猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

缺帘鱼精子超低温保存的初步研究

筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%.     

液氮保藏菌种对平菇菌丝体和子实体的影响

以皖平菇1号为试验材料,对菌种液氮保藏过程中的降温方式、保护剂、解冻3个关键环节设计三因素三水平正交试验.结果表明,正交试验9个不同的处理中对菌种萌发率影响最小的条件处理组合为不加保护剂直接放入液氮,38 ～40℃水浴解冻;对菌丝生长速度影响最小的处理组合为-70℃-液氮逐步降温,10％的二甲基亚砜作保护剂,38 ～ 40℃水浴解冻;对子实体平均产量影响最小的处理组合为4℃--20℃--70℃分别放置2h的逐步降温法,10％的蔗糖水溶液作保护剂,38 ～ 40℃水浴解冻.保护剂和解冻方式的选择对菌种影响较大,结合成本等其他因素综合考虑,不加保护剂直接将菌种放入液氮,38 ～ 40℃水浴快速解冻的处理方式为最佳选择.     

安哥拉山羊胚胎冷冻试验

对安哥拉山羊用总量350IUFSH按递减法处理,配种结束后第6天经子宫手术回收桑椹胚和囊胚供冷冻试验.选用1.4mol/L甘油、1.2mol/L和1.5mol/L乙二醇做防冻保护剂,快速冷冻,-36℃投入液氮保存.采用直接水浴或在空气中停留6～10s使胚胎温度回升,再水浴解冻.胚胎解冻后,用0.5mol/L蔗糖PBSS脱除保护剂,移入2%PBSS中,手术移植于发情后6d的适移受体.结果表明,1.5mol/L乙二醇具有良好的冷冻保护作用.在18～20℃空气中使胚胎温度稍回升,再水浴解冻,可降低胚胎解冻过程中热应激导致的透明带破损,移植于适移受体的妊娠率达45.5%.     

波尔山羊胚胎冷冻和移植试验

用含1．5M乙二醇,0．1M蔗糖、20％NCS(V／V)的PBS液,或含1．5M乙二醇,20％NCS的PBS为冷冻保护液,将42枚A级胚胎(致密桑葚胚16枚,早期囊胚26枚)一并移入冷冻保护液,并进行快速冷冻,在降温至-36℃时将胚胎投入液氮保存。解冻时,胚胎细管先在室温(20～22℃)空气中停留15s后进入水浴快速解冻,解冻后一步除去保护剂,移入含20％NCS的PBS液中保存,手术移植入受体子宫角内。结果表明,解冻后形态质量完好的A级冻胚达88,1％(37／42),移植受体妊娠率达42,9％,说明本试验采用的胚胎冷冻-解冻程序,能有效地进行波尔山羊致密桑葚胚和囊胚的冷冻保存。     

卷叶贝母愈伤组织超低温保存关键技术研究

[目的]建立一套完整、快速和经济的卷叶贝母超低温保存关键技术。[方法]对卷叶贝母愈伤组织超低温保存技术中的预培养时间、保护剂类型和解冻方式进行了研究。[结果]预培养时间、冷冻保护剂类型和解冻方式均是影响卷叶贝母愈伤组织冷冻保存过程中的关键因素。经预培养9 d、由10%二甲基亚砜和0.5 mol/L山梨醇组合的复合冷冻保护剂冷冻、在40℃水浴条件下解冻的卷叶贝母愈伤组织其保存效果最佳,保存后细胞的存活率可达87.39%。[结论]为更好地保护卷叶贝母种质资源提供了参考。     

华北落叶松胚性组织超低温保存技术研究

  目的  超低温保存是植物优良种质长期保存的重要方法。本文为探究梯度预处理对超低温保存存活率的影响，以期有效保存华北落叶松胚性组织的发育潜能。  方法  本研究以华北落叶松胚性组织为材料，对超低温冷冻保存程序中预培养、冷冻处理方式、解冻方式和恢复培养等关键环节开展研究。预培养和冷冻保护共设计成4种处理，以不经过预培养和冷冻保护直接冷冻保存为对照，每个处理重复3次。  结果  结果表明:处理组合1、2、3之间虽无显著差异，但结合冷冻保护剂二甲基亚砜（ DMSO）对细胞具有一定毒害作用，高浓度的DMSO会影响后续胚性组织的恢复甚至造成细胞死亡，因此选出效果较好的超低温保存方法为: 0.2、0.4 mol/L山梨醇液体梯度预处理与0.4 mol/L山梨醇 + 5%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保护，最佳解冻方式为37 ℃水浴，解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达78%；超低温保存后的胚性组织与正常增殖的胚性组织在外观及显微结构上无明显差异，且低温保存后的愈伤组织仍保持分化形成体细胞胚的能力。  结论  研究结果为华北落叶松乃至其他针叶树胚性组织的超低温保存提供了参考。      

超低温保存下东北红豆杉种子的活力

为建立东北红豆杉种质资源保存体系及种质资源库的建立提供科学依据,采用 TTC法对经过超低温保存的种子进行活力测定,比较了4种不同处理对种子生活力的影响。结果表明,超低温可以应用于东北红豆杉种子的贮藏,解冻方式是影响东北红豆杉种子超低温贮藏的重要因素,DMSO 的保护作用不明显,保存效果较好的解冻方式为快速解冻。     

中华蜜蜂精液的冷冻贮存技术(英文)

