葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用ＱｉａｇｅｎＫｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒Ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认为所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

两种非放射性标记DNA探针检测菊花矮化类病毒的比较

以含菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）全长序列的重组质粒ＰＵＣ为模板ＤＮＡ，加入通用引物，在聚合酶链式反庆系统中制备地高辛标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针和生物素标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针。用这两种探针检测感染菊花矮化类病毒的菊花样本均为阳性反应，而检测健康对照的结果为阴性。采用ＰＣＲ－微量板杂交法，地高辛标记的探针检测ＣＳＶ ｃＤＮＡ的吸光值明显高于生物素标记的探针检测的吸光值，采用斑点杂光法，地高辛标记的ｃＤ     

葡萄无核基因RAPD标记的序列分析

报道了用Ｑｉａｇｅｎ Ｋｉｔ纯化ＲＡＰＤ遗传标记，用细菌质粒ｍ１３克隆ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ片段，采用自动荧光ＤＮＡ测序仪（型号３７３Ａ）测定了该ＤＮＡ片段的核苷酸组成及其排列顺序。无核白ＲＡＰＤ标记由５１９对核苷酸及其特定序列组成。因为无核白是无核基因的原始供体，作者认主所获无核白ＲＡＰＤ标记的ＤＮＡ序列，可以作为合成探针的基础，用于检测无核葡萄育种和无核品种的无核性。     

新城疫病毒F_（48）E_8株cDNA文库的构建

以ＳＰＦ鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒Ｆ＿（４８）Ｅ＿８强毒株，经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚－ＳＤＳ法提取病毒基因组ＲＮＡ，作为反应模板、采用Ｐｒｏｍｅｇａ公司商品试剂盒合成双股ｃＤＮＡ。以同聚物加尾的方法将ｃＤＮＡ克隆到质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（一）中，经ＡＩＸ平板筛选，限制性内切酶分析和Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的核酸探针检测，共获得插入外源片段大小在０．６～４．８ｋｂ的阳性克隆７５个，初步构建了Ｆ＿（４８）Ｅ＿８株的ｃＤＮＡ文库     

小麦—簇毛麦杂种染色体的DNA原位杂交研究

以生物素标记的族毛麦基因组ＤＮＡ作探针与小麦－簇毛麦杂种双二倍及异附加系染色体进行原位杂交，旨在探索一种鉴定小麦中簇毛麦染色质的分子细胞遗传学方法。首先试验了标记的簇毛麦ＤＮＡ与小麦ＤＮＡ之含量比对原位杂交效果的影响，发现探针混合液中不加未标记的小麦ＤＮＡ时，获得的原位杂交结果较理想。在八倍体小麦－簇毛麦双二倍体（２ｎ＝５６）中，１４对簇毛麦染色体出现明显的棕褐色原位杂交信号，而小麦染色体不显标记     

用非放射性原位杂交技术定位家猪PGD和HSL基因

用地高辛为标记物,以随机引物法标记猪ＰＧＤ ｃＤＮＡ和ＨＳＬ ｃＤＮＡ探针,经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后,将猪ＰＧＤ和ＨＳＬ基因分别定位在猪６号染色体６ｑ＾２５和６ｃｅｎ－６ｑ＾２１区域。     

猪MHCⅠ类基因区基因组DNA的RFLP初步分析

用４种限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ，ＨｉｂｄⅢ和ＲｓｔＩ对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组ＤＮＡ进行内急酶消化和电泳，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ将ＤＮＡ转移到ＮＣ膜上，将来源于猪ＭＨＣ的Ⅰ类基因猪移植抗原基因片段克隆ＰＤ１－ＡＤＮＡ（４．３ｋｄ）用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，进行分子杂交反应，比较了不同品系和个体间的限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ），结果表明：（１）经各种     

