三唑磷对麦穗鱼脑组织中乙酰胆碱酯酶的诱导

为了检测有机磷杀虫剂对鱼脑组织中乙酰胆碱酯酶(AChE, EC 3.1.1.7)的诱导,采用间接非竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测了三唑磷胁迫下麦穗鱼Pseudorasbora parva脑组织中乙酰胆碱酯酶含量的变化。当暴露浓度仅为0.1 μg /L时,三唑磷即对AChE产生诱导。由于存在诱导效应,三唑磷对酶活性的抑制在一定程度上被酶蛋白含量的提高所掩盖。研究结果表明,以酶蛋白替代总蛋白来衡量粗酶液中AChE的活性,可以明显提高对有机磷胁迫作用的检测灵敏度。     

麦穗鱼脑AChE间接非竞争ELISA定量分析法的建立

用PEG2000双水相萃取、 DEAE-Sephadex A-50和Sephadex G-200方法分离纯化麦穗鱼Pseudorasbora parva脑中的乙酰胆碱酯酶(AChE), 并制备了兔抗麦穗鱼脑AChE抗血清。用兔抗麦穗鱼脑AChE抗体连接抗原, 建立了定量分析麦穗鱼脑AChE的间接非竞争酶联免疫吸附法(Indirect and non-competitive ELISA), 此法操作简便、灵敏度高, 适用于定量检测。该方法的建立有利于AChE在环境科学和农药学研究领域的进一步研究和应用。     

线虫乙酰胆碱酯酶研究进展

线虫乙酰胆碱酯酶(AChE)以多种不同的分子型存在并由不同的基因所编码。本综述简述了线虫AChE的药理学特性、分子型以及相关ace基因的结构、分布和功能。     

甲酸乙酯对米象乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的影响

报道了甲酸乙酯对米象[Sitophilus oryzae(Linnaeus)]乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)的活性影响,甲酸乙酯对米象表现出很高的毒力,25℃下熏蒸处理24 h的LC₅₀为28.65μL/L。亚致死剂量的甲酸乙酯可以使米象成虫体内AChE的比活力显著下降,用20μL/L的浓度处理24 h,AChE的比活力由15.684 nmol/mg.min下降至9.530 nmol/mg.min;酶动力学研究表明,甲酸乙酯可使米象成虫体内AChE的K_m值明显增加。对于羧酸酯酶,在活体条件下表现为先抑制后激活的规律,离体条件下则主要表现为抑制作用,且随着药剂浓度的增大抑制率也增大。     

乙酰胆碱酯酶的晶体结构及功能位点

乙酰胆碱酯酶晶体结构研究表明 ,ACh E存在一个深而窄的谷 ,谷底部有一个活性位点 ,它是由催化三联体和所谓的阴离子亚位点组成。阴离子亚位点识别底物的四价铵基团 ;由 Glu32 7、His4 4 0和 Ser2 0 0构成的催化三联体负责底物乙酰胆碱的水解。在谷的入口处 ,有一个调节位点被称为外周阴离子位点 ,残基 Trp84和 Trp2 79分别在催化和外周的阴离子位点起关键作用。朝着谷底部方向存在一个强的静电偶极子 ,该偶极子对阳离子产物胆碱的清除是非常不利的 ,并与酶的高催化效率形成明显对照。位于催化口袋底部的后门开放为产物释放提供了另一种途径 ,但对后门学说的争论仍然十分激烈。X-衍射晶体学与化学修饰研究有助于阐明配基结合活性中心谷特异性的分子基础。位点特异性突变分析在确定氨基酸残基参与乙酰胆碱酯酶空间结构或催化功能中起着非常重要的作用。     

棉铃虫不同龄期幼虫羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶、乙酰胆碱酯酶研究

作者报道了棉铃虫抗性种群(HJ-R)和相对敏感种群(HD-S)幼虫4个发育阶段羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶、乙酰胆碱酯酶的特性。随虫龄的增长,两个种群单头幼虫羧酸酯酶、谷胱甘肽转移酶的酶活力急剧增长;HJ-R种群与HD-S种群谷胱甘肽转移酶酶活力比值逐渐增大。HJ-R与HD-S种群间乙酰胆碱酯酶对杀虫剂的敏感性没有显著差异,但两种群幼虫从4日龄发育到3龄时,乙酰胆碱酯酶发生突变,对杀虫剂的敏感性显著降低。     

