血清中不同甘露(聚)糖结合凝集素浓度的绵羊感染绵羊肺炎支原体后免疫因子表达的变化

为研究中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)浓度感染绵羊肺炎支原体(MO)的免疫因子水平变化,本研究选择血清中MBL高、低浓度的绵羊各6只(感染组和对照组各3只),感染组人工感染MO,分别在人工感染前和感染后不同时间,采用荧光定量PCR法检测血液中血清因子及补体表达水平。结果显示,不同MBL浓度的绵羊人工感染后MBL m RNA水平呈下降趋势,MBL高浓度促炎因子IL-2和IFN-γ的m RNA表达水平较高,抗炎因子IL-4的m RNA表达水平在感染后1 d升高,此后开始下降,而IL-4的m RNA水平在14 d后有所升高;MBL低浓度羊感染后其TNF-α的m RNA水平显著升高,随炎症的缓解,逐渐降低;补体C1和C3的m RNA在感染后表现出不同的变化,MO感染可以激活补体途径。本研究结果表明,低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎具有一定的相关性,MBL不同浓度组之间其IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平存在差异,低浓度MBL的绵羊更易发生比较严重的炎症反应。     

绵羊支原体肺炎中不同甘露(聚)糖结合凝集素基因型对肺组织病变的影响

为建立不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因型绵羊支原体肺炎的动物疾病模型,本研究选择MBL外显子1中4种不同基因型共32只绵羊作为试验组,6只健康羊作为对照组,在人工感染绵羊肺炎支原体3周后全部迫杀,取肺脏组织做病理切片,以组织病理学评分确定肺部的炎症反应程度.不同MBL型绵羊的肺脏呈现不同程度病理改变,组织病理学评分结果为MBLA型和B型平均分为18.3和19.1,表现为重度病变;MBLD型平均分为12.3,为中度病变;MBL C型平均分为8.9,为轻度病变.本研究以组织病理学评分方法客观量化了不同MBL基因型肺部炎症反应的严重程度,根据评分结果推测MBL A型和B型为易感型,C型为抗性型.本研究利用组织病理学评分方法对其肺炎程度进行量化评价,为筛选绵羊支原体肺炎抗性基因型提供依据.     

长白猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化

对猪血清用PEG-6000进行预处理后,用甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的猪MBL样品.然后进行还原性的10%SDS-PAGE电泳,测定分子量与纯度.得到纯化的猪血清MBL分子有3种单体,分子量分别为33kDa、36kDa和56kDa.表明猪血清中MBL是以多聚体形式存在,而且具有糖基化位点.本研究为进一步研究猪MBL的生物学特性提供了基础.     

猪甘露聚糖结合凝集素的研究进展

猪甘露聚糖结合凝集素作为猪机体重要的天然免疫因子,在抗感染机制中发挥重要的作用。本文对猪甘露聚糖结合凝集素的遗传特性,生物学作用及与疾病发生的相关性等几个方面的研究进行了概括总结。     

注射甘露糖结合凝集素治疗人工感染绵羊肺炎支原体的效果

研究探讨甘露糖结合凝集素(MBL)治疗人工感染绵羊肺炎支原体的效果,揭示MBL蛋白对绵羊支原体肺炎的免疫调节作用,为阐明绵羊肺炎支原体的致病机制提供依据。人工感染绵羊肺炎支原体2周后注射MBL蛋白,对绵羊进行剖检,以及荧光定量PCR检测血浆MBL蛋白和重组MBL蛋白治疗前后,MBL、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、C1、C3的表达变化。结果显示,注射重组MBL蛋白3周后可以减缓患病羊的病程,肺部出血斑和出血点都有轻微的减轻,与无注射治疗的对照组比较,临床症状和病理变化较轻。蛋白治疗7d后血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、C3的表达水平升高,14d后呈现下降趋势,但高于对照组。MBL蛋白治疗后,患病绵羊血清中MBL、IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α、C1和C3表达量均升高,随后减少,证明MBL蛋白能短期内减轻绵羊支原体肺炎症状以及增强机体的细胞和体液免疫,提高机体的抵抗力并改善炎症。     

鸡甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及初步鉴定

本研究采用CNBr活化的Sepharose 4B亲和柱进行亲和层析,从鸡血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素（MBL）,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）方法测定其分子质量和构型。电泳图谱显示,在分子质量为33ku-34ku处出现两条带,表明鸡MBL具有多聚体形式。研究结果为进一步深入研究禽类MBL分子的特性奠定了基础。     

哈白猪甘露聚糖结合凝集素－A基因的遗传特征分析

甘露聚糖结合凝集素作为机体重要的天然免疫因子,在机体的抗感染免疫中发挥第一线的作用.其在动物或者禽类血清中水平的高低代表着机体的抗病性,因此可以作为抗病育种的筛选指标之一.研究依据GenBank上发表的甘露聚糖结合凝集素-A的保守序列,设计合成1对引物,采用RT-PCR和TA克隆方法获得重组目的产物,经酶切、PCR扩增和测序鉴定为哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A序列.同源性比较结果表明:哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A与约克夏猪的核苷酸和氨基酸序列同源性最高,为99%;二者核苷酸有3个不同,但是氨基酸有1个差异,位于131位α螺旋颈区内;哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A与人类甘露聚糖结合凝集素-A的氨基酸同源性为60%,而与其他灵长类的氨基酸序列同源性在77%～81%之间,这些数据提示哈白猪的甘露聚糖结合凝集素-A的保守程度相对较高.     

