活性炭对甘蓝型油菜(Brassica napus L.)小孢子胚胎发生的影响

试验以大田环境下的多份甘蓝型油菜的品种或品系为材料,研究了活性炭对游离小孢子胚胎发生的影响.结果表明:活性炭对甘蓝型油菜游离小孢子培养胚状体发生有很好的促进作用,不仅提高了胚产量,而且有利于小孢子胚的正常发育,添加活性炭的固液双层培养基效果尤为显著.     

甘蓝型油菜离体小孢子胚胎发生能力的遗传分析

对一套甘蓝型油菜6×6半双列杂交组合和1个F2群体进行了离体小孢子培养。 不同基因型(组合)间产胚率差异极显著, 小孢子产胚率的广义遗传力为0.85。 F1小孢子产胚率具有明显的杂种优势, 平均优势率为10.52%。 小孢子产胚率的一般配合力和特殊配合力方差均达到极显著。 根据一般配合力的大小, 可将供试亲本分为高和低配合力     

甘蓝型油菜小孢了培养胚发生能力的遗传分析

用4×4完全双列杂交研究了甘蓝型油菜小孢子培养胚状体发生能力的遗传规律。结果表明多数F1的胚产量与具高胚发生能力的亲本相近，部分F     

甘蓝型油菜小孢子培养胚发生能力的遗传分析

用 4× 4完全双列杂交研究了甘蓝型油菜小孢子培养胚状体发生能力的遗传规律。结果表明 :多数F1的胚产量与具高胚发生能力的亲本相近 ,部分F1的胚产量与双亲中亲值接近。胚状体发生能力主要由基因的加性效应控制。高胚发生能力由显性核基因控制。广义和狭义遗传力分别为 97 2 %和 81 1%。由Lisandra(高胚发生能 )×Kamikita(低胚发生能 )的F2 群体胚发生数的分离结果得出小孢子胚状体发生能力由具加性效应特点的两个基因位点控制     

提高甘蓝型油菜小孢子胚状体成苗率的某些培养因素研究

甘蓝型油菜小孢子胚转到固体培养基上可直接发芽成苗或继代1～2次后成苗。直接成苗率与基因型、培养基成分和培养温度有关,与胚状体放置方式无关。(保604×Topas)F_2较DH保604直接成苗率高;1/2MS 0.1mg/L 6-BA较B_5 0.1mg/LGA_3利于胚状体直接发芽。胚状体转到固体培养基上经10℃低温培养5天或10天可提高直接成苗率,且10天效果更好。     

低温预处理对甘蓝型油菜小孢子胚胎发生的影响

研究了大田环境下栽培的甘蓝型油菜小孢子胚状体诱导过程中低温预处理的作用,结果表明:两个供试材料经过低温预处理,小孢子胚胎发生能力明显提高,同时,不同基因型要求的预处理时间不同。G369的胚产量在低温3d时达到最高,是对照的27.2倍,而Topas的胚产量在低温2d时达到最高,是对照的15.4倍。试验还统计了子叶型胚状体发生频率,发现与对照相比,处理后子叶型胚状体的频率呈下降趋势,表明低温预处理使小孢子胚发育同步性降低。     

单倍体育种技术在油菜育种材料创新上的应用研究 I．甘蓝型油菜游离小孢子胚状体的诱导发生

利用游离小孢子培养技术，对9个甘蓝型杂交油菜（品种）组合的F1代进行离体小孢子培养。2月底，当供体植株的第一朵花开时，取长度在2．5－3．5mm的花蕾通过离心分离出小孢子，并在NLN13液体培养基中浅层培养诱导胚状体产生，培养30天左右，可见到多种类型的胚状体产生。其中，黔杂991、黔杂271和黔杂18分别诱导出了30个、12个和2个胚状体，其余组合未能产生胚状体。表明：不同基因型材料，不同培养密度和不同生理状态，其小孢子胚状体产生的频率差异较大。     

