行学研究。 相似文献
18.
PCR方法进行牛Y—DNA特异性片段的分子克隆 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究应用聚合酶链反应扩增牛Y染色体特异性DNA片段,从宰后成年公,母牛肝提取DNA,分别俄为PCR扩增模板,扩增产物电泳结果,公牛样品具有特异性DNA扩增谱带,而母牛样品则没有扩增带,以pUC18为载体,将扩增片段构建成牛Y特异性的部分Y染色体文库。本实验所克隆的牛Y特异性DNA片段可以作为奶牛胚胎性别鉴定的探针DNA。 相似文献