减蛋综合征贵州分离毒全基因组探针的制备及检测

为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒（ＥＤＳ）贵州分离毒株ＨＳ－１中提纯病毒ＤＮＡ后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ发生反应,只与３株ＥＤＳ病毒（国际标准毒ＡＶ－１２７、贵州分离毒ＨＳ－１、南京分离毒（ＧＣ２）ＤＮＡ呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出３０ｐｇ的同源ＤＮＡ,具有较强的灵敏度     

双峰驼线粒体DNA地高辛标记探针的制血及其应用

利用地高辛标记技术，对从双峰驼肝脏和肾脏提纯的线粒体ＤＮＡ进行了标记，制成探针，并用它检测了包含于白细胞总ＤＮＡ中的微量线粒体ＤＮＡ．结果表明这一技术完全可以成功地用于微量线粒体ＤＮＡ ＲＦＬＰ的分析。     

双峰驼线粒体DNA地高辛标记探针的制备及其应用

利用地高辛标记技术，对从双峰驼肝脏和肾脏提纯的线粒体ＤＮＡ进行了标记，制成探针，并用它检测了包含于白细胞总ＤＮＡ中的微量线粒体ＤＮＡ。结果表明这一技术完全可以成功地用于微量线粒体ＤＮＡＲＦＬＰ的分析。     

副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用

【背景】副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是猪的上呼吸道病原菌,引起格拉瑟氏病,主要引起断奶前后和保育阶段的猪发病,通常见于5—8周龄的青年猪,发病率一般为10%—15%。该菌有15种血清型,目前主要养猪国家流行的血清型为4型、5型、12型和13型,是严重危害养猪业发展的主要细菌性病原之一。目前国内还没有检测该菌抗体的商品化试剂盒。【目的】研制一种针对副猪嗜血杆菌的快速、敏感和特异性强的抗体检测试剂盒,为格拉瑟氏病的有效防控提供技术支持。【方法】表达并纯化OppA、DppA、HbpA 3种不同的副猪嗜血杆菌ABC转运体周质底物结合蛋白,使用副猪嗜血杆菌阴、阳性参考血清筛选以上3种蛋白中免疫反应性和反应特异性好的蛋白。以筛选的蛋白为包被抗原,建立检测HPS抗体的间接ELISA方法,优化间接ELISA反应条件,并组装试剂盒。在此基础上,确定该试剂盒的敏感性、特异性;通过对不同时间、不同猪场采集的2 000份临床猪血清样本进行检测,评价该试剂盒的实用性;在以上临床血清样本中随机选取200份,分别以研制的试剂盒、间接血凝试验以及进口商品化试剂盒进行检测,比较检测结...     

等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的评价与应用

食源性致病菌的快速检测一直是保障食品安全的关键。沙门氏菌(Salmonella)是重要的食源性致病菌之一。本研究以沙门氏菌人工污染的3种样品为对象,对一种基于环介导等温荧光扩增技术的沙门氏菌快速诊断试剂盒进行了灵敏度和准确性评估;再以该试剂盒对市售食品样品和临床腹泻样品适用性进行验证。结果表明,该等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的检测限为10~3 CFU/mL,准确性96.7%以上。所有不同样品的结果显示:阴性样本的假阳性率分别为0.0%、3.3%和3.3%;阳性样本检出率分别为97.9%、100.0%和65.7%(含低浓度细菌污染样品)。该试剂盒具有检测周期短、操作简便、适用性广等特点。     

新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒的应用

[目的]研发一种成熟稳定的新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒.[方法]在新孢子虫病rELISA检测方法建立的基础上,组装检测新孢子虫病的rELISA抗体检测试剂盒,对试剂盒的敏感性、保存期、特异性和重复性进行评价,并与两种商品化试剂盒进行对比试验,应用自制的试剂盒检测来自新疆各地州新孢子虫疑似病例区血清,共1329份.[结果]成功组装了新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,且该试剂盒敏感性高、保存期长、特异性强、重复性较好.与两种进口商品化诊断试剂盒比较,其符合率均在90;以上.在1 329样品血清中157份是阳性,其平均阳性率为11.8;.[结论]该试剂盒可以取代商品化试剂盒进行新孢子虫病诊断,为新孢子虫病的防治工作提供技术和产品支撑.     

