用于蛋白质组分析的两种马铃薯块茎蛋白质提取方法的比较

【目的】进行两种提取方法下马铃薯块茎蛋白质组结果差异分析,并确定最佳马铃薯块茎蛋白质提取方法.【方法】采用酚提取法和三氯乙酸/丙酮沉淀与乙酸铵/甲醇沉淀相结合的两步沉淀法提取马铃薯块茎蛋白质,进行2-DE分离,对差异表达蛋白质进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定.【结果】两步沉淀法提取的马铃薯块茎蛋白质较酚提取法获得蛋白质纯度和浓度及蛋白质点数目均明显增加,双向电泳凝胶图谱分辨率较高.质谱鉴定结果表明,两步沉淀法中鉴定的差异表达蛋白质丰度均显著高于酚提取法,并鉴定到一些新出现的蛋白质包括假定的线粒体NAD依赖的苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶类似物和蛋白酶抑制剂II前体类型B.【结论】提取马铃薯块茎蛋白质时两步沉淀法优于酚提取法.     

马铃薯块茎总RNA提取方法比较

以马铃薯普通栽培品种“米拉”块茎为材料,对Trizol法、改良Trizol法、Logeman法和改良异硫氰酸胍法提取的总RNA进行比较与分析.结果显示,Trizol法提取的总RNA含有轻微蛋白质污染,经过改良后可完全除去,但成本高适合小量快速提取;Logeman法和改良异硫氰酸胍法均可提取得到高质量的RNA,而且成本较低适合大量提取.     

两种马铃薯块茎总RNA提取方法的比较

以马铃薯普通栽培品种"大西洋"的试管薯为材料,针对马铃薯块茎富含多糖和酚类化合物的特点,分别采用Chan法和Trizol法提取马铃薯块茎总RNA。结果表明,Chan法比Trizol法更适宜提取马铃薯块茎总RNA,该法提取的总RNA的28S、18S和5S rRNA条带清晰可见,无降解现象,未被蛋白质、多糖、酚类物质以及残余试剂所污染,且通过RT-PCR技术可以成功扩增出马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶AGPase小亚基基因。     

马铃薯块茎蛾对马铃薯块茎挥发物的嗅觉反应

[目的]探讨马铃薯薯块挥发物对马铃薯块茎蛾的引诱效果。[方法]利用Y型嗅觉仪测定马铃薯块茎蛾成虫对自然贮存不同时间（0、15、30、45、60d）完整的和切开的马铃薯块茎挥发物的嗅觉行为反应。[结果]不论是新鲜的还是放置不同时间的完整马铃薯块茎释放出的气味对马铃薯块茎蛾雌、雄虫均无显著引诱效果。剖开的新鲜马铃薯块茎能显著引诱已交配雌蛾,但对处女雌蛾和雄蛾无显著引诱效果。室内自然放置15d以上的马铃薯块茎被切开后所产生的气味不能显著引诱雌、雄两性成虫。剖开的新鲜马铃薯块茎气味不能显著加强雌性信息素对雄虫的引诱效果。[结论]剖开的新鲜薯块挥发物对马铃薯块茎蛾雌虫有显著的产卵引诱效果。但对两性成虫的交配行为无影响。     

马铃薯蛋白提取方法综述

马铃薯是人们喜爱的块茎类蔬菜之一,马铃薯蛋白质含量也很丰富。阐述了马铃薯蛋白的组成特点,对马铃薯蛋白的各种经典和最新的分离提取方法进行了综述,以期对进一步研究马铃薯蛋白提供理论依据。     

适于苹果韧皮部提取蛋白质的方法

利用TCA/丙酮沉淀法、直接提取法和两种改良的Tris-HCl提取法对苹果实生树的韧皮部提取蛋白质,并用SDS-PAGE和银染显色的方法对提取的蛋白质结果进行比较,发现：用经过浓缩的的Tris-HCl改良法提取的蛋白质条带清晰,数量多,方法简单且杂质干扰少。因此浓缩的Tris-HCl改良法是适用于苹果韧皮部蛋白质提取的最佳方法。     

