mIκBα表达载体在大鼠肝星状细胞中的稳定表达

目的:探讨将mIκBα基因成功转染入大鼠肝星状细胞,并在其中稳定表达。方法:应用脂质体介导的基因转移技术将mIκBα基因真核表达载体pCMX-mIκBα导入大鼠肝星状细胞中,采用G418筛选途径得到稳定转染的大鼠肝星状细胞,再通过Western blot技术检测转染后大鼠肝形状细胞中相应mIκBα蛋白表达水平。结果:稳定转染的大鼠肝星状细胞中证实有pCMX-mIκBα相应蛋白质的表达。结论:mIκBα基因真核表达载体pCMX-mIκBα成功转入大鼠肝星状细胞,并在细胞中得到稳定表达,为进一步研究NFκB和肝星状细胞凋亡之间的关系,并为通过诱导肝星状细胞凋亡治疗肝纤维化寻找实验及理论基础。     

LPS诱导流产小鼠蜕膜组织TNF-α及NF-κB的表达

目的：比较正常妊娠与脂多糖（LPS）诱导流产小鼠模型蜕膜组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）及核转录因子kppaB（NF—κB）的表达。方法：建立正常妊娠模型和LPS诱导流产模型。采用SABC法测定两组模型孕鼠13d蜕膜组织TNF-α和NF-κB的表达水平。结果：LPS诱导流产模型蜕膜组织TNF-α和NF-κB的表达明显高于正常妊娠模型（P〈0．01）。结论：NF-κB异常表达可能是小鼠流产的重要因素。     

常规剂量地塞米松对大鼠脑损伤后脑组织核转录因子-κB表达的影响

目的了解常规剂量地塞米松对大鼠脑损伤后脑组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、地塞米松组3组,每组20只。局灶性脑损伤后,空白组和假手术组分别腹腔注射0.1mL/(kg.d)生理盐水,地塞米松组腹腔注射地塞米松0.1mg/(kg.d)。各组动物分别在6、24、48和96h处死5只取脑制片,NF-κB表达用免疫组化检测。结果空白组各时间点NF-κBp65蛋白表达均高于假手术组(P<0.05或0.01);地塞米松组6、48h均低于空白组(P<0.01),两组24、96h时点差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脑损伤后受损脑组织NF-κB表达升高,常规剂量地塞米松可以抑制NF-κB表达而有效保护创伤脑组织。     

NF-κB抑制剂PDTC对卵巢癌细胞HO8910增殖、凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测不同浓度吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)、顺铂(DDP)和联合应用PDTC与DDP对HO8910细胞生长抑制的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度PDTC作用HO8910后的细胞凋亡率.结果表明: ① PDTC浓度为25、50、100和200 μmol·L-1时,作用12、24、36 h均明显抑制HO8910细胞的增殖,与对照组比较差异极显著(P<0.01),并具有时间、剂量依赖性.②顺铂联合应用PDTC时能显著提高顺铂杀伤卵巢癌细胞作用.③ 25、50、100 μmol·L-1 PDTC诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡.PDTC能有效抑制卵巢癌HO8910细胞增殖并能够增强顺铂化疗作用,提高疗效.     

TNF-α对下丘脑神经元的影响研究进展

介绍了肿瘤坏死因子TNF-α的发现、结构及其作用的信号通路,并从神经元的发育、生存、离子平衡和神经递质释放等方面综述了近年来TNF-α对下丘脑的影响研究进展.     

