番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

洋葱不同组织RNA提取方法比较分析

探讨洋葱不同组织总RNA提取的最优方法,以期为今后开展洋葱的分子生物学研究奠定基础。以洋葱品种W470发育旺盛时期的叶片、根、鳞茎为材料,比较Ta KaRa试剂盒法、TIANGEN试剂盒法、TRIzol法、p BIOZOL法等4种RNA提取方法提取洋葱RNA的效果。凝胶电泳结果显示,除了TIANGEN试剂盒法不能提取洋葱根的总RNA,其他方法在洋葱不同组织中均可提取到不同质量的RNA。对不同方法提取洋葱RNA浓度、纯度进行检测发现,Ta KaRa试剂盒法提取洋葱叶片的总RNA浓度为342.31μg/g,p Biozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA浓度分别为1 119.39、171.85μg/m L。经RT-PCR验证,Ta KaRa试剂盒法提取的洋葱叶片总RNA、p BIozol法提取洋葱鳞茎、根的总RNA均成功扩出洋葱β-actin基因片段。由结果可知,Ta KaRa试剂盒适合提取洋葱叶片的总RNA,p BIOZOL法适合提取洋葱鳞茎、根的总RNA且质量能够满足后续试验要求。     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

百蕊草根系总RNA提取方法比较及优化

百蕊草根系富含多糖、多酚和其他次生代谢产物,用传统方法提取总RNA难以有效将这些杂质去除。以百蕊草根系为材料,比较TRIzol法、CTAB-Li Cl法、SDS/酚法及改进TRIzol法4种方法对百蕊草根系总RNA的提取效果,并以电泳检测、D260 nm/D280 nm比值测定、RT-PCR试验等对结果进行分析评价。结果表明,4种方法均能提取百蕊草根中总RNA,提取效果差异显著;改进TRIzol法提取总RNA的28S和18S条带清晰,无弥散,28S亮度比18S加倍,完整性好,无明显DNA或其他杂质污染,D260 nm/D280 nm值为1.8~2.0,D260 nm/D230 nm值大于2.0,总RNA得率仅次于TRIzol法;用改进TRIzol法提取总RNA,反转录c DNA片段大小分布在0.2~2.5 kb,可扩增出目的基因片段,提取的总RNA完全适用于后续的分子生物学研究。     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

不同方法提取银杏叶片总RNA及RT-PCR

以银杏叶片为材料,分别采用CTAB法、SDS法和TRIzol法提取银杏叶片总RNA.结果表明:CTAB法、SDS法所提取的RNA经电泳检测,28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3务带清晰,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRIzol法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带.CTAB法和SDS法适于富含多糖和多酚等物质的植物总RNA提取.     

改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA

获得海葵纯度高、完整性好的高质量RNA,为海葵高通量转录组测序等分子生物学的深入研究提供基础,以南海海葵为研究对象,采用改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA,并利用琼脂糖凝胶电泳、Nano Drop TM 2000分光光度计和Agilent 2100生物分析仪检测其质量。结果表明:改进TRIzol法从不同发育时期的海葵中提取的RNA电泳条带清晰、海葵-大与海葵-中的RNA完整性好,海葵-小RNA完整性不合格;海葵-大、海葵-中和海葵-小的纯度(OD260/280)分别为1.981、1.983和2.071,浓度分别为335ng/μL、357ng/μL和232ng/μL。改进TRIzol法可有效从海葵中提取高质量RNA。     

BALB/C小鼠不同组织RNA提取方法的比较

为获得高质量BALB/C小鼠的核酸用于荧光定量RT-PCR分析,用某公司的RNA试剂盒、TRIzol试剂、氯化锂分别提取BALB/C小鼠心脏、肝脏和肾脏组织中的RNA。经紫外分光光度计检测发现,用TRIzol试剂在小鼠肾脏组织中获得的核酸片段具有更高的纯度及浓度,而1%琼脂糖凝胶电泳检测发现三种来源的RNA均具有较好的完整性。RT-PCR方法扩增小鼠主要组织相容性复合体蛋白H-2K编码基因,3个样品均可扩增出104 bp的特异性条带。试验验证了TRIzol试剂从不同组织中提取小鼠总RNA均可作为RT-PCR的模板,为后续试验工作奠定基础。     

阔叶薰衣草叶片总RNA两种提取法的比较

分别采用TRIzol法和改良的CTAB法提取阔叶薰衣草叶片的RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对其提取效果进行鉴定。实验结果表明：TRIzol法提取的总RNA浓度高,但杂质较多且有部分降解、稳定性差;改良的CTAB法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.909,效果稳定,有良好的可重复性。因此,...     

