细胞凋亡与细胞色素C

细胞凋亡是动植物最基本的生命活动,是一个有一系列酶参与的,并且由基因控制的主动的、高度有序的死亡过程。线粒体除了为细胞提供能量外,在细胞凋亡中也起着中心调控作用。研究发现,线粒体释放的细胞色素C是细胞凋亡过程的关键因素,已是近些年研究的热点。本文就细胞色素C从线粒体释放的机制及在凋亡中的作用进行综述。     

民猪细胞色素C氧化酶Ⅰ基因的克隆、多态性检测及冷诱导研究

采用克隆测序和PCR- SSCP方法对民猪COX Ⅰ基因序列及多态性进行了检测与分析,采用实时荧光定量PCR法对同一饲养水平下经冷诱导处理的民猪和长白猪肌肉、肝脏组织中COX Ⅰ基因的表达变化进行分析.结果表明:民猪的COX Ⅰ基因序列与其他猪种相比,存在18个核苷酸突变,导致5个氨基酸发生变化;C260T、G275A和C1253T位点民猪以B等位基因占优势,大白猪、长白猪、北京黑猪、野猪则是A等位基因占优势;冷诱导后低温组民猪COX Ⅰ基因的表达量与常温组民猪和低温组长白猪相比,均显著下降(P＜0.05).据此推测冷诱导可导致COX Ⅰ基因表达量降低从而产生更多的ATP为机体提供能量抵御寒冷,COX Ⅰ基因可能是一个与猪的抗寒性显著相关的候选基因.     

布氏田鼠肝脏内线粒体蛋白含量及细胞色素c氧化酶活性的变化

为探讨线粒体能量代谢中细胞色素c氧化酶(cytochromecoxidase,CcO)在布氏田鼠(Microtusbrandti)生长发育过程中的作用,应用紫外分光光度法测定了不同日龄的幼鼠肝脏内线粒体蛋白含量及CcO活性。结果发现根据幼鼠肝脏内线粒体蛋白的含量可将生长发育大致分为3个阶段:1～3日龄,4～19日龄,20日龄至成体。CcO活性变化趋势则呈倒钟形,以17日龄的CcO活性为最高。据此推测布氏田鼠肝脏内CcO的活性可能与恒温机制的建立有关系。     

家蚕细胞色素C基因的克隆及其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放

 【目的】细胞色素C是线粒体凋亡路径上的关键因子,通过家蚕细胞色素C基因的克隆和其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放研究,为家蚕细胞凋亡的研究奠定基础。【方法】利用生物信息学和分子生物学方法克隆家蚕细胞色素C基因,通过紫外线照射诱导家蚕细胞凋亡,应用流式细胞仪和Western-blotting检测家蚕凋亡细胞的线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放。【结果】在家蚕中克隆了一个含有细胞色素C保守结构域的同源基因,该基因cDNA长570 bp,有3个外显子,开放阅读框（open reading frame,ORF）长324 bp,编码108个氨基酸,存在参与细胞凋亡时与下游凋亡蛋白酶激活因子（Apaf－1）相互作用的保守关键位点;紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1凋亡后12 h,细胞线粒体跨膜电位明显下降,同时检测到了细胞色素C由线粒体向细胞质释放。【结论】在家蚕细胞凋亡中可能存在细胞色素C由线粒体释放的路径。     

巨柏细胞色素氧化酶同工酶变异分析

为阐明巨柏Cupressus gigantea的濒危机理,根据聚丙烯酰胺琼脂电泳对巨柏3个大居群的36个个体功能叶片的细胞色素氧化酶的同工酶谱带测定结果进行编码,对各酶谱带进行聚类分析;同时结合细胞色素氧化酶的3个遗传指标进行分析。结果表明,来自同一居群的个体,同工酶谱带相似性高,遗传杂合度小（HeA．=0．726,HeB=0．691,HeC=0．704）,相似性系数大,遗传距离小,这说明居群内个体遗传分化小;而不同居群间的个体则恰好相反（IAB=0．240,IAC=0．259,IBC=0．401;DAB=1．427,DAC=1．351,DBC=0．914）,这主要是由青藏高原特殊的气候条件和巨柏的地理分布格局所造成的。     

K型小麦不育系花药壁细胞色素氧化酶的分布

用电镜细胞化学定位技术，对ｍｓ（Ａｅ，ｋｏｔｓｃｈｙｉ）－７７（２）雄性不育花药及其保持系花药四层组织和维管组织细胞中的细胞色素氧化酶进行了定位和相对定量的研究，结果表明，药壁中层，绒毡县细胞内细胞色素氧化酶的变化，不育系与其保持系基本一致，而药壁表皮，药室内壁和维管组织细胞内线粒体中的细胞色素氧化酶的含量明显低于其保持系，推测，细胞色素氧化酶活性降低可能是导致花粉败育的重要因素之一。     