马铃薯块茎中还原糖测定的一种方法

马铃薯块茎中还原糖含量因其品种不同而有很大差异 ,一般含量在 0 0 4 %～ 2 0 %。还原糖含量是决定马铃薯块茎是否适合加工的重要指标。油炸马铃薯薯片或薯条要求成金黄色 ,但马铃薯块茎中较高的还原糖含量会使油炸马铃薯薯片或薯条颜色变为褐色 ,甚至变为黑色 ,严重影响其商业价值。马铃薯块茎中理想的还原糖含量约为鲜重的 0 2 %以内 ,用于炸片的马铃薯块茎还原糖含量不应超过0 33% ,用于炸薯条的不应超过 0 5 % 〔1〕。在同一品种马铃薯块茎中 ,还原糖含量会随着其储藏温度、储藏时间长短的不同而发生变化 ,马铃薯块茎在 10℃以下…     

黄瓜叶片细胞壁蛋白质提取方法的筛选

以黄瓜幼苗的叶片为材料,分别采用酚提取法、盐提法、尿素提取法和真空渗透提取法分离细胞壁蛋白,比较不同提取方法的提取效果,以期为黄瓜细胞壁蛋白质组学研究的开展奠定基础。结果表明:盐提法的蛋白产率最高,尿素提取法次之,真空渗透提取法和酚提取法的蛋白产率较低;采用六磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定法检测细胞质蛋白的污染率,其中,真空渗透提取法获得的细胞壁蛋白污染率最低(1.07%),其次为盐提法(2.17%),而酚提法和尿素提取法的污染率分别高达25.90%和2.60%;SDSPAGE电泳分析表明盐提法的蛋白条带清晰,且细胞质中高丰度蛋白Rubisco的条带不明显。     

马铃薯块茎性状的遗传研究

研究了米拉等10个马铃薯品种的22个杂交组合无性一代的块茎产量等8个块茎性状的群体遗传和配合力效应。结果表明：单个块茎重遗传的父本遗传力达56．7％，淀粉含量遗传的母本遗传力和亲本间非加性效应分别达40．5％、44．9％，皮色、块茎产量和结薯数遗传的非加性效应分别达69．1％、82．8％、88．8％；肉色、块茎外观和薯形遗传的加性效应和非加性效应在42．2％～57．8％之间，相差不大。2个亲本(至少有1个)的一般配合力高的杂交组合后代的群体表现优于双亲具有一般配合力平均值的杂交组合；而双亲具有一般配合力平均值的杂交组合的群体表现优于双亲一般配合力都很低的杂交组合。根据一般配合力选择亲本配制大量杂交组合，并从中筛选优良单株和优良杂交实生籽组合的方法是马铃薯遗传育种的有效手段。     

马铃薯块茎蛾交配行为研究

研究了马铃薯块茎蛾成虫的交配行为,结果表明,成虫羽化当天即可进行交配,交配高峰出现在黑暗后1．0～3．0h,交配活动以羽化后2—4d表现强烈,以4日龄雌虫和3日龄雄成虫的组合效果最佳。雌雄蛾有多次交配习性,雄蛾平均交配3．2次,雌蛾有二次求偶现象。补充营养影响雌蛾起始求偶时间。     

梅花鹿鹿茸总蛋白的提取方法比较

蛋白质提取是进行蛋白组学分析的关键步骤。本试验比较了水溶、盐溶及醇溶3种提取方法对获取梅花鹿鹿茸总蛋白含量及SDS-PAGE电泳分辨率等的区别。结果表明,水溶法提取鹿茸蛋白质最佳,该方法提取的蛋白质含量高、能得到比较好的SDS-PAGE电泳图谱。进而对SDS-PAGE电泳操作步骤进行了探讨,确立了适用于蛋白组学下游技术-双向电泳分析（蛋白质提取、凝胶制备、染色、脱色）的方法。     

