RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒方法的建立

猪传染性胃肠炎 ( TGE)是一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病 ,属于国际兽疫局 ( OIE)法典中 B类疫病必检的猪传染病。TGEV是一种有囊膜的正链 RNA冠状病毒。目前检测 TGEV的方法主要有中和试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验和电镜技术 ,这些方法对于检测 TGEV和防制 TGE起到了重要作用 ,但也存在特异性不强、灵敏性差、耗时长等缺点。c DNA探针、RT- PCR近年来已成为国际上用于检测病原微生物的主要方法。由于 c DNA探针与临床样品中非相关核酸有一定的非特异性结合 ,尤其是检测粪便、尿液等…     

猪传染性胃肠炎病毒基因工程研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是猪的一种重要的传染病病毒，给养猪业造成巨大经济损失。近几年来，随着分子生物学技术的广泛应用．在TGEV的各个方面的研究都取得了长足进展．积累了丰富的资料。本文就来对TGEV的基因工程研究进展作一介绍。     

猪传染性胃肠炎病毒检测的新方法

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的传染病,对新生仔猪具有高度致死率（通常100％）的传染病,给养猪业带来严重危害,已成为重要的猪病毒性腹泻病之一。因此对该病的诊断显得尤为重要。检测TGEV的传统方法主要有病毒分离、中和试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验和电镜技术等,这些方法对于检测TGEV和防制TGE起到了重要作用。目前cDNA探针、RT—PCR已成为国际上检测TGEV的主要方法,为临床上诊断TGE提供灵敏、快速的方法。     

猪传染性胃肠炎的防治

猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病，主要临床症状为呕吐、严重腹泻和脱水。不同年龄和品种的猪对本病均易感，其中2周龄以内的仔猪致死率可达100％，通常死于脱水和电解质代谢紊乱，给养猪业造成了极大的危害。现将防治方法介绍如下，供大家参考。     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立与初步应用

为了建立一种猪传染性胃肠炎(TGE)的病原检测方法,试验根据Gen Bank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因序列设计了1对特异性引物,采用RT-PCR方法进行检测。结果表明:该方法具有高度的特异性和较好的重复性,可检测到1×10-3μg/μL的TGEV DNA,并可用于临床上TGEV感染引起的传染病病原学的检测。     

猪传染性胃肠炎的诊断

猪传染性胃肠炎(TGE)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种高度接触性传染病。临床很难确诊,近几年发病率持续上升。猪是唯一易感宿主。主要传染源为病猪和带毒猪。病猪的体液、器官、和排泄物中都可能存有该病毒。20世纪以来,科技进步日新月异,猪传染性胃肠炎诊断方面的研究有了更进一步的改进,不论从方法还是从仪器设备都有了明显的提高。现如今在国际上,已经得到广泛应用的有c DNA探针、RT-PCR检测病原微生物的方法。     

竞争性DOT-ELISA法检测TGEV的研究

猪传染性胃肠炎(Porcine transmissible gas-troenteritis,TGE)是由冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的以仔猪呕吐、严重腹泻和高致死率为特征的消化道传染病[1]。本试验利用TGEV N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原检测试剂和以T     

猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine，TGEV)隶属于冠状病毒科冠状病毒属，是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原^[1]。由其引起的猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine，TGE)是一种急性、高度接触性传染病，以呕吐、严重腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪的高度致死率为特征。虽然不同年龄和不同品种的猪对本病都易感，但5周龄以上的猪很少死亡，多成僵猪，饲料报酬低，给养猪业造成了较大的损失。早在1933年，美国依利诺斯州就有关于TGE的记载，但到1946年才确定该病的病原为病毒^[2]。后来人们对TGE有了更多的研究，特别是自20世纪80年代以来，人们对其病原TGEV的研究更加深入。     

猪传染性胃肠炎预防和治疗措施

猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种以猪的严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病.现已成为一种世界性猪的疾病,该文就TGE的临床症状和病理变化等方面对该病在疫苗预防和药物治疗做一阐述,旨在为探索对该病的更为有效的预防和治疗方法奠定基础.     

