志贺氏菌检测和分群PCR方法的建立

为弥补目前志贺氏菌分子生物学检测方法的不足,根据志贺氏菌的invC、rfc、wbgZ和rfpB等基因,分别设计引物建立了鉴定志贺氏菌属、福氏志贺氏菌、宋内志贺菌和痢疾志贺氏菌的PCR方法。同时,以根据ompA基因设计的引物作为参照,通过特异性试验和人工接种试验等,对该方法进行验证。结果显示:17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100%的特异性反应;对增菌肉汤直接进行PCR检测时,在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1~3 cfu/(25 g·mL~(-1)),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤12、27和≤27 cfu/(25 g·mL~(-1));分离培养后再对可疑菌落进行PCR鉴定时,所有样品检出限均为1~3 cfu/(25 g·mL~(-1)),与传统培养法检出限一致。结果表明,该PCR方法快速、敏感、特异,适合用于志贺氏菌的常规检测分析。     

饲料中志贺氏菌的PCR快速检测方法的建立

为建立饲料中快速检测志贺氏菌的有效方法,本研究根据志贺氏菌(Shigella)侵袭性质粒抗原H基因(invasion plasmid antigen H,ipaH)设计了一对引物,PCR扩增片段长度为386bp。通过对引物的特异性检测发现,4株志贺氏菌的PCR结果均为阳性,12株非志贺氏菌的检测结果均未扩增出特异性片段。PCR对志贺氏菌纯培养物的检测灵敏度达120cfu/ml,检测快速、便捷。该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,能够快速地实现对饲料中志贺氏菌的检测和监控。     

志贺氏菌检测和分群实时荧光PCR方法的建立

为对志贺氏菌属细菌进行快速、准确检测和分群鉴定,根据志贺氏菌invC、rfc、wbgZ和rfpB基因,分别设计引物和探针,建立了鉴定志贺氏菌属以及福氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌和痢疾志贺菌氏菌实时荧光PCR方法,同时将根据ompA基因设计的引物和探针作为内参照,并通过特异性试验和人工接种试验等对该方法进行验证。结果显示,该方法对17株志贺氏菌和19株非志贺氏菌均出现100%的特异性;用增菌肉汤直接进行PCR检测,发现在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中的志贺氏菌检出限为1～3 cfu/25 g(mL),在原奶、生肉和奶粉中的检出限分别为≤8 cfu/25 mL、12 cfu/25 g和≤12 cfu/25 g;分离培养后再对可疑菌落进行实时荧光PCR鉴定,发现所有样品的检出限为1～3 cfu/25 g(mL),与传统培养法检出限一致。结果表明,该实时荧光PCR方法是一个快速、敏感、特异的检测方法,适合于志贺氏菌的常规检测分析。     

志贺氏菌属环介导恒温扩增快速检测方法的建立及初步应用

为建立快速检测志贺氏菌属的方法,本研究针对其ipaH基因,建立了志贺氏菌属环介导恒温护增(LAMP)快速检测方法。利用该方法对50株细菌进行检测,结果显示7株志贺氏菌均为阳性,其它菌均为阴性,表明该方法具有高度特异性。灵敏度试验显示,对志贺氏菌纯培养菌的检测灵敏度为28cfu/mL,对污染食品中志贺氏菌的检测灵敏度为35cfu/mL。利用该方法对195份涉及肉类、奶类、豆制品及人工污染样品进行检测,共检出29份阳性样品,与细菌分离鉴定检测结果一致。该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高且成本低廉,具有良好的应用前景。     

鲤鱼肠道中沙门氏菌、志贺氏菌分离鉴定及药敏试验

从江苏省某市菜市场采集商品规格(体重0.5~0.6 kg)的鲤鱼(Cyprinus carpio),利用SS选择培养基分离纯化获得107株肠道细菌,对其中2个典型菌株(编号CS-1、CS-2)进行细菌形态学观察、生化试验及药敏试验等研究。结果表明,CS-1、CS-2菌株均为革兰氏阴性小杆菌,均能利用葡萄糖产气,MR试验阳性、氧化酶和VP试验阴性;其中CS-1菌株吲哚产生阴性,硫化氢、半固体试验阳性;CS-2菌株则相反,初步鉴定CS-1为沙门氏菌,CS-2为志贺氏菌。药敏试验结果显示,CS-1、CS-2两菌株对先锋必素、先锋霉素Ⅳ、头孢孟多、头孢噻吩、呋喃妥因、氧哌嗪青霉素等药物高度敏感;对氯洁霉素、洁霉素、灭滴灵、利福平、红霉素等药物不敏感。该研究对水产品食品安全检疫及鱼类疾病防治等具有重要参考价值。     