适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。     

枣树叶片蛋白质提取及SDS-PAGE单向电泳条件优化

[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。     

甘薯薯块DNA提取方法研究

甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。     

凝胶电泳蛋白质染色方法研究进展

蛋白质条带染色是蛋白质凝胶电泳中一个重要的步骤。目前的方法主要有考马斯亮兰染色、银染、荧光染色、负染等。将考马斯亮兰与BBR相结合进行染色，可以减少染色／脱色的次数，能够提高考马斯亮兰在蛋白质条带上的染色效果。Gallyas Intensifying方法与银染相结合，能提高用银染已经检测到的蛋白质条带的亮度，使蛋白质点之间及其与背景之间更容易区分。将银染与考马斯亮兰结合起来进行染色可以提高同一块胶上微量蛋白质检测灵敏度。目前，对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度，操作方便与否，费用是否昂贵等方面。如何在保持银染方法高灵敏度的同时，又能够有效地降低染色背景，用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物质，克服荧光染色使蛋白质化学性质改变的缺点，在保持负染不修饰蛋白质条带化学性质优势的同时，对蛋白质条带染色结果加以改善等，可能代表了蛋白质条带染色的未来发展方向。     

燕麦分离蛋白提取工艺研究

[目的]优化燕麦分离蛋白提取工艺。[方法]以河北省高寒作物研究所提供的燕麦为试材,采用国标中经典方法测定粉状燕麦的成分,用超临界二氧化碳萃取技术对粉状燕麦进行脱脂,通过正交试验研究了碱提酸沉法制取燕麦分离蛋白的最佳工艺条件。[结果]燕麦的水分、灰分、脂肪、蛋白质及淀粉含量分别为4．99％、1．93％、8．38％、12．21％和50．23％。正交试验结果表明,采用碱提酸沉法提取燕麦分离蛋白的最佳工艺条件为：浸提液料比为9,浸提pH值为10,浸提温度为50℃,浸提时间为90min;在该条件下燕麦分离蛋白提取率达60．37％。用SDS—PAGE法测定的燕麦蛋白的分子量范围在20～43kDa。[结论]用该工艺提取燕麦分离蛋白简便、准确且提取率高。     

白芷种子蛋白质提取方法的比较

[目的]建立适用于白芷种子的SDS-PAGE蛋白质样品提取方法。[方法]比较5种提取方法所获得白芷种子总蛋白质产量以及SDS-PAGE电泳的谱带数目、强度和电泳分辨率等方面的差异。[结果]方法 a所提蛋白质含量高,杂质少,电泳谱带清晰;方法 b所提蛋白质溶液电泳谱带清晰,分辨率较高,但提取含量较低;方法 c和d所提蛋白质杂质较多,纯度不高,分辨率较低;方法 e所提蛋白质纯度较高,但蛋白条带缺失较多。[结论]方法 a提取白芷种子蛋白质的效果最好,所提蛋白效率较高,杂质少,电泳谱带清晰,分辨率高,谱带数多,优于其他提取法。     

黄肉甘薯可溶性蛋白提取工艺的研究

以黄肉甘薯为原料,探究物料粒度、浸提温度、浸提时间、浸提液pH及提取次数对黄肉甘薯可溶性蛋白提取率的影响。通过单因素和正交试验得出提取黄肉甘薯可溶性蛋白的最优条件为：物料粒度为80目,浸提温度为40℃,浸提时间为2h,提取液pH为9,提取次数为2次。以上影响因素由主到次的顺序为：物料粒度〉浸提时间〉提取液pH〉浸提温度。     

山西不同品种大豆贮藏蛋白提取及亚基分析

用不同盐缓冲溶液分别提取大豆贮藏蛋白,对提取效果分析比较,结果表明,Tris-HCl(pH 7.8)缓冲溶液的提取方法最为合适;在确定提取方法的基础上,对山西不同品种大豆的贮藏蛋白进行了SDS-PAGE分析,电泳图谱显示,不同品种间贮藏蛋白亚基在数量和含量上有较大差别。