中华蜜蜂精液在液氮（－ １９６ ℃） 中贮存１２１ ｄ,精液与含有８％ 二甲亚砜的三羟基氨基甲烷缓冲稀释液以１∶１．５ 混合,不用平衡,在广口保温瓶中距液氮面２ ｃｍ 或５ ｃｍ 处预冻,在３５～３９ ℃水浴中解冻,可产生较好的解冻后活力比率（超过６０％ ）．当室温高于２０ ℃时（４ 月份）,样本必须于１３ ℃下平衡０．５ ｈ 左右,其解冻后活力比率可达３０％ ．春季采集并冷冻的样本,其解冻后活力不如冬季采集并冷冻的．用在液氮中贮存了１～１２１ ｄ 的精液分别以 ４～５ μ Ｌ的剂量给 ２４ 只处女王人工授精,４ 只开产但首先产的不是受精卵．解冻后的精液能够于１３ ℃下保存４６ ｈ．磺胺不能用于精子冷冻．     

湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

低温超低温对棉花花粉活力的影响

通过使用联苯胺-甲萘酚染色法测定4、-20和-80℃下棉花花粉活力,研究低温对花粉活力的影响,结果表明:离体花粉在4和-20℃的条件下1～3 d内花粉活力变化没显著差异.在-80℃下,花粉活力受到低温预处理和蔗糖溶液浓度(用作冷冻保护剂)的交互作用影响.并且低温预处理后的花粉活力维持在较高水平.同时,没有添加冷冻保护剂的花粉活力与使用30;和20;浓度的冷冻保护剂之间并没有显著差异.在化冻方式上,37℃的水浴中化冻效果最好.     

库车小白杏的组织培养及玻璃化法超低温保存试验初探

[目的]采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存.超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定.[方法]以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择.[结果]选择MS +0.5NAA +0.2 6 -BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择MS +0.1 NAA +0.1 6- BA +0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根.[结论]用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度- 30℃、玻璃化液保护剂脱水60 min、40℃水浴5 min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高.     

黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

四唑染色法测定木豆种子生活力的研究

试验研究TTC浓度、染色温度和染色时间对木豆种子生活力的影响,探寻木豆种子生活力测定的最佳条件。结果表明:TTC法能够很好地检测木豆种子生活力,可用来估测种子的潜在发芽能力。30℃下浸种40 min后,置于40～50℃黑暗条件下、TTC浓度1.0%、染色40～60 min为木豆种子生活力测定的最佳条件,TTC浓度和染色时间在生活力测定中呈一定的线性关系。     

杏花粉活力测定培养基筛选及耐贮性研究

[目的]以固体琼脂培养基离体培养‘大黄杏’品种花粉,比较不同浓度蔗糖、硼酸对花粉离体萌发的影响.[方法]用筛选出的最适培养基测定三种贮藏温度条件下花粉活力变化.[结果]‘大黄杏’品种最适萌发培养基为:l5;蔗糖+0.01;硼酸+1;琼脂;干燥密闭条件下,为期1年贮藏于三种温度条件下花粉活力大小依次均为:-18℃＞4～5℃＞室温,活力下降幅度由大到小则依次均为:室温＞4 ～5℃＞- 18℃.[结论]花粉于-18℃贮藏后1年活力仍达30.00;,4～5℃在贮后第11个月丧失活力,而在室温下贮藏3个月花粉即失去活力.     

喀斯特地区茶条木种子萌发及生态适应性

【目的】探讨野生茶条木种子在喀斯特地区的萌发及其生态适应性,为喀斯特地区生态恢复与重建提供参考依据。【方法】采用直播法,结合室内试验和野外试验,观察温度和土壤含水量对茶条木种子萌发和幼苗出土的影响。【结果】茶条木种子的平均大小为12.62 mm×12.23 mm,百粒重约83.69 g,含水量22.28%,种子活力高达（96.66±3.06）%;在12 h光照条件下,夜昼变温为5/15℃时种子不萌发,变温为25/35℃时种子萌发率达最大值（66.88±1.48）%;细沙含水量为土壤饱和相对持水量的30%～40%时,种子萌发率最高,为（23.00±1.58）%,土壤含水量太高反而对种子的萌发不利。【结论】茶条木种子对喀斯特地区微生境具有高度的生态适应性,在茶条木人工造林中,采用室内种子的夜昼变温处理,再以幼苗直播方式造林有利于提高萌发率。     

淡黄花百合种子生物学特性及萌发特性测定

【目的】测定淡黄花百合种子的基本特性及萌发所需的基本条件,以期为淡黄花百合的开发利用奠定基础。【方法】用游标卡尺法、目测法及百粒重法等测定淡黄花百合种子的生物学特性,并设置不同温度（15、20、25、30℃）及化学药剂浸种（0.3% KMnO4溶液、0.1% KH2PO4溶液、10% NaClO溶液、清水）对其种子萌发的影响。【结果】淡黄花百合种子大多为卵形,淡黄色,千粒重6.7 g,平均含水量15%,吸水量0.32 g/g;在25℃时种子的各萌发特征最好;清水浸种处理种子的萌发率最高,为100.0%,10% NaClO浸种处理种子的萌发率最低,为86.7%。【结论】淡黄花百合种子萌发对温度敏感,25℃为最适温度;淡黄花百合种子对3种药剂不敏感,在育苗时无需使用任何特殊化学药剂处理。     

四唑染色法测定厚朴种子生活力的条件研究

[目的]探讨厚朴种子生活力的快速测定方法。[方法]采用四唑染色法(TTC法),设置不同的TTC浓度、染色温度和时间,研究厚朴种子生活力测定的适宜条件。[结果]TTC法测定厚朴种子生活力的适宜条件为:采用浓度0.2%的TTC溶液,在55℃的水浴中染色50 min。[结论]该法可作为厚朴种子生活力测定的有效方法。