PCV2d的出现给商品化PCV2疫苗(PCV2a和PCV2b)带来的新挑战

<正>近几年证实了业内PCV2b向2d的基因型变化,并且PCV2d成了主要流行基因型,甚至在临床PCV2阳性样本中占比高达73%。那么,目前的商品化疫苗集中在PCV2b和2a两个基因型,是否对PCV2d有很好的交叉保护?PCV2(猪圆环病毒2型Porcine circoviruse type 2,PCV2)在养猪业的感染已普遍存在,给养殖场造成     

猪圆环病毒2型(PCV2)遗传变异与疫苗免疫、发病机理及诊断的关系

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的发生依赖猪圆环病毒2型(PCV2)的感染,表现为一群复杂的多因子综合征。目前在野外流行的PCV2被分为PCV2a和PCV2b两个亚群。北美和其它国家PCVAD的暴发通常与主要基因型从PCV2a转变为PCV2b有关。因此,有人提出基因型存在致病性和抗原性差异。总体来说,毒力是特定PCV2分离株的特性,与基因型无关。此外,报道证实只有少数抗原差异。就免疫病理学而言,位于衣壳蛋白C端一个保守的诱骗表位为不能鉴定基因型之间的致病力差异提供了解释。最后本文讨论了PCV2的遗传变异对疫苗和诊断方法的影响。     

2型猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是一种基因组较小,但有较高进化速率的DNA病毒,其是影响养猪业经济发展的重要病原体。到目前为止,PCV2具有5种基因型-PCV2a到PCV2e,但对PCV2流行株的基因序列的检测发现,PCV2的基因型仍在持续的发展。自2012年以来,PCV2d基因型的圆环病毒在北美取代了以前主导的PCV2b基因型感染,同时在中国和韩国也有了类似的趋势。圆环病毒的新兴基因型,其毒力存在增强的可能性,基于PCV2a基因型制备的疫苗,是否对PCV2d基因型圆环病毒的感染具有保护作用,已引起各国学者的重视。本文通过对PCV2的生物学特性、抗体变异情况以及其基因进化情况进行综合的分析总结,从而为PCV2疫苗的开发与研制奠定理论基础。     

2001—2012年国内主要PCV2流行基因型演变趋势

猪圆环病毒2型（PCV2）是严重危害世界养猪业的重要病毒性疾病。本文从GenBank随机选择和下载了281株国内分离的PCV2全基因组序列病毒株,研究PCV2基因型与PMWS的相关性,以及在2001年至2012年期间国内主要PCV2流行基因型的演变趋势。研究分析表明PCV2基因型与PMWS没有明显的相关性,但从2003年后在国内多数省份PCV2流行基因型发生了变化,即基因型从PCV2a（2群）演变成PCV2b（1群）,且PCV2b占主导作用。因此,针对国内PCV2流行基因型的演变趋势,可选择相匹配的疫苗进行有效地防控。     

中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析

对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料.利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%.进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型.鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?).     

科技进展

<正>猪圆环病毒2型在衣壳蛋白234氨基酸发生突变提高病毒毒力猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,在世界范围内给猪业生产造成巨大的经济损失。其主要有两个基因型:PCV2a和PCV2b。在中国和其他国家已经出现PCV2b基因型病毒的衣壳蛋白的ORF2区域发生突变的毒株。对新出现的PCV2b基因型突变株毒力的确定是非常必要的,把它和PCV2a、PCV2b基因型毒株进行比较,调查突变病毒的毒力是否更强。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

PCV2a/2b灭活疫苗与PCV2b亚单位疫苗免疫效力比较试验

比较猪圆环病毒(PCV)2a、PCV2b基因型全病毒灭活疫苗和PCV2b亚单位疫苗对PCV2b基因型强毒株免疫攻毒保护效力。取3种类型PCV2疫苗,分2次免疫PCV2抗原和特异性抗体阴性的BALB/c小鼠和14日龄仔猪,间隔21d,分别于免疫后14、21和35 d进行PCV2特异性ELISA抗体测定。使用临床分离鉴定的PCV2b基因型强毒株进行攻毒,通过攻毒前后临床观察、体温变化、平均相对日增重及PCV2核酸载量检测等对疫苗免疫效果进行评价。结果:不同类型PCV2疫苗免疫BALB/c小鼠后14 d能检测到PCV2特异性抗体,在35 d时抗体水平持续升高,其中PCV2b亚单位疫苗产生抗体水平高于全病毒灭活疫苗;不同类型疫苗均能刺激仔猪产生较好的免疫应答,其中PCV2b亚单位疫苗刺激机体免疫应答强于灭活疫苗;仔猪免疫攻毒试验表明,3种类型疫苗均可刺激机体产生抵御PCV2强毒攻击的特异性免疫应答,免疫组体温变化、相对日增重及PCV2核酸载量检测均与攻毒对照组间存在显著性差异,3种类型疫苗之间差异不显著。试验表明:3种类型PCV2疫苗免疫小鼠和仔猪后均能诱导产生抵御PCV2b基因型强毒攻击的特异性免疫应答反应,有效抵抗PCV2感染和提高猪的生长性能。     