变性高效液相色谱高通量检测动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌

应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法.根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测.以49株参考菌株做特异性试验,并开展了精密度检测试验.试验结果表明,该方法具有很好的特异性和精密度,经通用增菌和复合PCR-DHPLC技术可同时检测饲料中的沙门氏菌和志贺氏菌.该方法可以快速、准确、高通量检测,是动物源性饲料中致病菌高通量检测的新技术.     

牦牛源志贺菌分离鉴定、毒力基因检测与分型

本试验旨在阐明牦牛源志贺菌致病性及分子流行特性,为探索志贺菌流行途径,制定合理的防控策略提供新思路。2017年在甘肃、青海、西藏三省(区)共采集牦牛肛门棉拭子样品1 396份,通过选择培养基筛选、生化鉴定、血清凝集试验对分离菌株进行系统鉴定,应用PCR方法检测分离株中ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B和stx七种毒力基因流行情况。参照McMLST网站数据库提供的15对管家基因序列进行MLST分型;并参考美国CDC的PulseNet实验方法,用限制性内切酶NotⅠ和XbaⅠ分别对福氏志贺菌和宋内志贺菌染色体进行酶切,对这些分离菌株进行PFGE分析。结果显示,41株分离株符合志贺菌生化特征,分为4个生化表型,B3(36.59%)和B4(32.35%)为主要生化表型。血清凝集试验鉴定23株为福氏志贺菌,包括四个血清型1a(n=2)、2a(n=16)、2b(n=3)、Xv(n=2);18株为宋内志贺菌,分为Ⅰ相(n=12)和Ⅱ相(n=6)。共检测到6种毒力基因ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B,携带率分别为100%、92.68%、73.17%、70.73%、26.83%、26.83%。具有7种毒力基因型,其中VT5和VT7型为主要流行型,分别占43.9%和24.39%,同时携带两种及以上毒力基因的志贺菌占92.68%。41株志贺菌共分为10个ST型,其中ST100、ST116、ST155型为主要流行型。NotⅠ酶切的福氏志贺菌分为13个PT型,而XbaⅠ酶切的宋内志贺菌分为14个PT型。综上所述,牦牛源志贺菌生化表型、血清型、ST型和PT既存在多态性,又有优势流行型。本试验分离的志贺菌与人源志贺菌携带相同的毒力基因,其中ipaH、ipaBCD、ial、sen基因携带率较高,对公共安全具有潜在的威胁。     

鸭疫里默氏菌基因分型

在鸭疫里默氏菌 (RA)血清分型的基础上 ,以提取的 RA基因组 DNA为模板 ,进行 Rep- PCR扩增。根据扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱 ,将分属于 8个血清型的 4 0株 RA区分为 12个不同的基因型 ,不同血清型 RA的图谱有明显差异 ,相同血清型 RA的图谱也存在差异。这些结果显示 ,RA基因组中重复的基因外的回文结构可用于区别相同血清型的不同分离株 ;Rep- PCR作为一种实用的分子生物学方法 ,在分子流行病学研究中可对 RA分离株进行基因定型     

深圳市销售猪肉品中磺胺二甲嘧啶残留的调查

2005年我们对深圳市的超市、农贸市场销售的猪肉品(含猪肌肉、猪肝)进行磺胺二甲嘧啶残留的监测,共抽查猪肉品样品754份,检出阳性样品15份,阳性率为2.0%.     