巢式RT-PCR在猪传染性胃肠炎病毒检测中的应用

建立对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的巢式RT-PCR(RT-nested PCR)检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供更为可靠和敏感的手段。根据GenBank中收录的TGEV,纤突蛋白S基因的核酸序列设计了2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR、RT-nested PCR方法,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的RT-nested PCR诊断方法。试验结果成功扩增出长度为886 bp和690 bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。表明RT-nested PCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此法简单省时、灵敏性高。     

间接竞争ELISA检测TGEV方法的建立

猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteri-tis,TGE)是由冠状病毒科猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的以仔猪呕吐、腹泻、严重脱水为特征的消化道传染病。病毒粒子随粪便大量排出,是造成病毒扩大传播、仔猪大批死亡的重要原因。采取粪便样品进行病原检测,对该病早期诊断具有重要意义。目前针对TGEV感染有多种快速诊断方法,概括起来可分为针对病毒结构蛋白进行的各种免疫学诊断技术和近些年发展的以病毒核酸为基础的分子生物学检测方法。其中免疫学方法以其特异性强、易操作、不需要昂贵仪器等特点…     

猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用

猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均是能引起仔猪腹泻的冠状病毒,通过临床症状和剖检很难鉴别诊断,建立同时检测且能够鉴别诊断这3种疾病的快速检测方法对于临床诊断具有重要的意义。参照GenBank中登录的PDCoV,NPEDV M和TGEV N基因的基因序列,利用Primer5.0设计合成3对能扩增特异性目的片段的引物,构建重组质粒,并对RT-PCR反应条件进行优化,建立了检测PDCoV,PEDV和TGEV的多重RT-PCR诊断方法,并对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性分析。利用该方法对河南176份临床样品进行检测,并与普通RT-PCR检测方法对该检测方法进行比较分析。结果表明,所建立的三重RT-PCR方法对PDCoV的最低检测量是3.14×103拷贝/μL;PEDV的最低检测量是3.88×104拷贝/μL和TGEV的最低检测量是3.68×104拷贝/μL。所建立的方法具有较好的特异性,对猪博卡病毒(PboV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟(CSFV)和猪圆环病毒(PCV)等猪常见病毒的扩增结果均为阴性。应用所建立的三重RT-PCR方法对176份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV,PDCoV和TGEV检测,并将检测结果和单重RT-PCR检测方法比较,结果显示,多重RT-PCR检测结果与常规单一RT-PCR的结果符合率均为100%。综上,本试验建立了能同时检测PDCoV,PEDV和TGEV的三重RT-PCR方法,为临床上这3种疫病的快速检测和流行病学调查奠定了基础。     

猪传染性胃肠炎病毒N基因与甲病毒载体重组RNA的构建及表达

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）是冠状病毒科的单股RNA病毒，是猪传染性胃肠炎（TGE）的病原体。TGE是以猪的严重腹泻、呕吐和脱水为症状的一种急性高度接触性传染病。急性暴发后常呈地方流行性。目前没有特异的治疗方法，只能采取措施阻止病毒在猪场传播。TGEV基因结构研究表明，TGEV基因组主要由纤突糖蛋白（S）、整合膜蛋白（M）、核衣壳蛋白（N）、小结构蛋白（Sm）组的刺突。     

猪病毒性腹泻症及其防治对策

猪传染性腹泻是一类与卫生状况及饲养管理密切相关的传染病。在养猪发达国家此类疫病已不再是主要问题,但在我国仍然是危害严重的一类传染病。此类传染病的病原主要包括病毒、细菌以及寄生虫。其中,猪病毒性腹泻的发生与流行在近年呈现持续上升的趋势,已成为造成猪场损失的最为重要的原因之一。而在猪病毒性腹泻中危害最大的是猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻以及猪轮状病毒感染。1猪传染性胃肠炎(TGE)与猪流行性腹泻(PED)1.1病原特性TGE与PED的病原分别是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV),两病毒均属冠状病毒属,从…     

