利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)

【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。     

利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)

【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21（Fibroblast growth factor-21,FGF21）,为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因（pmi）作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ（简写为p1390RⅡ）上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)“中蔬6号”,采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。     

血管内皮生长因子与胶质瘤

胶质瘤是颅内肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,占颅内肿瘤的30%～50%[1],而恶性肿瘤侵袭性生长是一个多步骤的复杂过程.肿瘤经过缓慢的无血管生长期后,进入血管形成期,使瘤体得到营养而生长,因而血管生成是实体肿瘤生长和侵袭的前提.血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)是作用最强、特异性最高的血管形成因子之一,与胶质瘤的侵袭性有密切关系.     

血管内皮生长因子C的研究进展

1989年,Gospodarowicz等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先提纯得到了一种具有强大促血管生成作用的细胞因子——血管内皮生长因子(VEGF)。至此,对VEGF的研究开始拉开帷幕并逐渐成为热点。随着分子生物学技术的发展,人们对VEGF的研究更加深入,发现了VEGF家族的新成员VEGF-、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E及胎盘生长因子(PIGF)。而其中血管内皮生长因子C(VEGF-C)又因其强大特异的淋巴管生成作用于近年来引起了人们的关注,国内外学者围绕VEGF-C及其与肿瘤的关系开展了大量的研究。下面就对VEGF-C在该领域的研究进展作一简要综述。     

血管内皮生长因子研究进展

血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)是一种由各种正常细胞或肿瘤细胞合成和分泌的糖蛋白。人类医学研究证明,VEGF有两种受体——KDR/FLK-1和FLT-1。VEGF与受体结合,具有促进血管内皮细胞的增生和提高微血管对大分子物质的通透性作用。人的VEGF 基因由8个外显子构成,主要有VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206等5个同型异构体。等电点的差异和肝素亲合力的差异可能是造成VEGF 生物活性差异的主要原因。     

血管内皮生长因子在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)的表达与宫颈癌生物学行为特征的关系。方法 :采用免疫组化法 (SP)检测 78例宫颈癌中 VEGF的表达 ,以 2 5例正常宫颈组织为对照。结果 :(1) VEGF在宫颈癌中的阳性表达率为 4 1.0 %(32 /78) ,明显高于对照组的 8.0 % (2 /2 5 ) (P<0 .0 1)。 (2 ) VEGF阳性表达率在宫颈癌临床分期≤ b期者 (18.6 % )明显低于≥ a期者 (6 8.6 % ) (P<0 .0 1) ;淋巴结无转移者 (30 .0 % )明显低于有转移者 (6 0 .7% ) (P<0 .0 5 ) ;并随病理分化程度 (高、中、低分化 )的降低 ,其阳性表达率显著升高 (P<0 .0 5 )。结论 :VEGF的表达与宫颈癌的浸润转移等生物学行为关系密切 ,在宫颈癌的发生发展过程中发挥着重要作用。     

血管内皮生长因子对缺血性脑血管病血管生成的作用研究

血管内皮生长因子是血管特异性生长因子,有促进内皮细胞增生、转移,增加血管通透性和促进血管生成的作用.阐述了血管内皮生长因子的生物学特性和功能,以及血管内皮生长因子与缺血性脑血管病的关系.     

羊膜移植抑制碱烧伤后角膜血管内皮生长因子表达的实验研究

目的探讨羊膜移植对角膜内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及角膜新生血管形成的影响,方法12只兔(24眼)被建立角膜碱烧伤动物模型,行羊膜移植的左眼为实验组,右眼为对照组,分别采用免疫组化染色检查VEGF蛋白的表达,宏观测量新生血管长度及生长速度,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况,结果与对照组比较,实验组兔眼角膜的VEGF蛋白表达下降,新生血管生长速度变慢,微血管数量减少(P＜0．01),VEGF主要表达在角膜受损区的炎性细胞胞浆内,其出现时间及位置与角膜新生血管一致,结论VEGF是一种重要的角膜内新生血管形成因子,其变化与角膜新生血管平行;羊膜移植可抑制碱烧伤角膜内VEGF的表达及角膜新生血管的形成.     

血管内皮生长因子在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其意义

目的了解血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其意义。方法应用ELISA法检测上皮性卵巢癌患者(恶性组,n=30)、卵巢良性肿瘤患者(良性组,n=30)和正常妇女(对照组,n=20)外周血中VEGF水平。结果恶性组血清VEGF水平明显高于良性组和对照组(P<0.01),良性组和对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。恶性组术前血清VEGF水平明显高于术后(P<0.01),良性组术前、术后的VEGF水平差异无统计学意义(P>0.05)。恶性组Ⅲ、Ⅳ期患者的VEGF水平高于Ⅰ、Ⅱ期,低分化G3期的VEGF水平高于高中分化G1、2期,差异有统计学意义(P<0.01)。结论检测血清VEGF水平对上皮性卵巢肿瘤的诊断及恶性上皮性肿瘤的分期、分级和预后有重要意义。     

植物基因工程疫苗高效表达载体的构建

分别将编码HIV-1的gag基因、gpl20基因及gag-gp120嵌合基因,FMDV的P1全长基因和猪白细胞介素18(ILl8)基因克隆到含CaMV35S启动子控制下的双元表达栽体pBIl21中,并通过冻融法导入农杆菌LBA4404,成功构建了能在植物中高效表达的5种植物表达载体：pBIl21gag,pBIl21gp,pBIl21gg,pBIl21P1,pBIl21IL18。     