大白菜内因对小孢子胚胎发生能力的影响

以15个大白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究基因型、花蕾长度对小孢子胚发生的影响。结果表明:不同试材的小孢子胚发生频率有明显差异,有11个品种诱导出胚状体,最高出胚率为每蕾54.17胚;诱导胚状体发生的最佳花蕾长度不同品种略有不同,多数品种在2.5～3.5mm时胚发生频率较高,其次是蕾长2.0～2.5mm时有较高发生频率。     

活性炭对小白菜游离小孢子培养的影响

以24个小白菜品种为材料,通过在NLN培养基中添加不同浓度活性炭,研究其对游离小孢子培养的影响.结果表明:在NLN-13培养基中添加活性炭(0.5 g/L),有利于小孢子胚的诱导和形成,供试材料(N4,N8)添加活性炭处理胚诱导率较未添加活性炭的处理分别提高19,66.5倍.采用添加活性炭(0.5 g/L)的NLN培养基对24份小白菜品种进行游离小孢子培养,有20份材料诱导出胚,培养成功率为83.3%.表明添加活性炭的培养基对小白菜游离小孢子培养有较好的效果.不同基因型间胚诱导率差别较大,每花蕾诱导胚数为0.4～86.7个.依据胚诱导率的高低可将其分为极易诱导、易诱导、难诱导和不能诱导出胚4类.B5 6-BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L 活性炭0.5 g/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于幼胚长成植株.     

甘蓝型油菜小孢子培养技术及其单倍体应用研究进展

油菜小孢子培养已经成为油菜育种和生物技术的一项重要内容.由于影响小孢子成胚和成苗的因素较多,低诱导频率及成苗率严重限制了该技术在育种中的应用.为了全面了解小孢子胚状体发生能力及影响再生体系的各项因素,掌握该技术的研究动态和发展方向,总结了近20年来国内外影响小孢子培养的主要因素:供体植株基因型、供体植株生长条件及生理状态、小孢子发育时期、培养基组成、培养条件,及其在双单倍体育种、诱变育种、转基因育种等领域中的应用.     

浅析几个因子对甘蓝型油菜游离小孢子胚胎发生的影响

为了快速纯舍杂交后代材料,提高重组基因型的选择几率,对40个杂交F1代组合进行小孢子分离培养。其中,有9个材料产生小孢子胚（占22.5％）,仅4个材料（10.0％）获得了再生植株并种植大田,表明基因型是影响小孢子胚胎发生的一个主要因素。4个杂交组合材料的胚胎发生率为0.08～0.86胚／蕾,平均为0.25胚／蕾。细胞学检测表明,本试验杂交组合材料的最适取样花蕾长度为3.5mm。大田取样采取切取花序,然后在4℃冰箱中插水加散射光保存4～5d不影响胚胎发生。热激培养2d后小孢子的膨大率是衡量小孢子胚胎能否发生的一个有效指标。     

小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高。     

绿菜花游离小孢子培养,胚胎发生和植株再生

取花蕾长３．０－５．５ｍｍ的花序,７％次氯酸钙溶液表面消毒１５ｍｉｎ,无菌水洗３次,然后轻压花蕾,过滤、收集滤液,离心后,将小孢悬浮于经过滤灭菌的改良的１／２ＮＬＮ培养基中,石蜡膜封口,置温度梯度培养箱作３２．５℃、１ｄ的高温热激诱导处理,后置２５℃下继续培养。本试验地１３份绿菜花供试材料的游离小孢培养能力进行初步研究,其中８种基因型（占全部材料的６１．５％）有胚胎发生,并获得５种基因型的再生株。     

油菜小孢子培养和双单倍体育种研究Ⅱ. 影响甘蓝型油菜和芥菜型油菜种间杂种胚产量的因素

对甘蓝型油菜与芥菜型油菜种间杂交F1代杂种进行离体小孢子培养研究.结果表明:(1)F1杂种胚产量受亲本基因型的影响；(2)在F1杂种花粉可育率为30%～43%的范围内，F1杂种花粉可育率对有效胚产量无明显影响；(3)供体植株年龄对高胚产量的材料无明显影响，对低胚产量的材料有明显影响.(4)提出用花药颜色来选择适合的小孢子培养的     