猪源益生菌体外抗猪传染性胃肠炎病毒作用的研究

为研究猪源益生菌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的作用,并分析其可能的抗病毒机制,本研究在体外细胞感染猪睾丸细胞(ST)模型上,采用MTT比色法、TCID50法、间接免疫荧光法以及半定量RT-PCR法评价益生菌抗TGEV的作用.MTT试验中,在3种作用方式(益生菌预处理细胞,再接入病毒;益生菌与病毒同时接入细胞;病毒先感染细胞,再接入益生菌)下,所选益生菌对TGEV感染细胞均有抑制作用:益生菌预处理细胞后,再感染病毒,细胞存活率升高;益生菌与病毒体外相互作用后接入细胞,病毒对细胞的侵害能力下降;病毒感染细胞后再接入益生菌,益生菌抵抗TGEV感染细胞的能力相对较弱.间接免疫荧光试验和半定量RT-PCR试验分别采用益生菌预处理细胞,再接入病毒以及益生菌和病毒体外作用后同时接入细胞两种方式来检测益生菌对TGEV感染细胞的抑制作用,结果与MTT结果一致.实验结果表明所选的3株益生菌及其代谢产物均能够抑制TGEV感染细胞,但菌株间存在差异.不同的作用方式对TGEV感染细胞的抑制作用也有所差异,其中益生菌预处理组的抑制作用最强,病毒感染细胞后再用益生菌进行处理组的抑制作用最弱.     

猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的快速鉴别诊断,根据PEDV的N基因和TGEV的S基因序列设计引物,并以猪β-肌动蛋白(ACTB)作为内参对照,建立了PEDV和TGEV的TaqMan探针双重荧光定量PCR检测方法。结果显示：该方法对PEDV、TGEV和ACTB的检测灵敏度分别为1、10和10 copies/μL;PEDV和TGEV敏感度为10^0.02 TCID₅₀和10^0.05 TCID₅₀,高于常规RT-PCR,批内和批间变异系数均小于1%。与猪德尔塔冠状病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒、猪轮状病毒、乙型脑炎病毒、塞内卡谷病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型均无交叉反应。采集124份临床病料样品进行检测,PEDV阳性率为42.74%,TGEV阳性率为8.87%,检测结果与该病毒单一荧光RT-PCR方法的检测结果均一致,证明该方法具有较高特异性和敏感性,可用于PEDV和TGEV临床病料检测。     

猪传染性胃肠炎病毒NC株的分离鉴定及生物学特性试验

本试验成功分离了1株猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),并对其进行了鉴定及生物学特性研究。取华南地区某猪场腹泻病猪肛拭子经无菌处理后接种PK-15细胞分离病毒,首代培养即产生典型的细胞病变。该毒株对鸡红细胞的血凝价为26,病毒效价(TCID50)为108.15/mL。经标准TGE阳性血清的血凝抑制和细胞中和试验鉴定该病毒为TGEV,血凝抑制滴度为28、中和效价为1∶381。通过RT-PCR检测及序列分析,确定其为TGEV,并将该毒株命名为TGEV NC株。TGEV NC株在没有超离纯化和4℃处理下仍有较高血凝特性,为国内首次报道。     

猪乳汁中抗猪传染性胃肠炎病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪乳汁中抗猪染性胃肠炎病毒(TGEV)Ig A抗体的间接ELISA方法,本研究以TGEV重组N蛋白为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记羊抗猪Ig A为检测抗体,并采用方阵法确定包被抗原和待检乳汁的最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了猪乳汁中TGEV Ig A抗体的间接ELISA检测方法。该方法检测稀释160倍的阳性乳清仍呈阳性;与猪流行腹泻和猪轮状病毒感染阳性乳清无交叉反应;批内和批间变异系数均小于10%。利用建立的ELISA方法与间接免疫荧光方法分别对134份临床样品进行检测,阳性检出率分别为58.2%(78/134)和59.7%(80/134),总符合率为85.6%。本研究建立的检测方法能够有效评估乳汁中TGEV Ig A抗体的水平。     

猪传染性胃肠炎及流行性腹泻比较研究

猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis,TGE)和猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhoea,PED)分别是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的传染病。TGE猪传染性胃肠炎对新生仔猪具有高度致死率,虽然不同年龄的猪对这种病毒均易感,但5周龄以上猪的死亡率则很低。1945年,Doyle在美国首次报道发生了本病。我国1956年在广东省首次报道,给养猪业带来严重危害。猪流行性腹泻是一种猪肠道传染病,哺乳仔猪受害最严重。本病主要发生在冬季,夏季也可发生。20世纪70年代初首…