濒危植物缙云卫矛细胞色素氧化酶的同工酶变异

采用丙烯酰胺琼脂电泳技术,对重庆北碚缙云山麓特产缙云矛３个居群的３６个个体功能叶片细胞色素氧化酶的同工酶谱带进行了测定,并进行编码,然后采用Ｓｏｋａｌ－Ｓｎｅａｔｈ结合系数的组平均法（ＵＰＧＭＡ）和Ｓｏｋａｌ－Ｍｉｃｈｅｎｅｒ结合系数的加权平均法（ＷＰＧＭＡ）对各酶谱带进行聚类分析;同时结合遗传杂合度（Ｈｅ）、遗传相似性系数（Ｉ）、遗传距离（Ｄ）进行遗传分析。结果表明,来自同一居群的个体,不但同工     

乐果急性、亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶及细胞色素氧化酶影响的研究

对6周龄雄性SD大鼠分别单次灌胃给予50%(LD50)的乐果、连续5 d灌胃给予20%(LD50)的乐果,观察给药后至屠宰前大鼠的急性、亚急性毒性反应。采用丁酰硫代胆碱法测定红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶;采用定量RT-PCR法测定试验大鼠肝脏中细胞色素氧化酶8个亚型的表达量。结果表明:供试大鼠用药后不同时间出现了呕吐、流泪、流涎、震颤等典型的有机磷药物中毒症状。红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶均明显降低,以试验组和对照组脑组织中胆碱酯酶差异最为显著,急性暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低80.12%,亚急性暴露组大鼠脑组织中的胆碱酯酶降低93.13%,试验组大鼠细胞色素氧化酶中CYP2B1/2亚型的表达量明显增加,为对照组大鼠表达量的4~8倍。     

基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因序列的帘蛤科贝类分子系统发育研究

对21种帘蛤科贝类线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(cytochrome c oxidase subunit I,COI)基因核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发生研究中的应用价值.测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为707 bp(含引物),序列A+T含量(62.4％-67.8％)明显高于G+C含量.物种间共有变异位点379个,其中简约信息位点334个;此区段共编码235个氨基酸,种间共有氨基酸变异位点100个.以COI基因片段序列为标记,用中国蛤蜊(Mactra chinensis)作外群,构建了35种帘蛤科贝类(其中14种贝类COI序列从GenBank下载)的系统发生树,结合拓扑结构分析和序列比对分析,结果表明:支持将短文蛤(Meretrix petechinalis)和丽文蛤(M.lusoria)订为文蛤(M.meretrix)的同物异名的观点,建议将丽文蛤和短文蛤订为文蛤的地理亚种;支持将薄片镜蛤(Dosinia corrugata)和D.angulosa订为2个独立种的观点;认为将波纹巴非蛤(Paphia undulata)和织锦巴非蛤(P.textile)订为2个独立种是合适的.COI基因序列含有丰富的遗传信息,适合作为帘蛤科贝类种群遗传结构和系统发生研究的分子标记.     

猪心中提取和纯化辅酶Q10（联产CytC）

辅酶Ｑ１０和细胞以素Ｃ是促生物氧化酶类生化药物,本试验从猪心中提了和纯化辅酶Ｑ１０,并联产细胞以素Ｃ。猪心以酸性水液粗提,细胞色素Ｃ经人造沸石吸附,洗脱,盐析,三氯乙酸沉淀,弱酸性阳离子吸附,真空干燥得２２５ｍｇＣｙｔＣ／ｋｇ猪心,纯度７９％,提取后的猪心渣,用醇皂化法,经硅胶桂层板,无水乙醇结晶,重结晶,每千克猪心中撮辅酶Ｑ１０７５ｍｇ,含量为９５．３％。     

棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的同工酶分析

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,比较分析了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的过氧化物酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶。分析结果表明 :晋A细胞质雄性不育系与其保持系的两种同工酶有着明显的差异 ,这种差异产生的时期与其细胞形态学观察到的小孢子败育时期一致。这说明雄性不育基因调控了同工酶的形成和差异。     

秦川牛心肌细胞色素C的提取与检测

为综合开发利用秦川牛产品,进一步优化牛心肌细胞色素C提取工艺条件,试验以秦川牛心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析后测定其细胞色素C含量。结果表明,所制备的细胞色素C定性鉴别正常,比色定量测定平均收率为146.3mg/kg,优于文献报导的结果,说明采用这种方法提取牛心肌细胞色素C是可行的。     

大孔树脂对紫小麦麸皮花色苷的纯化动力学

选用4种大孔树脂(LSA-10、AB-8、NKA-Ⅱ和HP-10)对紫小麦麸皮花色苷进行吸附与解吸试验,研究了大孔树脂对紫小麦麸皮花色苷的静态吸附动力学曲线、吸附等温曲线及解吸特性。结果表明:在25℃条件下,HP-10型大孔树脂对紫小麦麸皮花色苷的吸附量、解吸量和吸附平衡常数分别为9.349 mg/g、7.523 mg/g和0.777 7,均高于其他3种树脂。经HP-10型大孔树脂纯化后,紫小麦麸皮色素的色价是纯化前的3.7倍。     