影响油菜游离小孢子培养再生因素的研究进展

7胚的培养及植株再生 7．1培养方式 经过高温处理后的小孢子，在24-25℃黑暗条件下静置培养2-3周，并保持良好的通气状况，促进胚的形成。胚龄是指从接种到胚被转移至固体培养基上，这段时间的长短。诱导植株再生最适合的胚龄是27d，0．2-0．3cm大小的胚比0．6-0．8cm的胚好。当肉眼可见胚状体（球状至鱼雷状早期）后，可以采用以下两种方法进行培养：     

甘蓝型油菜和芥菜型油菜杂种小孢子培养获得再生植株

利用分离小孢子培养首次从甘蓝型油菜和芥菜型油莱种间杂种(甘芥杂种)中获得了胚和再生植株。所用的培养程序是,将甘芥杂种小孢子在蔗糖浓度为13％的液体NLN培养基中32℃下暗培养2天,转入25℃暗培养3周,再在光照条件下振荡培养一周后转入再生培养基(B_5)。供试的8个正反交甘芥杂种,有4个对培养有反应,其中3个均为以甘蓝型油菜为母本的杂种。杂种911186(甘蓝型)×851336(芥菜型)的胚产量明显高于其他杂种,未发现杂种花粉育性与小孢子胚产量存在显著相关。多数再生植株形态上介乎两个亲本之间,已开花的植株多为不育类型。讨论了亲本基因型对杂种小孢子胚胎发生的影响和小孢子衍生植株的可能用途。     

大田油菜游离小孢子培养高频胚状体诱导及植株再生

以大田生长的双低油菜品系“9841”为供试材料，研究了影响小孢子培养反应的因素。结果表明：始花期前、后一周的主轴花序为起始材料经1-2d4℃低温预处理，B5培养基为提取液游离小孢子培养于含脯氨酸200mg/L、谷氨酰胺800mg/L、蔗糖13%的NLN培养基，32℃热激1d后转入25℃常温静置培养，二周后进行45rpm振荡培养，可提高胚状体的诱导频率及正常植株再生率。     

小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高.     

提高油菜游离小孢子胚诱导频率的研究

以11个甘蓝型油菜基因型为材料,采用NLN培养基进行游离小孢子培养,对如何提高可培养的基因型范围和产胚率进行了研究。结果表明,11个油菜基因型中有10个基因型可以诱导出胚,培养成功率达90.9%,表明采用NLN培养基进行游离小孢子培养油菜基因型范围比较宽,但各基因型间小孢子胚产量差别很大,每花蕾产胚量为0.08~3.53个,TR4和TR9两个基因型每花蕾产胚可达3.23,3.53个。以TR4和TR9两个基因型为试材,进一步改进培养基和培养方法,采用NLN培养基中添加激素和活性炭方法,可大大提高产胚率,产胚量分别达到7.11和10.05个/蕾;接种后,小孢子经33℃高温预处理可显著影响产胚量。子叶形小孢子胚在光下适当培养后转入B5 BA 0.2 mg/L NAA 0.02 mg/L继代培养基上,大多数胚能长成绿芽,B5 6-BA 0.2 mg/L 3%蔗糖 1%琼脂培养基有利于小孢子胚长成植株。     

秋水仙碱及热击与低温诱导对油菜小孢子胚状体成苗率的影响

甘蓝型冬油菜F1杂种分离小孢子直接用500 mg/L秋水仙碱处理15 h,在NLN-13培养液中培养,并于32℃和30℃分别热击暗培养3 d和7 d后转入24℃下培养,胚胎发生好,5周后产生大量正常胚体.将这些发育优异的胚体移入固体MS培养基后即进行10 d低温诱导(2℃),常温(24℃)光下培养能很好地萌发并直接、快速地再生植株,其萌发胚率和成苗率