口蹄疫病毒3AB试剂盒的检测及比较

以重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原,研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/G作为第二抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法。结果表明,在1 746份免疫猪血清中,3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%;在1 077份健康非免疫猪血清中,3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%;在36份人工感染猪血清中,3AB-ELISA对阳性检出率为100%。而牛的特异性的各项指标和阳性检出率分别为94.04%,97.96%和100%。猪/牛口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验检测试剂盒与国外同类试剂盒比较,阳性检出率高出12.5个百分点。     

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果（阳性检出率为1/30）准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。     

新城疫单抗酶联试剂盒对鸡群中强毒感染的监测试验

用新城疫(ND)单抗酶联试剂盒检测从疑有新城疫病毒强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉拭样品68份,检出阳性20份。随机对其中15份样品进行病毒分离,结果阳性符合率为100％(15/15)。结果表明,该试剂盒特异性强,灵敏度高,诊断快速,易于基层推广应用。为ND的确诊和免疫鸡群中NDV强毒感染的监测提供了新方法。     

生鲜猪肉中含扩增内标的沙门氏菌Real-time PCR检测方法的建立

建立含扩增内标的生鲜猪肉中沙门氏菌Real-time PCR检测方法,以提高检测的准确性。根据沙门氏菌ttrBCA基因设计引物和探针,利用犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因构建和目标基因相同引物的扩增内标,并对退火温度和引物、探针的浓度进行优化,建立含扩增内标的Real-time PCR检测方法,用该方法对人工污染生鲜猪肉样品进行检测。结果显示,该方法对19株非沙门氏菌检测结果均为阴性,对36株沙门氏菌检测结果均为阳性,特异性较好,热学裂解制备DNA模板法检测灵敏度达100 CFU/ml,试剂盒提取DNA制备模板法检测灵敏度达1μl2.66拷贝。在25μl反应体系中加入扩增内标103拷贝不影响目标基因的扩增,该方法能在12 h内对人工污染沙门氏菌的肉样做出检测。该方法不仅可快速检测生鲜猪肉中的沙门氏菌,同时避免了假阳性现象的产生。     

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀群进行快速诊断,采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样,应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性,诊断该群绿孔雀发生了新城疫。用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明,新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便、快速、准确。     

猪肺炎支原体斑点杂交检测方法的建立及应用

为建立猪肺炎支原体斑点杂交检测方法,并用于猪肺样品的检测,根据GenBank中登录的猪肺炎支原体(Mhp)P36基因序列,设计并合成一条地高辛标记的DNA寡核苷酸探针。进行Mhp斑点杂交反应,建立最佳反应体系和反应条件,对该方法进行特异性和敏感性试验,并采用最佳反应体系和反应条件在尼龙膜上对猪肺组织样品进行检测。结果表明,该检测方法可有效从可疑病料的猪肺组织中检出Mhp感染,检出率为39.5%。本研究建立的Mhp斑点杂交检测方法快速、敏感、特异,对Mhp的临床检测具有较好的应用价值。     

孕酮酶免疫测定试剂盒的研制及其在家畜繁殖上的应用

本文详细介绍了我们研制的孕酮酶免疫测定试剂盒所含内容、使用方法、操作程序、质量控制及其在家畜繁殖上的应用情况。试剂盒不仅操作简便,快速(从加样到出结果只需2小时左右),灵敏度高(1.6pg/孔),特异性强,稳定性好,而且无毒,对仪器设备的要求不高,适于在科研、临床诊断和畜牧生产中推广应用。已用该试剂盒检测了黄牛、水牛、奶牛、绵羊、警犬和家兔等动物在生理和病理情况下血液或全乳中的孕酮含量,结果可靠。