西宁地区草坪主要杂草种类和危害情况调查及其防除对策

2002年7月-2003年6月对西宁地区草坪主要杂草种类和危害情况进行了调查。结果表明：杂草共有18科38种。杂草种类最多的有菊科6种、豆科5种、禾本科4种、十字花科4种，其中又以菊科和豆科杂草的危害程度最大。草坪杂草在5—11月为危害期，5-9月为严重时期，采用机械防除和化学药剂防除，配合高水平的养护管理可得到有效的防治。     

高寒地区一年生人工草地地上生物量动态及光能转化效率

对燕麦单播草地、燕麦+箭舌豌豆混播草地牧草组成及地上生物量动态,光能转化效率进行了观测和分析。试验结果表明,混播草地的两组分在生长发育节律和牧草产量积累过程方面均存在着较大的差异,箭舌豌豆与燕麦干物质之比随牧草生长发育的进展而逐渐增大。2种草地的干草产量在牧草生长期间差异不显著。8月中旬,单、混播草地干物质分别可达10.19、11.74t/hm2,地上净初级生产力分别为18874.69、21204.79kJ/(m2·a),光能转化率分别达0.3502%、0.3922%。     

鲤鱼肌肉组织中氯霉素残留测定

动物性食品中氯霉素的残留越来越引起人们的关注。动物性食品中氯霉素的残留 ,不仅对人体造成致命的影响 ,而且影响到我国的外贸出口 ,开展动物性食品中氯霉素残留的检测和研究工作十分重要。棉签法 ( STOP)是美国、加拿大等国法定的筛选方法 ,但棉签法只表明有抑菌物质存在 ,而无法判定是那一种抑菌物质。气相色谱法、液相色谱法等仪器分析方法虽可进行单一抗生素 (如氯霉素 )的分析 ,但样品都需经过复杂的提取纯化步骤 ,耗资大 ,每种抗生素的处理步骤又各不相同。薄层层析生物自显影法 ( TLCB)将薄层层析法和微生物测定法的优点结合起…     

青海省西宁地区鸡毒支原体感染的血清学检测

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对西宁部分县鸡血清中的鸡毒支原体抗体(MG-Ab)进行了检测,共检测血清286份,检出阳性样品146份,平均阳性率为51.08%。     

Comparison of serological and sequence-based methods for typing feline calcivirus isolates from vaccine failures

Feline calicivirus (FCV) can be typed by exploiting antigenic differences between isolates or, more recently, by the sequence analysis of a hypervariable region of the virus's capsid gene. These two methods were used to characterise FCV isolates from 20 vaccine failures which occurred after the use of a commercial, live-attenuated vaccine. Using virus neutralisation, the isolates showed a spectrum of relatedness to the vaccine; depending on the criterion adopted for identity, 10 to 40 per cent of them appeared to be similar to the vaccine virus. Using sequence analysis, the isolates fell into one of two categories; 20 per cent had a similar sequence to the vaccine (0-67 to 2-67 per cent distant), and the remainder had a dissimilar sequence (21-3 to 36-0 per cent distant). Sequence analysis identified one cat that appeared to be infected with two distinct FCVs. The serological and sequence-based typing methods gave the same result in 80 to 95 per cent of individual cases, depending on the criterion adopted for serological identity. It is suggested that molecular typing is a more definitive method for characterising the relatedness of FCV isolates.     

志贺菌的致病性及其分子机理

志贺菌为革兰氏阴性兼性细胞内致病菌,临床上可以引起痢疾.痢疾在世界各地都有流行,每年的发病人数达到二亿,其中95%以上的死亡人数发生在发展中国家,尤其对贫困人群的影响最大[1,2].在兽医临床上,志贺菌是猕猴肠道中的主要致病菌[3,4].细菌性痢疾是猕猴最常见的一种急性传染病,发病率可高达100%,死亡率达60%以上[5-7].     

Detection of streptococci from various serological groups in animals

During the period from 1985 to 1988 we determined 228 strains of streptococci isolated from samples of various sorts of biomaterials, mainly animals. From this set of streptococci we classified 207 strains into serological groups according to the Lancefield classification and about 30% strains into species by means of serological and biochemical methods. Most of the strains were allocated to group C (37.28%) and group Q (17.39%). 89 streptococci strains originated from pigs, 40 strains from horses, 13 from cattle, 12 from dogs, 9 from poultry and 8 from coypu. The other streptococci strains originated from other animal species or from different material. Most serological groups of streptococci were determined in pigs, less in cattle (7), in poultry (6), in dogs (6), in horses (5) and in coypu (3). Streptococci of the serological group Q were determined in as many as 9 animal species, group C in 8 species and group G in 6 species.