野猪甘露聚糖结合凝集素A基因的克隆及其生物信息学分析

根据GenBank上已发表的猪甘露聚糖结合凝集素A基因序列,设计一对特异性引物,通过RT—PCR法成功地从野猪肝脏中克隆到MBL-A基因序列。该克隆基因全长为875bp,包含MBL—A的完整开放阅读框。同源性分析显示野猪MBL—A基因与家猪核苷酸序列同源性在99％,推导的氨基酸序列同源性为100％：与其他哺乳动物相比核苷酸序列同源性在73％。83％之间,推导的氨基酸序列同源性在60％～81％之间。     

野猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及其多克隆抗体的制备

对野猪血清样品用溴化氰活化的甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的野猪MBL样品,再进行SDS-PAGE电泳,显示有1条32kDa主带,2条36kDa和56kDa副带。选取32kDa的蛋白带制备免疫原,免疫家兔制备抗血清,Western blot方法鉴定该抗体可以特异性识别野猪血清中的MBL分子。本研究表明采用亲和层析法可以获得野猪血清中MBL-A分子,制备的多克隆抗体可以用于检测天然MBL分子,将为野猪MBL的生物学特性及与抗病力相关性的研究提供基础。     

人工感染猪支原体肺炎的病理学观察

用猪肺炎支原体人工感染仔猪。发病猪临床表现轻度咳嗽和气喘。尸体剖解可见肺呈心叶、尖叶、中间叶和膈叶边缘胰样变,支气管淋巴结肿胀,切面湿润;右心室肥大、心包积液;肾脏稍肿大,色褐黄;肝脏轻度肿大,色泽较黄。病理组织学变化为细支气管周围有淋巴细胞增生,形成"管套"或结节,肺泡壁上皮细胞变性、坏死;肝细胞、肾小管上皮细胞颗粒变性。     

绵羊肺炎支原体的分离与鉴定

绵羊肺炎支原体是一种引起羊传染性胸膜肺炎的病原微生物,它不仅能感染绵羊同时也可感染山羊,发病率和死亡率较高,易给养羊业造成较大损失。近年来,内蒙古境内羊传染性胸膜肺炎也多有发生,为了查明病原,分别在内蒙古一些发病地区采取病料,经分离得到了疑似绵羊支原体菌株7株。对该病原微生物的分离培养、形态学特征、理化特性等进行了阐述,以期为该病的快速诊断及防治提供参考。     

绵羊肺炎支原体Y98和丝状支原体丝状亚种PG3抗原的分析

用SDS-PAGE和双向电泳方法,对绵羊肺炎支原体标准株Y98和丝状支原体丝状亚种标准株PG3的全菌可溶性抗原进行分析.结果表明,用SDS-PAGE分析Y98有9条蛋白带,PG3有11条蛋白带,其中有2条相同蛋白带;用双向电泳分析Y98全菌可溶性抗原多肽斑点有288±9,主多肽斑点有47个,相对分子质量范围在27 000120 000;pI范围为4.436-7.164,PG3全菌可溶性抗原多肤斑点有243±11个,主多肽斑点有36个,相对分子质量范围在27 000～120 000,而pI范围为4.213-7.987,二者有21个相同多肽点,但其多肽含量略有差异.     

绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达

为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p146高度同源;克隆基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P128蛋白是良好的免疫原。研究结果为进一步分析其功能及绵羊肺炎支原体血清学诊断技术的建立提供了有用的信息。     

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。     

绵羊肺炎支原体灭活疫苗的研制

绵羊肺炎支原体引起绵羊及山羊非典型肺炎,分布广泛,危害严重。本试验旨在研制绵羊肺炎支原体灭活疫苗。采用改良Thiaucourt's培养基对绵羊肺炎支原体临床分离株SC02进行培养,收集生长滴度达10⁹ CCU/mL的培养物,浓缩20倍后灭活,制备油佐剂疫苗。选择绵羊肺炎支原体抗体阴性的6月龄健康山羊经颈部皮下接种该疫苗5.0 mL/只(2×10¹⁰ CCU/mL),免疫后21 d,试验组与对照组山羊经气管接种绵羊肺炎支原体强毒Y98株5.0 mL/只(≥2×10¹⁰ CCU/mL),测量体温、观察临床症状,并于攻毒后30 d剖检,观察肺脏病理变化。结果表明,试验组5只山羊均获得免疫保护,全部精神状况良好,临诊和剖检均未见异常;对照组5只山羊出现咳嗽、发热、流鼻涕等症状,剖杀后见肺脏组织有典型的肺炎病理变化。本研究结果表明,该疫苗对山羊有良好的免疫保护作用。     

绵羊肺炎支原体的培养和PCR鉴定

安徽省3个山羊场有羊只发生肺炎症状,用支原体培养基对病料进行病原分离,经传代和纯化后分离到3株支原体,随后对分离到的支原体进行了形态学观察、PCR鉴定和序列比对,结果显示分离到的支原体均为绵羊肺炎支原体。     

绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究

为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体（10⁸、10⁹、10¹⁰ ccu/mL）经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率（PCR检测和支原体分离鉴定）,确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为10⁹ ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异：FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株（40%）,二者均高于A3株（25%）,但差异均不显著（P>0.05）;FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株（85%）及A3株（90%）,但差异也不显著（P>0.05）。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。