辛伐他汀对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺组织中NF-κB表达及血清C反应蛋白和TNF-α水平的影响

目的观察辛伐他汀对野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压大鼠核因子NF-κB的表达及血清C反应蛋白和TNF-α水平的影响,探讨辛伐他汀治疗肺动脉高压的作用机制。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组,MCT诱导的肺动脉高压组（模型对照组）,辛伐他汀干预治疗组（治疗组）。注射野百合碱建立动物模型,右心导管法检测大鼠平均肺动脉压（mPAP）,测量右心室肥大指数（RVHI）。采用Western blot法检测各组大鼠IKKα,IκBα和NF-κB p65蛋白表达情况。结果治疗组大鼠的mPAP和RVHI均显著低于模型对照组;治疗组大鼠肺组织NF-κB p65蛋白表达及血清C反应蛋白和TNF-α水平均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01或0.05）。结论辛伐他汀可有效降低MCT诱导肺动脉高压模型大鼠的肺动脉压、改善肺血管重构,其机理可能与抑制肺组织核因子NF-κB的表达及炎症因子的释放有关。     

核因子-κB与鼻息肉组织中缺氧诱导因子-1α表达的相关性研究

目的:观察核因子-κB(NF-κB)与鼻息肉组织中缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)表达水平的相关关系,以探讨鼻息肉发病的可能机制。方法:运用免疫组化SP法检测鼻息肉组织中NF-κB、H IF-1α的表达水平,采用t检验和直线相关分析进行组间差异和相互关系的统计学分析。结果:鼻息肉组织中NF-κB、H IF-1α的表达水平明显高于下鼻甲黏膜(P<0.001),鼻息肉组织中NF-κB与H IF-1α表达水平呈中度的正相关关系(r=0.628,P<0.001)。结论:NF-κB、H IF-1α在鼻息肉组织中呈阳性表达,其表达强度高于下鼻甲黏膜,与鼻息肉的发生发展相关;NF-κB可能通过上调H IF-1α的表达而作用于鼻息肉的形成过程。     

板蓝根对脂多糖致HL-60细胞产生TNF-α及TACE的影响

目的:探讨板蓝根对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致HL-60细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)的影响。方法:采用ELISA方法及RT-PCR技术,观察板蓝根对LPS诱导HL-60细胞分泌炎性细胞因子--TNF-α及TACEmRNA表达的影响。结果:板蓝根能有效抑制LPS诱导HL-60细胞释放的TNF-α(抑制率92.59%),并对LPS刺激TACEmRNA表达增加具有明显的抑制效果。结论:板蓝根能通过抑制TNF-α过度释放和TACE表达增加发挥其抗炎作用。     

板蓝根对脂多糖致HL-60细胞产生TNF-α及TACE的影响

目的：探讨板蓝根对脂多糖（Lipopolysaccharide．LPS）致HL-60细胞释放肿瘤坏死因子α（TNF-α）及肿瘤坏死因子α转换酶（TACE）的影响。方法：采用ELISA方法及RT—PCR技术。观察板蓝根对LPS诱导HL-60细胞分泌炎性细胞因子一TNF-α及TACEmRNA表达的影响。结果：板蓝根能有效抑制LPS诱导HL-60细胞释放的TNF-α（抑制率92．59％）。并对LPS刺激TACEmRNA表达增加具有明显的抑制效果。结论：板蓝根能通过抑制TNF-α过度释放和TACE表达增加发挥其抗炎作用。     

白藜芦醇对动脉粥样硬化大鼠核转录因子NF-кB的影响

[目的]研究白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化（AS）大鼠血脂水平和NF-κB的影响,探讨抗AS的部分机制。[方法]制成AS大鼠模型后,设4个组：①模型对照组（高脂饲料）;②低剂量给药组[高脂饲料＋Res30mg/（kg·d）];③中剂量给药组[高脂饲料＋Res60mg/（kg·d）];④高剂量给药组[高脂饲料＋Res120mg/（kg·d）],连续灌胃给药5周后,测定各组血脂和血管壁组织NF-кB阳性细胞表达率。[结果]各给药组TG、TC和LDL-C均较对照组有不同程度的降低,HDL-C较对照组有所升高;免疫组化和蛋白印迹分析均显示各给药组NF-кB阳性细胞表达率明显低于对照组。[结论]白藜芦醇可调节AS大鼠血脂,降低AS大鼠主动脉壁NF-κB的表达,从而抑制AS的形成。     

