小麦愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化

摘 要：以普通小麦的幼穗和幼胚为外植体进行愈伤组织诱导,研究了外植体及低温预处理等因素对小麦愈伤组织诱导的影响;并由小麦幼胚形成的愈伤组织进行了原生质体分离和纯化实验,研究了酶浓度及配比、酶解时间、蔗糖浓度等因素对原生质体分离和纯化效果的影响。结果表明：小麦幼穗离体培养时,以1.0-1.5cm长度的幼穗有利于愈伤组织的诱导;小麦幼穗和幼胚外植体采后低温储藏时不易超过3d,时间太长会影响愈伤组织诱导;2.0%纤维素酶＋0.5％果胶酶+0.6M甘露醇分离原生质体较好,最佳酶解时间为4-6h,原生质体产量和活力较高。     

白芦笋花药愈伤组织诱导及绿芽分化

为建立芦笋单倍体育种技术体系以解决国内芦笋新品种资源贫乏问题,笔者以白芦笋花药为外植体进行了愈伤组织的诱导及绿芽分化研究。试验结果表明,芦笋花药经过4d的冷藏(4℃)处理后,接种于含有NAA2.0 mg/L、6-BA1.0mg/L及6%蔗糖的1/2MS培养基上,可产生愈伤组织;每年的4月份接种花药的愈伤组织诱导率最高,8月份次之,11月份最低。品种间、同一品种不同单株间花药的愈伤组织诱导率不同,以‘UC155’品种(18.9%)最高,显著高于其他三个品种‘UC142’(11.6%)、‘Gijnlim’(10.3%)、‘Thielim’(5.8%),所有试验株系中以‘UC155’-8的愈伤组织诱导率最高,达83.5%;每日补充光照强度为1000 lx的光照,比全暗培养更有利于芦笋花药愈伤组织的形成;花药接种前进行离心处理(4000 r/min)30 min,不能提高愈伤组织诱导率;愈伤组织转瓶培养于NAA 0.5 mg/L、6-BA 1.0 mg/L及3%蔗糖的MS培养基上,能分化出无根绿芽;不同品种间绿芽分化率有差别,以‘Gijnlim’品种最高(67.2%),‘UC142’品种最低(14.1%);未分化绿芽的愈伤组织再转入于不含植物生长调节剂的MS培养基上培养,部分愈伤组织能分化出绿芽     

蓖麻花药愈伤组织诱导的研究

以通蓖5号为试验材料,诱导蓖麻花药的愈伤组织.分别以接种密度(1/5个、2/5个、3/5个、4/5个、1个花蕾)、基本培养基种类(MS、NB、B_5、N_6)、低温预处理时间(0d、1d、3d、5d、7d、9d)、培养基添加物(糖、生长激素、脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸)等因素为变量,对蓖麻花药愈伤组织进行诱导试验.结果表明,3/5个花蕾的接种密度、30g/L的糖浓度、MS培养基(添加1.5mg/L 6.BA和0.9mg/L NAA)以及5d的低温(4℃)预处理均有利于花药愈伤组织的形成;同时脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸等的加入均可有效地提高蓖麻花药愈伤组织诱导率.     

香蕉愈伤组织原生质体分离研究

本实验以巴西香蕉和皇帝蕉胚性愈伤组织为材料,对影响其原生质体产率和活力的因素进行了研究.结果表明:对诱导巴西蕉及皇帝蕉胚性愈伤进行原生质体分离,分别用CPW 13%甘露醇 1.6%纤维素酶 0.9%果胶酶酶解液处理巴西蕉愈伤组织12 h,用CPW 11%甘露醇 1.8%纤维素酶 1.0%果胶酶酶解液处理皇帝蕉愈伤组织12 h.巴西蕉产率最高达2.56×107个/mL,活力达61.5%;皇帝蕉产率达2.64×107个/mL,活力达63.4%..     

萝卜花药愈伤组织诱导及褐变因素初探

以萝卜为试材,研究了不同激素配比、供体基因型、光照与温度以及蔗糖浓度对花药愈伤组织诱导的影响,同时比较研究了花药愈伤组织褐变过程中几种抗氧化酶活性变化。结果如下：P403在2.0mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA+2.0mg/L KT的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,愈伤组织开始褐化的时间晚,抗氧化酶的活性较高;同时进行低温预处理、高温预培养和初期暗培养的协同效果较任何一种单独处理好;6%的蔗糖浓度有利于愈伤组织的诱导。     

