有效阻断猪链球菌传播模式的探索

为了探索中越边境地区防控人感染猪链球菌的有效模式，试验选取3个猪场作为猪链球菌病免疫场和非免疫场，运用PCR和ELISA方法评估猪场免疫防控猪链球菌2型的效果，即选择边境地区东兴市、大新县和那坡县作为猪链球菌2型免疫示范区，对猪群接种猪链球菌2型疫苗后监测屠宰场和免疫场的猪链球菌2型抗体水平，以及通过培训等方式对普通群众和密切接触的相关人员普及猪链球菌病防控知识，并调查了免疫示范区人感染猪链球菌的情况。结果表明：免疫场猪群在免疫猪链球菌2型疫苗2次后产生较高的抗体水平，能极显著降低猪链球菌的感染率(P<0.01)。2016—2020年免疫示范区东兴市、大新县和那坡县猪链球菌2型疫苗免疫平均密度达到73.24%,免疫场猪链球菌2型抗体水平合格率为93.37%。3个县(市)实行免疫后，连续5年人感染猪链球菌数为0。说明在猪场进行猪链球菌2型疫苗免疫，能有效阻止猪群感染猪链球菌；在中越边境建设猪链球菌免疫示范区，通过加强疫苗免疫、抗体监测及防控培训切断了猪链球菌传人的途径，实现了人员零感染猪链球菌。     

猎链球菌2型上海分离株的病原特性鉴定

1997年底上海地区分离到一株猪链球菌2型，结合培养特性、生化特性、血清定型及动物试验等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养基本符合链球菌的特点，具有β溶血，生化试验结果不稳定，用国际通用的链球菌A-C乳胶分型诊断液检测分离株，不在其检测范围，但能凝集猎链球菌2型标准阳性血清，人工接种4日龄乳鼠和猪有致病性，本试验对上海地区首次分离的猪链球菌2型菌株进行了病原特性鉴定，证实猪链球菌2型在上海存在，为今后防治猪链球菌病提供了可靠的科学依据。     

猪链球菌2型多重PCR快速检测方法的建立

根据猪链球菌16SrDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型（1或／和2型）型特异基因序列设计了4条引物，建立了快速检测猪链球菌2型（1或／和2型）的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了敏感性和特异性试验。结果显示，所建立的多重PCR方法特异、敏感，对组织中的猪链球菌2型（1或／和2型）的最低检出水平为30CFU／mL。用所建立的多重PCR方法对采自江西、北京、珠海、天津、四川等省市的猪扁桃体样品进行了检测，并通过细菌分离和玻片凝集试验对其检测结果进行了验证，结果显示，检出阳性符合率为100％，证实建立的多重PCR方法可用于猪链球菌2型的快速检测。     

河南省猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况，本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定，并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定，对其中的2型猪链球菌进行了药敏试验。结果显示，试验共鉴定出189株猪链球菌，流行的猪链球菌的血清群主要以D群为主，其次是G群和C群；优势的血清型是2型、7型、9型和1型。其中87株为2型猪链球菌，超过90%的2型菌株对β-内酰胺类（青霉素G、阿莫西林和头孢菌素类）、氯霉素、万古霉素、环丙沙星敏感，超过40%的2型菌株对多西环素、四环素、红霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、克林霉素、链霉素、米诺环素产生耐药性。以上结果为指导猪场使用敏感药物及时控制疫情、选择血清型相符的疫苗进行预防及减少损失提供参考依据。     

重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测

本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。     

可视化2型猪链球菌LAMP检测方法的建立

由2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)引起的猪链球菌病(Swine streptococosis)是一种重要的人兽共患疾病,具有高感染率、高死亡率的特点。为加强口岸动物源性产品中2型猪链球菌的现场查验力度,建立了2型猪链球菌LAMP检测方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了测试。通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了对检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于在出入境口岸货物查验现场及猪场等一线实验室使用。     

猪链球菌2型毒力因子多重荧光PCR检测方法的建立与应用

本研究通过在扁桃体组织中添加猪链球菌2型菌后提取的DNA为模板，建立了检测猪链球菌2型毒力因子MRP和EF的多重荧光PCR检测方法，并对部分猪扁桃体和肌肉组织进行了检测。结果发现，本方法可以快速检测出组织内的致病性猪链球菌2型，且特异性强，灵敏度达到100CFU。采用本研究建立的方法对北京和江西部分屠宰场猪扁桃体及北京市售猪肉进行检测，没有发现致病性猪链球菌2型感染。本检测方法的建立，有利于快速确定人-猪链球菌感染原的致病性，这为疫情发生后，有针对性地采取紧急防控措施、保护消费者的健康和生命安全奠定了基础。     

猪链球菌2型与公共卫生

猪链球菌2型又称猪链球菌血清2型或英膜2型链球菌，人医称血液链球菌2型，分类上属兰氏分类法的R群。1954年在英国从暴发败血症、脑膜炎和关节炎的乳猪中分离到1株α-溶血猪链球菌，Elliot（1968年）按荚膜分类法把此菌命名为荚膜2型猪链球菌。之后，2型猪链球菌在澳大利亚、美国、丹麦、泰国、新加坡、加拿大及欧洲和北美洲的国家导致猪只发病，我国1990年在广东省首次发现类似此血清型链球菌的存在。     

猪链球菌2型的分离鉴定及猪场带菌情况调查

2016年10月山东省潍坊市某猪场的产房仔猪出现疑似猪链球菌感染病例。为准确诊断和进一步防控猪链球菌病,对病例进行了细菌分离培养、革兰氏染色、生化试验、16S RNA基因鉴定和动物接种试验等,最终鉴定为猪链球菌2型感染;对该场的产房、保育猪舍、育肥猪舍、母猪舍进行鼻腔拭子采集,以特异性引物通过PCR检测16S RNA基因和猪链球菌2型荚膜多糖基因(cps2),结果分离到了猪链球菌。检测发现,该场除产房仔猪携带猪链球菌2型外,其他猪舍均没有猪链球菌2型被检出。     

上海地区猪源链球菌分离株的病原特性鉴定

1997－1999年从上海地区分离出15株猪源链球菌，结合培养特性、生化特性及血清定型等对其进行了鉴定。其形态、染色及培养特性基本符合链球菌的特点，大多具有α或β溶血，生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A－G乳胶分型诊断液和猪链球菌1、2型标准阳性血清检测5株分离菌，4株为C群链球菌，1株为2型猪链球菌，1株为B群链球菌，1株为D群链球菌，1株与A群和C群有交叉反应，7株不在其检测范围。小鼠对15株分离菌的敏感性有所不同。本试验表明，上海地区猪链球菌病的病原已不再是单一的C群链球菌。对新出现的2型猪链球菌，应引起足够重视。