上海地区发病猪群猪圆环病毒2型阳性样本中其他病原混合感染状况调查

本研究对2009年至2011年上海地区发病猪群内脏样本进行猪圆环病毒2型(Porcine circovirus,PCV2)检测,对PCV2阳性样本进行2a/2b分型检测,并对PCV2阳性样本进行其他病原混合感染状况调查。上海地区发病猪群PCV2阳性率平均为54.34%,以PCV2b单纯感染为主。在PCV2阳性样品中,其他病毒混合感染率平均达到60.2%,细菌混合感染率达到61.22%,病毒与细菌同时混合感染率为41.84%,平均混合感染率达到53.06%。研究表明,上海地区发病猪群PCV2阳性样本与其他病原混合感染比例较高,病毒主要以PRRSV为主,细菌主要以大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌及副猪嗜血杆菌为主;混合感染是导致猪群死亡的重要因素,也是当今上海地区猪群疫病的感染现状及发病模式。     

2017~2018年华中地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析

为了解华中地区近年来猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行情况,本中心对来自华中地区湖北、湖南、河南的1592份疑似PCV2感染病料进行了PCR鉴定,对部分阳性样品进行ORF2基因的克隆与测序,并进行同源性分析和遗传进化分析。结果表明:1592份样品中,有1091份样品检测为PCV2阳性,阳性率为68.53%,3个省份的PCV2感染率相近;其中38株PCV2 ORF2基因序列同源性为89.5%~100%,与参考序列的同源性为81.1%~99.9%;遗传进化分析显示,33株序列为PCV2d基因型,4株序列为PCV2b基因型,1株序列为PCV2a基因型。本研究结果表明,2017~2018年间华中地区PCV2流行的基因型以PCV2d为主,该结果对临床上PCV2的防控具有一定的指导意义,同时也为PCV2新型疫苗的研制积累了有效材料。     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗。PCV2变异较快,主要临床流行毒株从PCV2b逐渐演变为PCV2d,现有商业化疫苗免疫效果需进一步研究证实。论文就近年来国内外PCV2传统疫苗、新型基因工程疫苗、PCV2疫苗与其他疫苗联合免疫的研究进展进行综述,旨在为猪圆环病毒相关疾病的防控及疫苗的开发与利用提供参考。     

猪圆环病毒2型疫苗专利综述

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,疫苗免疫是防控PCV2的重要手段之一。文章从专利角度对PCV2疫苗的研究现状进行了综述,对涉及PCV2疫苗的专利申请概况、专利分布、重要申请人以及重点专利进行了分析,旨在为PCV2疫苗的开发和专利申请提供参考。     

Detection of porcine circovirus type 1 in commercial pig vaccines using polymerase chain reaction

The absence of extraneous viruses is a requirement in the quality control of vaccines for veterinary use in the European Pharmacopoeia. A polymerase chain reaction (PCR) assay for the detection of porcine circovirus type 1 (PCV1) and type 2 (PCV2) was evaluated in 18 commercial porcine vaccines. Since vaccine components may contain PCR enhancers or inhibitors, 13 of the studied vaccines (used as diluents) were subsequently spiked with different dilutions of PCV2 and tested by PCR. Although PCV2 DNA was not detected in any of the vaccines tested, PCV1 was detected in 2/18 vaccines (11%). Eleven out of 13 PCV2 spiked vaccines showed a positive PCR result. The lack of amplification observed in two spiked vaccines suggested that use of the PCR assay to detect PCV2 could depend on vaccine composition. The results of this exploratory study have demonstrated that PCR is a rapid and fairly sensitive method for the detection of porcine circoviruses as extraneous agents in vaccine products and can be used in the quality control of pig vaccines. The study has also indicated the need for optimising the sensitivity of PCR methods for PCV genome detection in vaccine products.     