提高冬小麦花药愈伤组织诱导效率的研究

为了进一步提高小麦花药愈伤组织的诱导效率,以12个黄淮麦区冬小麦杂交F1代为供试材料,比较了不同诱导培养基、培养方式和花药接种密度与共培养子房数等因素对花药愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:CHB培养基诱导效果最好,C17次之,而N6和W14效果较差,不同基因型对不同培养基的反应不同,但大多数材料在CHB和C17培养基上反应较好;培养基附加较低浓度的2,4-D(0.5 mg/L)时有利于形成胚状体并在诱导培养基上一步成苗;液体培养时愈伤组织诱导率最高但对愈伤的进一步分化不利,固体和双层培养时的诱导率最低,而半固体培养时不仅有利于愈伤组织诱导而且对其分化较好,是小麦花药培养的较好方式;花药与子房共培养可以显著提高愈伤组织诱导率,花药接种密度较低(2～2.4枚/mL)时较多的子房(20个)可以起到显著的促进作用,花药接种在高密度(6～7.2枚/mL)或中密度时(4～4.8枚/mL)10个或10个以上的子房诱导效果较好。     

高效冬枣花药愈伤组织培养体系的建立

以冬枣花药为试验材料,研究影响愈伤组织诱导、增殖和分化的因素,优化各因素建立高效的冬枣花药培养体系。结果表明:在愈伤组织诱导过程中,加入0.4~0.6 mol/L的甘露醇4℃处理1~3 d可提高愈伤组织的诱导率。最适的愈伤组织诱导培养基为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+30 g/L麦芽糖,诱导率可达到69.72%。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+0.3 mg/LNAA+1.0 mg/LTDZ+30 g/L麦芽糖;在WPM+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+20 g/L麦芽糖时,分化率最高可达89.00%。     

安祖花愈伤组织再生体系的建立及染色体检变

试验以安祖花幼嫩叶片和无菌苗叶柄为外植体,通过愈伤组织诱导途径,建立快速高效的安祖花再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片和叶柄愈伤组织的培养基分别为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D和1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D;诱导出愈伤组织在1/2MS+2.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上能很好的分化不定芽苗;1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可对再生芽实现增殖与复壮;最适宜的生根培养基为1/2MS+0.05 mg/L NAA。试验通过观察安祖花继代过程中愈伤组织细胞染色体变异的情况,发现随着继代次数的增多染色体变异细胞的频率也随之上升,并且染色体变异多为非整倍体变异。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L16(44)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根.结果表明:天蓝苜蓿现蕾15～25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达6...     

菠萝花药愈伤组织诱导及褐变影响因素初探

以菠萝为试材,筛选了花药愈伤组织诱导最适激素组合,同时通过正交试验研究了基因型、取样时期及添加AgNO3等因素对菠萝花药培养过程中愈伤组织诱导及褐变的影响。结果表明：菠萝花药培养诱导愈伤组织最佳激素组合为2 mg/L 2,4-D+0.08 mg/L TDZ;正交试验三个因子对愈伤组织诱导的影响主次顺序为AgNO3>取样时期>基因型,对褐变影响主次顺序为AgNO3>基因型>取样时期,其中AgNO3最适浓度为50 mg/L。     

无核小枣果核发育的解剖学研究

以无核小枣和金丝小枣为材料，采用常规石蜡切片法对枣果核核层发育进行了研究。结果表明：果核发育可大致分为3个时期即果核发育的前期，果核发育的中期，果核发育的后期。在果核发育的前期和中期无核小枣相对于金丝小枣其核层细胞的分裂速度慢，停止分裂的时间早，且酚类物质的积累少。果核发育的后期，无核小枣核层细胞的木质化程度低，且只是局部木质化。基于以上差异形成了无核小枣的果核较薄软且可食这一优点。     

枣与酸枣的SSR遗传多样性研究

为了探讨枣与酸枣资源的遗传多样性以及两者的亲缘关系,采用7对SSR引物,对16份枣品种(系)和17份酸枣的遗传多样性进行分析。结果表明:16份枣样品共扩增出56个等位基因,有效等位基因数(Ne)为3.798~10.000,平均为6.953,Shannon's信息指数(I)为1.984,期望杂合度(He)为0.837;17份酸枣样品扩增后共检测出73个等位基因,等位基因的有效数目(Ne)为3.273~11.840,平均为7.398,Shannon's信息指数(I)为2.105,期望杂合度(He)为0.843;枣和酸枣的遗传多样性都很丰富,酸枣的遗传多样性水平高于枣;Gen Al Ex分析得出,枣和酸枣居群种间遗传分化系数(Fst)为0.055,居群种间基因流(Nm)平均值为4.295,说明居群间基因交流比较频繁。NTSYSpc聚类分析表明,SSR分子标记可以将枣和酸枣划分为枣类、酸枣类和过渡类3个类群。     