RNAi对绵羊颗粒细胞体外培养过程VEGF 及其受体mRNA表达的影响

[目的]明确RNA干扰(RNAi)对绵羊颗粒细胞体外培养过程中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体mRNA表达的影响,为开展VEGF在绵羊卵母细胞体外成熟和胚胎发育过程中信号通路的相关研究打下基础.[方法]采用电穿孔技术将针对VEGF两个受体Flt-1和KDR/Flk-1的两条有效双链小RNA导入绵羊颗粒细胞内,利用实时荧光定量PCR检测体外培养绵羊颗粒细胞各培养时间VEGF、Flt-1和KDR/Flk-1 mRNA表达水平的变化.设定筛选出的Flt-1和KDR/Flk-1有效干扰片段分别为试验组Ⅰ和试验组Ⅱ,两个干扰片段共同作用为试验组Ⅲ,无效的干扰片段为对照组.[结果]绵羊颗粒细胞体外培养过程中,VEGF mRNA在各时间段的相对表达量是Flt-1 mRNA相对表达量的102倍、KDR/Flk-1 mRNA相对表达量的103倍;培养第1 d时,试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组ⅢVEGF mRNA相对表达量分别为2.62×10-2、3.54×10-2和2.94×10-2,均极显著高于对照组(P<0.01,下同),3个试验组的VEGF mRNA表达量从第2 d开始降低,直到第6 d与对照组趋于一致.试验组ⅡFlt-1 mRNA相对表达量从培养第1 d的1.02×10-1逐渐降至第7 d的8.99×10-4,且一直极显著高于其他组;试验组Ⅰ和试验组Ⅲ在前3 d几乎无Flt-1 mRNA表达,随着培养时间的延长逐渐呈上升趋势,第8 d时各组趋于一致.试验组Ⅰ的KDR/Flk-1 mRNA相对表达量从第1 d开始极显著低于对照组;试验组Ⅱ和试验组Ⅲ在前3 d几乎无KDR/Flk-1 mRNA相对表达,随着培养时间的延长呈上升趋势,第9 d时各组趋于一致.[结论]两个有效干扰片段在绵羊颗粒细胞体外培养过程中起到很好的干扰作用,可改变VEGF、Flt-1及KDR mRNA的表达量,进而影响颗粒细胞相关生长信号的传输.     

创伤性休克患者血清血管内皮生长因子的变化及其意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在创伤性休克发生机制中的作用。方法 :采用酶联免疫吸附 (ELISA)法 ,测定创伤性休克患者 43例 (创伤休克组 )、创伤非休克者 40例 (创伤非休克组 )及正常对照 30例 (对照组 )血清中 VEGF的水平。结果 :(1 )与正常组的(1 2 .32± 4.1 8) ng/ L相比 ,创伤非休克组及创伤性休克组 VEGF水平明显上升 ,分别为 (67.35± 2 5.2 2 ) ng/ L、(1 53.41± 2 8.1 8) ng/ L,差异均有极显著性 (P<0 .0 1 )。(2 )创伤性休克组 VEGF水平明显高于创伤非休克组 (P<0 .0 1 )。(3)随创伤休克的病情加重 ,VEGF水平呈逐渐升高趋势 (P<0 .0 1 )。结论 :创伤后 VEGF水平明显升高可能是创伤性休克发病机制中的一个重要因素。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响

为了研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%(P<0.01),成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%(P>0.05),5 ng/mL添加组的桑葚胚率(45.45%)和囊胚率(30.06%)极显著(P<0.01)高于对照组(37.61%;23.65%);而10 ng/mL添加组的桑葚胚率(40.25%)和囊胚率(27.80%)低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显著.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.     

创伤性休克患者血清一氧化氮及血管内皮生长因子含量变化及其相互关系

目的：探讨创伤性休克患者血清一氧化氮(NO)与血管内皮生长因子(VEGF)的含量变化及其相互关系。方法：采用比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)同步测定创伤性休克患者43例(创伤性休克组)及正常对照30例(对照组)外周血中NO及VEGF含量。结果：(1)创伤性休克组血清NO及VEGF水平明显高于对照组(P均＜0．01)；(2)NO及VEGF含量随休克程度的加重而逐渐升高，差异均有显著意义(P均＜0．01)，且因创伤性休克死亡者的NO及VEGF浓度明显高于存活者(P均＜0．01)；(3)创伤性休克患者血清NO含量与VEGF含量呈显著正相关(r＝0．785，P＜0．01)。结论：NO和VEGF均参与了创伤性休克的发生发展病理过程，并与休克程度相关。检测NO及VEGF对判断创伤性休克的严重程度与估计其预后有一定的参考价值。     

Syk和VEGF在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察脾酪氨酸激酶（Syk）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中的表达情况,分析它们与胃癌病理临床特征之间的关系。方法应用免疫组化法检测100例胃癌患者手术切除的癌组织和癌周正常组织中Syk和VEGF表达水平。结果Syk在正常胃组织中表达率为100．0％（100／100）,在胃癌组织中的表达率为40．0％（40／100）;VEGF在正常胃组织中表达率为0．0％（0／100）,在胃癌组织中的表达率为50．0％（50／100）,两者比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Syk蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）,VEGF蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论同时检测胃癌组织中Syk与VEGF表达水平,对判断胃癌浸润转移潜能及评估患者预后有一定的参考价值。