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4和TNF-α表达影响

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4和TNF-α表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源树突细胞免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7 d后用RT-PCR法检测TLR-4和TNF-α的mRNA表达,用Western-Blot和ELISA法分别检测TLR-4和TNF-α蛋白的表达。结果表明,MENK协同诱导组TNF-α和TLR-4表达高于正常对照组(P<0.01)和GM-CSF诱导组(P<0.05)。显示MENK可以促进树突状细胞TLR-4和TNF-α的表达。     

LPS对小鼠枯否细胞核因子-κB活性的促进效应

为探讨细菌胞壁主要内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)对与炎症反应紧密相关的核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,从正常对照和不同剂量的LPS刺激后不同时相的小鼠中分离出其肝脏枯否细胞 (Kupffercell,KC)。用凝胶迁移率改变分析法 (Electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测KC核提取物中NF -κB的活化与LPS的量效、时效关系。结果发现 :刺激 3h后 ,低剂量的 (1mg/kg)LPS ,即可检测到NF -κB活性 ;中剂量组 (5mg/kg)的NF -κB活性达峰值 ,高剂量组 (10mg/kg)则仍可维持NF -κB的活化状态。中剂量 (5mg/kg)刺激 0 .5h即可检测到NF -κB活性 ,3h时NF -κB活性达峰值 ,并可持续到至少 8h。表明抑制NF -κB的过度活化可能有助于炎症的治疗。     

PCV2感染对仔猪肝脏MyD88-NF-κB信号途径的影响

选取31头经检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的5周龄断奶仔猪,随机分为对照组16头和试验组15头,对照组仔猪每头滴鼻4 mL PBS,试验组仔猪每头滴鼻4 mL 5×105TCID50.mL-1PCV2悬液。于PCV2接种当天剖杀4头仔猪作为对照组,分别于14、21和35 d剖杀4头对照组和5头试验组仔猪,采集肝脏。用激光共聚焦显微镜检测核因子κB/P65(NF-κB/P65)蛋白的核易位变化;蛋白提取法分别提取肝脏细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blot定量检测细胞核中NF-κB/P65和细胞浆中p-IκBα、MyD88蛋白含量的变化;电泳迁移率(EMSA)法检测细胞核中NF-κB DNA的结合率变化。检测结果显示,PCV2接种仔猪,肝脏中NF-κB/P65蛋白核易位逐渐增多,到21 d达到峰值;p-IκBα、MyD88、NF-κB/P65 DNA结合率在接种后均先升高后趋于恢复,并于21 d达到高峰。与对照组仔猪相比,肝脏中MyD88和NF-κB/P65蛋白含量以及NF-κB DNA结合率在14和21 d试验组均显著升高(P<0.05),35 d含量变化不显著;21 d时试验组p-IκBα蛋白含量显著升高。相关性分析显示,NF-κB/P65蛋白含量与MyD88含量、NF-κB DNA结合率之间存在显著正相关,相关系数分别是0.566和0.528。结果表明,PCV2可通过激活MyD88启动NF-κB信号途径;通过IκBα的磷酸化降解激活NF-κB,并促进其进行核易位,使NF-κB与DNA发生结合,调控相关炎性细胞因子的转录和表达。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与肝肿瘤

细胞凋亡是生物体最重要的生理和病理现象之一，其在癌变机制和维持宿主免疫系统的内稳定方面有着重要的意义和不可或缺的调节作用。在细胞凋亡的调控系统中，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2 ligand，Apo2L)，是在肿瘤坏死因子家族中发现的新成员，这个凋亡诱导配体已引起了学者     

