油梨基因组DNA的提取及RAPD分析

用改进的ＳＤＳ法提取油梨基因组ＤＮＡ,即在细胞核被裂解之前,先去除细胞质中的酚类物质和蛋白质,然后用ＳＤＳ裂解细胞核,异丙醇和乙醇沉淀ＤＮＡ,成功地从油梨叶片中提取和纯化了ＤＮＡ。以１０个油梨品种的基因组ＤＮＡ为模板,４０个随机引物进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,大部分引物可以在不同模板上扩增出条带,但仅有７个引物可以同时在１０个品种的油梨ＤＮＡ上扩增出条带;用ＲＡＰＤ结果对１０个油梨品种进行聚类分析,基本符合传统分类观点。     

剑麻DNA高效提取及RAPD反应体系优化

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点．对其基因组DNA提取方法进行研究。比较了SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果分析表明：CTAB法提取效果较佳,A260/A280为1．8左右,A260/A230大于2．0,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。后基于基因组DNA水平,对RAPD反应体系中镁离子浓度、dNTP浓度和退火温度三个重要的影响因子进行优化,得出在25μl反应液中,Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1,酶为1．0U,引物为0．1μmol·L^-1,dNTP为0．2mmol·L^-1．37℃退火温度扩增40个循环效果较佳。     

假臭草DNA提取及RAPD反应体系的优化

以假臭草叶片为材料,对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化,建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序,即在10 μL反应体系中,5 ng(/10 μL)模板DNA,1.0 μmol/L随机引物F15,150 μmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+,1.0 U Taq DNA聚合酶;扩增程序为95℃预变性4 min,95℃变性40 s,36℃退火40 s,72℃延伸1 min,10个循环,后94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,72℃     

玉米半粒种子DNA提取及RAPD分析

本试验探索了采用半粒玉米种子提取DNA并进行RAPD分析的方法，结果发现：(1)利用本试验所用方法从半粒玉米种子中提取的DNA质量好，分子量大，宪全可以用作RAPD分析。(2)RAPD分析的结果表明，仅用2个引物就在供试6份材料中表现出较好的多态性，说明RAPD用于种子纯度及品种鉴定是可行的．本文还对RAPD技术和同工酶技术进行了比较，并讨论了此方法在育种中的应用。     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

茧蜂标本基因组DNA提取及RAPD分析

对茧蜂标本总DNA的3种提取方法进行了比较试验。结果表明，改进的十六烷基三乙基溴化铵(Cetyllrirnethyl Ammonium Bromide，CTAB)法效果最好。在优化反应条件下用25个随机引物对蚜茧蜂亚科下的6种蚜茧蜂供试材料进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术分析，共得到159条带，各片段长度为200～3000bp。依据RAPD标记数据聚类分析，确定它们之间的亲缘关系，结果与传统分类的一致。     

人参基因组RAPD条件的优化

目的确定药用人参最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用人参新鲜叶为材料,研究对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用人参RAPD反应体系及程序为:在25μL反应体系中,含40ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2mmol/LdNTPs,2.5μL10×PCRBuffer,2.0UTaq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2min,第二步94℃变性1min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了人参RAPD的优化反应体系及程序。     

十里香茶基因组DNA高效提取与RAPD方法建立

本文以嫩芽和鲜叶为材料,建立了十里香茶高效、微量基因组DNA提取方法,提取的DNAOD260/280在1.7～2.0之间,DNA产率在81.8～483.5 ng/mg之间,能够满足RPAD的需要。同时建立了十里香茶RAPD分子标记方法,25μL PCR反应体系中包含:50 ng DNA模板,1.2μL引物,2.5μL 10×PCR Buffer,2.5μL 25 mMMgCl2,2μL 10 mM dNTP,14.8μL ddH2 O1,U Taq聚合酶。PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min4,0个循环后72℃延伸10 min。15个RAPD随机引物以十里香1号DNA为模板,分别扩增出1～7条带。     

彩色甜椒基因组DNA提取方法的优化

以不同颜色的甜椒为试验材料,采用CTAB法、SDS法、ROSE法和氯化苄法提取彩色甜椒基因组DNA。结果表明,CTAB法所提取DNA的质量和纯度较高,以此DNA为模板进行RAPD-PCR分析,DNA扩增效果较好,带形清晰、整齐,说明CTAB法提取的DNA较为完整,能用作RAPD-PCR模板来开展彩色甜椒分子水平的研究。     

柚基因组DNA提取方法的研究

以下河蜜柚的幼嫩叶片为材料,采用CTAB法、SDS法和SDS-CTAB法3种不同的DNA提取方法提取其基因组DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。分析结果表明,无论从得率还是DNA质量上看, SDS-CTAB法明显优于其它两种方法。     