苜蓿二胺氧化酶(DAO)的分离纯化

[目的]寻求操作简单、高效的苜蓿二胺氧化酶(DAO)纯化方法。[方法]苜蓿种子黑暗培养3 d,幼苗依次经硫酸铵沉淀,葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100),DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)层析分离纯化,最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]最佳分段盐析的硫酸铵饱和度为20%~50%。经一系列层析分离后酶液比活力达84.67 U/mg,回收率为26%。经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现1个蛋白质条带,相对分子质量约为110 k Da。而在变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现2个蛋白质条带,相对分子质量约为55和40 k Da。[结论]苜蓿DAO是由2个大小不同的亚基组成的异源二聚体。     

棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ,比较分析了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的过氧化物酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶。分析结果表明 ,晋A细胞质雄性不育系与其保持系的两种同工酶有着明显的差异 ,这种差异产生的时期与其细胞形态学观察到的小孢子败育时期一致。这说明雄性不育基因调控了同工酶的形成和差异。     

Measurement of Biological Oxygen Demand （BOD） in Sewage Wastewater Using Modified Inoculums

[目的]分析4个飞蝗亚种间的系统发育关系。[方法]利用PCR扩增技术测定了西藏飞蝗（L.migratoria tibetensis）和东亚飞蝗（L.m.manilensis）细胞色素氧化酶3亚基基因序列（COⅠ1539bp、COⅡ684bp、COⅢ792bp,共计3015bp）,结合GenBank下载的亚洲飞蝗（L.m.migratoria）和非洲飞蝗（L.m.migratorioides）的细胞色素氧化酶3亚基基因序列进行综合分析。以云斑车蝗（G.marmoratus）为外群,通过邻接法、最大简约法和贝叶斯法重建4个飞蝗亚种的分子系统树。[结果]在碱基组成上,A＋T的平均含量为69.57%,4个飞蝗亚种的密码子第3位点A＋T含量最高,其中最高的是COⅠ（达87.6%）;4个飞蝗亚种中核苷酸替换主要发生在密码子第3位,COⅡ的核酸替代率最高,第2位点较为保守,替换率在5.9%～15%之间;COI的起始密码子是特殊的CCG或ACG;4个飞蝗亚种的遗传距离在0.001～0.076之间;飞蝗属中4个亚种之间的系统发育关系为东亚飞蝗和西藏飞蝗亲缘关系最近,亚洲飞蝗与东亚飞蝗、西藏飞蝗亲缘关系次之,非洲飞蝗与其余3个亚种的亲缘关系较远。[结论]该研究可为西藏飞蝗亚种地位的确定提供分子依据。     

甘薯叶多酚氧化酶的分离纯化和部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到多酚氧化酶(PPO)电泳纯制品.酶比活力为50 075.43 U/mg,纯化倍数为597.99,回收率为0.48%,相对分子质量约为6.44×104,最适pH值为6.5,最适温度为35℃,且在25~55℃内较稳定.有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇对多酚氧化酶均有一定抑制作用,其抑制作用由强到弱顺序为异丙醇、乙醇、甲醇.低浓度的抗坏血酸和亚硫酸钠对多酚氧化酶有强烈的抑制作用,柠檬酸次之,EDTA-2Na的抑制效果较弱.     

中华寿桃多酚氧化酶的特性研究

 【目的】对分离纯化后的中华寿桃果肉多酚氧化酶的酶学性质进行研究,探讨中华寿桃果肉褐变机理。【方法】以邻苯二酚为作用底物,用分光光度法在420 nm下测定不同pH、反应温度、底物浓度条件下桃果肉的多酚氧化酶（PPO）活性。【结果】中华寿桃果肉66 kD的PPO最适pH约为6.5,最适反应温度为60℃左右,该酶对温度有较强稳定性;该酶最适作用底物为绿原酸、儿茶酚和对羟基苯甲酸;FeSO4、EDTA和抗坏血酸等化合物可以抑制PPO活性,CaCl2、CuSO4和MnSO4等则起促进作用。【结论】该酶耐热能力强,适度低温、酸性条件、抗坏血酸处理等可以抑制该酶活性。     

葡萄糖氧化酶的应用进展

葡萄糖氧化酶是需氧脱氢酶,易溶于水,不溶于有机溶剂,主要与过氧化氢共同作用催化葡萄糖产生葡萄糖酸,同时消耗氧。工业生产多从黑曲霉中提取,无毒、无害,具有去除葡萄糖、脱氧、杀菌等功能,广泛应用于食品、饲料、医药、检测试纸和生物传感器等方面。本文综述了葡萄糖氧化酶的研究及其应用进展。