青蒿不同部位总RNA提取方法比较

为从青蒿中提取高质量的RNA,以青蒿叶片、茎、根和花为材料,采用TRIzol法、改良TRIzol法、十六烷基三甲基溴化铵-Li Cl(CTAB-Li Cl)法、CTAB-异丙醇法4种方法,比较不同材料不同方法分离RNA的效果。结果表明,4种方法所提RNA纯度均较高,其中改良Tri Zol法所提RNA质量最好。     

CPA恒温扩增技术在口岸蚊媒携带登革病毒检测中的应用

CPA恒温扩增技术为检验检疫基层实验室开展筛选检测和监控提供了有效的技术手段,应用登革病毒核酸快速提纯器和登革病毒RT-恒温扩增-防污染核酸快速诊断试剂盒,对苏州口岸捕获的登革媒介进行核酸提取和病毒检测,结果显示:该试剂盒检测结果与RT-PCR结果完全一致;2种核酸提取方法效率相当,对试验结果无影响;登革病毒核酸快速诊断试剂盒配合核酸快速提纯器完全适用于检疫现场快速检测.     

番茄叶片小RNA提取方法的优化

以番茄叶片为材料提取小RNA,比较分析UNlQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒+LiCl法,常规Tr-izol+LiCl法和改进的Trizol法+LiCl法的提取效果。结果表明,改进的Trizol+LiCl法能从番茄叶片中提取高质量的小RNA,总RNA琼脂糖凝胶电泳条带完整清晰,核酸蛋白测定仪显示RNA的浓度为1 026.8ng/μL,A260/A280比值为2.00;A260/A230比值为2.31。15%聚丙烯酰胺-7mol/L尿素凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰。用该方法提取的高质量的番茄叶片小RNA符合RT-PCR,Northern blot等分子生物学试验的标准。     

适宜猪背最长肌mRNA差异显示分析的2种总RNA提取方法的比较

以苏淮白猪为材料提取RNA,比较异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法与TRIzol试剂法提取RNA的效果.结果表明这2种方法提取的RNA经纯化之后均能够满足mRNA差异显示技术的需要,差别仅在于前者提取的RNA浓度稍高于后者,而后者更简便易行.     

鸡脂肪组织总RNA提取方法的优化和RT-PCR检测

提取完整的RNA是基因表达分析中的基础,但由于脂肪组织含有大量的油脂,所以从脂肪组织中提取高质量的RNA有一定的困难。在本研究中,报道了经过优化TRIzol试剂操作程序成功地从肉鸡脂肪中分离出了完整、高质量、纯度好的总RNA。用该方法提取的RNA显示清晰的28S、18S和5S三条带,OD260/OD280均值为1.893,浓度均值为263μg/mL。保温试验与RT-PCR扩增鸡LPL和GAPDH基因的分析结果也证明了所提取的总RNA质量较高。     

信号芋螺基因组DNA提取方法的优化

高质量的基因组DNA的获取是芋螺毒素基因克隆及基因组文库构建的关键。笔者采用4种方法提取信号芋螺（Conus litteratus)的不同组织器官的DNA，并综合比较了各组DNA的浓度和纯度、DNA片段的大小和完整性。结果表明，由改良的DNA快速提取试剂盒法提取的DNA纯度和浓度较好；4种组织器官中，腹足纯度较高，是更合适的提取组织；肝胰脏和毒管获取的DNA产率最高，但片段完整性差，污染严重；PCR反应获得了跟预期大小一致的特异扩增产物。因此，信号芋螺基因组DNA的提取最佳方法为改良的DNA快速提取试剂盒法，提取部位为腹足组织，可以获得高质量的基因组DNA，且符合后续实验要求。     

脏器RNA提取方法的改进

以猪脏器为材料,应用TRIpure Reagent总RNA提取试剂盒提取脏器总RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想。通过反复试验,改进了提取过程中的部分操作步骤。结果表明:改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率在0.01水平上有差异;改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪"βactin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全满足后续分子生物学试验的要求。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。