毛细管电泳法测定槟榔多酚的组分

建立同时测定槟榔壳中6种酚类物质的高效毛细管电泳方法,研究分析不同浓度和不同pH值缓冲液对10种标准品(即:表儿茶素、儿茶素、柚皮素、芦丁、山奈素、阿魏酸、绿原酸、香豆酸、咖啡酸和没食子酸)的分离效果。结果显示,最佳电解缓冲液为0.1 mol/L、pH 9.0硼酸缓冲液,紫外检测波长为280 nm,分离电压为20 kV。该方法简便快速,能在20 min之内将10种酚类物质完全分离开,具有良好的精密度、回收率和线性关系。检测限范围为0.587 5～4.415 2μg/mL。     

石斛属植物DNA条形码序列的筛选

DNA条形码(DNA barcoding)技术是一种新的物种鉴定技术,COI序列已成功应用于动物的鉴定,但目前国际上还没有找到一个通用序列能鉴定所有植物物种。为筛选出适合于石斛属的DNA条形码序列,本文首先应用Mega 4.0软件分析了石斛属的ITS、matK、trnH-psbA、rbcL序列的特征,然后运用Wilcoxon秩和检验比较不同序列的种内和种间变异性,运用Taxon DNA软件评估这4个序列的barcoding gap。分析结果表明:ITS序列不仅种内变异和种间变异最大,而且有明显的barcoding gap,种内变异和种间变异重合较少,能较好地区分不同种类的石斛,可考虑作为石斛属DNA barcoding鉴定候选序列之一;matK、trnH-psbA和rbcL序列都不适合于石斛属DNA barcoding鉴定。在所分析的4个候选序列中,没有任何一个单一序列能完全鉴别出不同种类的石斛属植物。建议采用不同序列组合进行石斛属DNA barcoding鉴定。     

锥栗总RNA提取方法比较及LFY基因克隆

锥栗总RNA的提取质量是后期锥栗空棚分子机理研究的关键。以锥栗花序为材料,采用2种植物RNA快速提取试剂盒、改良Trizol法和改良CTAB法提取锥栗总RNA,并采用多种方法检测提取出的总RNA的质量。结果表明:采用改良CTAB法获得的总RNA可明显看到28S和18S条带,且亮度比约为2∶1,DNA基本无残留,点样孔无杂质,OD260/OD280均接近2,而OD260/OD230均超过2,经逆转录可作为模板,获得LFY基因。改良后CTAB法最合适,所得的总RNA产量高、比较纯净、完整,可用于后续的逆转录并进行基因片段的扩增。     

高粱DNA提取纯化方法的比较及RAPD反应条件的建立与优化

以高粱叶片为试材，采用4种方法提取DNA，并对这4种方法进行比较，选择高粱DNA提取纯化的最佳方法，同时对高粱RAPD反应条件进行研究，从而建立了一个适合高粱RAPD分析的最佳反应系统。     

柱花草SgSPX1基因的克隆与表达分析

磷是植物生长和发育所必需的大量元素,参与重要的代谢活动,有效磷含量低已经成为酸性土壤上限制作物生长的重要因素之一。以磷高效的柱花草基因型TPRC2001-1为材料,通过同源克隆的方法,首次克隆到柱花草编码只含有SPX结构域蛋白的基因,SgSPX1。该基因cDNA全长1 324 bp,编码292个氨基酸残基,蛋白分子量为33 ku。定量PCR分析结果表明,低磷胁迫显著促进SgSPX1在柱花草根部的表达,表明该基因的表达受到低磷胁迫的调控,该研究的结果为进一步解析柱花草适应低磷胁迫的信号网络提供候选基因。     

稻瘟病菌MGG14093基因功能的初步研究

根据之前的基因芯片分析,发现在稻瘟病菌侵染水稻的过程中,许多基因被诱导表达。MGG14093为其中一个推测为编码分泌蛋白的未知功能基因,在病菌侵染过程中该基因表达量上调2.906。利用生物信息学在线软件对该基因编码蛋白的特性进行初步分析,并通过RT-PCR扩增进一步分析该基因在稻瘟病菌侵染水稻过程中的表达动态,利用基因敲除和过量表达技术对该基因的功能进行初步研究。结果表明:该基因编码蛋白为定位于胞外的分泌蛋白,没有已知的蛋白结构域,但可能存在几处氨基酸活性位点。MGG14093基因敲除和过量表达后,对稻瘟病菌的营养生长、产孢及附着胞分化没有显著的影响,但该基因过量表达后导致病菌的致病力下降,表明该基因可能参与病菌的致病过程。本研究结果为进一步揭示MGG14093基因的生物学功能奠定了基础。