冬枣百菌清、氯氰菊酯和氰戊菊酯残留的研究

为探讨药剂浓度、采样间隔时间和采后清洗方式等因素对冬枣果面农药残留的影响,采用改良的GC-ECD测定方法,在冬枣采收前30天,对冬枣病虫害防治中常用的百菌清、氯氰菊酯和氰戊菊酯进行农药残留研究,结果表明,喷药浓度对冬枣3种农药的残留量影响均达到显著和极显著的水平,残留量均表现为上限浓度〉下限浓度〉CK;随着采样间隔时间的延长,每种农药在冬枣上的残留量均逐渐减少,不同的农药变化趋势不同;洗涤剂对百菌清和氰戊菊酯的清洗效果较好,自来水洗涤对氯氰菊酯的去除效果较好。上述结果可为冬枣的无公害果品生产提供一定的参考。     

枣树杂交育种研究进展

枣树是我国独有的乡土树种,现有枣树品种大多存在缺陷,生产上迫切需要通过杂交的手段将不同枣树品种的优良性状整合起来,培育综合性状优良的新品种。由于枣树花小,人工去雄易伤害花器官,花量大而坐果率低,存在胚败育现象等问题都制约着枣树杂交育种工作的发展。本文综述了枣树开花、花粉萌发、生殖等方面的生物学特性,从枣树杂交育种的必要性、杂交方法和亲本选择等方面对枣树杂交育种研究进行了探讨,并对通过局部隔离法获得的枣树实生后代的性状遗传规律进行了总结,同时根据目前枣树杂交育种的研究现状和科研环境,以及枣树转基因研究的不断深入,对枣树杂交育种发展的前景做了展望。     

阜平大枣无芽茎段再生不定芽的初步研究

以MS为基本培养基,幼嫩的阜平大枣无芽茎段为试材,研究了灭菌时间、暗培养、以及植物生长调节剂对无芽茎段诱导不定芽再生的影响。结果表明：无芽茎段以灭菌8-10分钟为宜,暗培养21天最佳,在MS基本培养基上附加6-BA 1.0mg.L-1,,IBA 0.1mg.L-1再生率和平均出芽数显著高于其它处理, 分别为85.42%和 3.23,而且不定芽经培养后生长成枣头一次枝。     

‘赞皇大枣’增殖培养研究

以‘赞皇大枣’组培苗为材料,研究6-BA、IBA和NAA在枣组培苗增殖培养中的效应并筛选出适宜组合。结果表明,在赞皇大枣组培苗增殖培养中,6-BA分别与IBA和NAA配合使用时,IBA的活性高于NAA,二者结合使用可显著促进组培苗的增殖并提高成苗质量。‘赞皇大枣’最适培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L,最适培养条件为温度(25±2)℃,光照强度2000~3000 lx,光照时间14 h/d。     

枣结果枝cDNA文库的构建与部分ESTs分析

用定向克隆法构建了枣(Ziziphus jujuba Mill)生长初期结果枝的部分cDNA文库,获得1 338个阳性克隆,有557个携带cDNA片段,选取469个长度在500 bp以上的进行测序,得到390个有用序列,其中281个ESTs与NCBI中已知功能基因相似性较高(其中重复性ESTs 101个),有68个ESTs是NCBI中有序     

冬枣锈病发生与叶龄及其解剖结构关系的研究

为探讨冬枣叶龄、叶片解剖结构与锈病侵染和发病程度的关系,对冬枣3种不同叶龄的叶片进行锈病接种试验,并对叶片组织解剖结构进行了测定。结果表明：3种叶龄叶片感病程度由低到高依次为：成熟叶< 长成叶<嫩叶,由此可见,成熟叶对锈病的抵抗力最强;3种叶龄叶解剖性状在角质层厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅海比、叶片结构紧密度、叶片结构疏松度、气孔密度和气孔大小等指标有显著差异,但气孔开张结构性状差异不显著。文章筛选出了与冬枣锈病发生有关的叶片形态结构指标,为合理的控制冬枣锈病和筛选抗锈病冬枣优良单株的提供了理论依据。     

高质量枣树基因组DNA提取方法的研究

主要针对枣树组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题，本研究比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明：常规CTAB法提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质；TE3D法提取DNA多糖杂质少，但产率低、易降解、褐化严重；而改良CTAB法提取DNA量大(1000ng／μl左右)，产率高，可达120μg DNA／g新鲜组织，无明显降解，杂质少，A260/A280比值1．80左右，通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析，完全满足实验要求。并进一步对改良CTAB法的关键步骤作出具体分析讨论。     

超干贮藏对酸枣和沙棘种子生理特性的影响

采用室温硅胶干燥法对西北干旱半干旱地区种源酸枣和沙棘种子进行超干和加速老化(50℃,30d)处理,模拟不同气候条件下种子活力和生理特性的变化。结果表明:常温条件下,含水量5.3%～2.4%酸枣种子,含水量5.3%～2.6%沙棘种子能维持较高的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数和酶活性。老化处理后,当酸枣种子和沙棘种子含水量分别降到2.4%和3.4%时,种子的耐贮藏性增强。因此,酸枣种子和沙棘种子超干贮藏是可行的。