猪圆环病毒2型感染性克隆构建

基于PCV2滚环复制原理,在分析PCV2不同基因亚型代表毒株基因组结构和序列的基础上,设计2对引物用于PCR扩增PCV2基因组序列。以从收集到的疑似PCV2感染的10份猪血清样品中提取的DNA为模板,用设计的引物扩增目的片段,并进行测序分析,1株为PCV2a型,4株为PCV2b型,5株为PCV2d型。每种基因型毒株中各选取一个样本,利用上述2对引物进行PCR扩增,并将扩增产物克隆至pEASY-Blunt simple载体中,通过双酶切连接2个PCR片段,构建含有约1500 bp重叠序列的PCV2基因组的质粒。通过脂质体转染法将含PCV2全基因组的质粒转染至PK-15细胞进行病毒拯救,经PCR和IFA两种方法验证,证明成功拯救出3个基因型的PCV2毒株。通过对PCV2全基因组结构及序列分析,该方法同样适用于PCV2g、PCV2h基因型病毒的感染性克隆构建。本研究建立了一种基于反向遗传学技术的PCV2感染性克隆的构建方法,为开展PCV2的病原学研究提供了技术支持。     

Effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccination on PCV2-viremic piglets after experimental PCV2 challenge

The objective of this study was to evaluate the effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccines on PCV2-viremic and -seropositive piglets born from naturally PCV2-infected sows against postnatal PCV2 challenge. The experimental design was aimed at mimicking commercial swine rearing conditions to evaluate the response of the PCV2 vaccine on PCV2-viremic and -seropositive piglets after experimental PCV2 challenge. PCV2a (or 2b)-viremic piglets received a PCV2 vaccine at 21 days of age followed by a PCV2b (or 2a) challenge at 49 days of age (28 days post vaccination). The PCV2 vaccines elicited a high level of humoral (as measured by immunoperoxidase monolayer assay and neutralizing antibody titers) and cellular (as measured by the frequency of PCV2-specific interferon-γ-secreting cells) immune response in the PCV2-viremic piglets after vaccination even in the presence of maternally derived antibodies (MDA). The initial infection of PCV2 in the pigs was not affected by PCV2 vaccination, however the challenging PCV2 was reduced by PCV2 vaccination on PCV2-viremic pigs. The results from this study demonstrate that the PCV2 vaccine used in this study is effective at reducing PCV2 viremia and lymphoid PCV2 DNA, even for PCV2-viremic pigs with passively acquired MDA at the time of vaccination.     

猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型（PCV2）有多个免疫学和毒力上重要的抗原表位,这些表位为疫苗和诊断制剂的设计提供了理论依据。近年来PCV2弱毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗和DNA疫苗等多种疫苗已取得新的研究进展和实际应用,且PCV2疫苗在种猪和仔猪中的应用效果良好。此外,羧甲基新茯苓多糖、谷氨酸、精氨酸和硒等免疫增强剂及营养物质均有助于提高PCV2感染动物的机体免疫力。为更好地防控猪圆环病毒病,作者对PCV2疫苗相关研究进行综述。     

猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测

【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein, Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考依据。【方法】本研究对2019-2021年于湖南省6个地区收集的17份PCV2阳性组织样品进行PCV2全基因组序列扩增及测序分析,绘制系统进化树,利用生物信息学方法分析Cap蛋白氨基酸变异情况,并预测CTL表位。【结果】系统进化树显示,获得的17株PCV2全基因组序列中,1株PCV2a、7株PCV2b和9株PCV2d。Cap蛋白氨基酸序列比对分析发现,共有16个氨基酸残基突变位点位于病毒Cap蛋白表面,且有11个突变位点参与构象型表位的形成。此外,共预测出9个PCV2 Cap蛋白潜在的CTL表位,其中4个表位(16-24、28-36、136-144和179-187位氨基酸)在GenBank的1 610株PCV2不同基因型毒株中高度保守。通过TCR-pMHC复合物3D结构对4个保守性...     

2013年-2015年辽宁地区猪圆环病毒2型遗传演化分析

为了解2013年-2015年辽宁地区猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传变异情况,采用PCR对辽宁地区采集到PCV2阳性病料样品进行全基因组扩增,并应用DNA Star软件进行序列比对和遗传演化分析.结果表明,检测的15株PCV2全基因组全长为1 767 bp和1 768 bp,基因核酸序列同源性为94.4％～99.8％;15株PCV2毒株中有11株属于PCV2b基因型,4株属于PCV2a基因型.结果表明,目前在辽宁地区有多种血清型PCV2同时流行,应该针对优势血清型制定免疫策略.