金钗石斛多糖对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α·NO的影响

[目的]研究金钗石斛多糖对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、一氧化氯（NO）的影响。[方法]用不同浓度金钗石斛多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞,LPS作为诱导剂,采用放射免疫法检测细胞培养液中TNF—α的含量,硝酸酶还原法测定细胞培养液中NO的含量,荧光法测定细胞内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性,实时PCR（real—time PCR）法测定TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。[结果]与LPS组比较,金钗石斛多糖在50～400mg／L范围内可干预LPS对小鼠巨噬细胞的作用,使小鼠腹腔巨噬细胞TNF—α、NO合成减少,iNOS活性降低。TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达降低。[结论]金钗石斛多糖可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的作用,使TNF—α mRNA、iNOS mRNA的表达降低,TNF—α、NO合成减少,从而起到抗炎的作用、     

核转录因子кB系统与肿瘤放射敏感性

离子化辐射可诱导许多早期反应基因的表达 ,包括 c- fos,c-jun,egr- 1,p5 3和 NFк B,这些早期反应基因编码的核转录因子 ,经由多条信号传导途径 ,进行细胞间及细胞内的信息传递 ,对于受照射的细胞起着重要的保护作用。凋亡是肿瘤细胞在放疗作用下最主要的被清除的方式。近年来许多研究发现 ,NFк B的活化和表达与肿瘤细胞抵抗辐射诱导的凋亡有关 ,电离辐射在诱发细胞凋亡的同时 ,也激活了 NFк B。因此 ,研究离子化辐射诱导的早期基因 ,更有助于阐明有关的细胞应激反应中的分子事件及生化事件。1　 NFк B系统的生物学特性在哺乳动物…     

肥育猪背最长肌NF-κB,IκBα和p94蛋白表达量与其剪切力的相关性研究

研究饲粮不同蛋白水平对猪骨骼肌中NF-κB、IκBα和p94蛋白表达量的影响,并探讨其与剪切力的相关性。试验选用90头约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪(公母各半,公猪去势),随机分为3个处理组,每个处理组3个重复,每个重复10头,分别饲喂蛋白质水平为12%、16%和20%的饲粮,各饲粮能量及氨基酸模式相同,饲养58d后屠宰取样,用蛋白质免疫印迹法测定猪背最长肌中NF-κB、IκBα和p94在骨骼肌中的蛋白含量。结果表明:饲粮蛋白水平对猪骨骼肌中NF-κB蛋白含量影响不显著(p>0.05),但对IκBα和p94蛋白含量和肌肉剪切力影响显著(p<0.05),且随着饲粮蛋白水平升高,肌肉IκBα蛋白含量呈升高趋势,p94和NF-κB蛋白含量呈降低趋势,肌肉剪切力呈升高趋势。肌肉IκBα蛋白含量与剪切力呈正相关,p94蛋白含量与剪切力呈负相关,NF-κB蛋白含量与剪切力不相关。     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠NF-κB、MCP-1、Col-Ⅲ表达的影响

目的 观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾转录因子-核因子κB（NF-κB）、单核细胞趋化因子（MCP-1）及Ⅲ型胶原（Col-Ⅲ）表达的影响,探讨六味地黄汤抑制肾间质纤维化进展的作用机制。方法 按照随机数字表法将60只SD雄性大鼠分为5组：空白组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组,每组12只,后三组行5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期手术,但不损及肾脏。造模术后3 d进行灌胃干预。灌胃8周后处死各组大鼠,观察各组大鼠残肾组织形态学变化并用免疫组化法检测大鼠残肾NF-κB、MCP-1、Col-Ⅲ的表达。结果（1）观察5/6肾切除大鼠残肾组织细胞形态学,与模型组相比六味地黄汤、依那普利组可减轻大鼠肾间质损害及纤维化程度;（2）免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质的NF-κB、MCP-1及Col-Ⅲ表达均明显低于模型组（P<0.05）,与依那普利组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 六味地黄汤可能通过下调NF-κB、MCP-1及Col-Ⅲ的表达,减少细胞外基质的积聚,减轻炎症反应和纤维化程度,抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化进展,可作为慢性肾衰竭的辅助用药。