杀虫药剂混用对棉铃虫乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的联合抑制作用研究

选用辛硫磷、对硫磷、敌敌畏和氧乐果4种有机磷类杀虫剂以及灭多威和甲萘威两种氨基甲酸酯类杀虫剂分别以1∶1、1∶3和3∶1的比例混用,以棉铃虫Helicoverpa armigera为试虫,分别测得单剂和混剂对其乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)的抑制中浓度(I50),以联合抑制系数作为增效作用的参考指标进行了比较。研究发现,两种药剂不同配比的混剂对同种酯酶的联合抑制作用也往往不同。对AChE和CarE同时具有抑制作用的只有其中的对硫磷＋甲萘威(1∶3)、辛硫磷+对硫磷(1∶3)和灭多威+氧乐果(1∶3),而甲萘威+敌敌畏(1∶3)、甲萘威＋氧乐果(1∶1)、辛硫磷+甲萘威(1∶1)、对硫磷+氧乐果(1∶1)、对硫磷+氧乐果(1∶3)、敌敌畏+氧乐果(1∶3)、灭多威+对硫磷(1∶1) 7种混剂对AChE和CarE都具有拮抗作用。     

寄主植物对棉蚜乙酰胆碱酯酶的影响

通过生物测定和生化分析研究了5种不同寄主植物上的棉蚜种群对灭多威的敏感性，乙酰胆碱酯酶（AChE)活性及灭多威对AChE的抑制作用，结果发现，取食石榴和花椒的棉蚜AChE活性最高，是冬青上棉蚜（最低）的2．00倍和3．33倍，说明寄主植物可以影响棉蚜AChE的活性，灭多威对不同寄主植物上的棉蚜个体的AChE进行抑制后，发现棉花和冬青上的棉蚜种群中AChE对灭多威不敏感的棉蚜个体多于花椒，木槿和石榴上的棉蚜种群，这与棉花及冬青上的棉蚜对灭多威耐药性较其它三种强的趋势近似，表明AChE敏感度的降低是棉蚜对灭多威产生抗药性的原因之一。     

不同种群小菜蛾乙酰胆碱酯酶性质研究

小菜蛾乙酰胆碱酯酶(AChE)的性质研究表明,不同种群小菜蛾成虫与幼虫AChE活性相比,差异极显著,成虫是幼虫的5～7倍;武汉种群小菜蛾成虫和幼虫AChE与底物的亲和力最小。小菜蛾谷胱甘肽鄄S鄄转移酶(GST)的性质研究表明,宣化、武汉、云南3个田间种群GST活性较高,明显高于台湾敏感品系;北京种群GST活性较低,与台湾敏感品系近似。此研究为进一步分析小菜蛾不同种群、不同虫态抗药性差异提供了依据。     

苏云金杆菌预处理对棉铃虫乙酰胆碱酯酶的影响

用苏云金杆菌（Ｂｔ）预处理２４ｈ后,棉铃虫幼体内乙酰胆碱酯酶对特异性酶抑制剂的亲和力发生了变化,在抗性品系中,幼虫的乙酰胆碱酯酶的酶动力学值和抑制中浓度均低于未处理对照幼虫,双分子速率常数则高于未处理对照幼虫,单位时间内抑制作用加快,差异显著,说明Ｂｔ预处理可能改变或激活子抗性幼虫乙酰胆碱酯的活化中心,因而增加了其幼虫乙酰胆碱酯酶与抑制剂的亲和力,由此推论,乙酰胆碱酯酶的改变是Ｂｔ预处理棉铃虫幼由     

不同防治田内不同发育期拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶及羧酸酯酶的活性比较

利用紫外分光光度法研究了生物防治田和化学防治田内不同发育期拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata乙酰胆碱酯酶(AChE)和羧酸酯酶(CarE)的活性特征。结果表明,化防田拟环纹豹蛛各发育时期AChE活性均较生防田中的低,其各发育期AChE的Km值也均明显高于生防田种群。从整个发育期来看,幼体的AChE活性最高,卵囊的最低,说明不同发育阶段AChE活性存在较大差异。而CarE的活性正相反,化防田种群卵囊、幼蛛、雌成蛛和雄成蛛的CarE活性均高于相应生防田种群,且幼蛛的CarE活性高于相应成蛛,生防田种群每一发育阶段CarE的Km值也均高于相应的化防田种群。表明化防田中的拟环纹豹蛛有可能对部分农药产生了一定程度的抗药性。     

羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶在褐飞虱对甲胺磷抗性发展中的作用

室内抗药性筛选表明,褐飞虱对甲胺磷的抗性呈"快-慢-快"的发展趋势:第1到第4代抗性上升缓慢;第5代到第15代迅速上升,其中又呈现2个发展阶段,以第9代为拐点;第15代后抗性上升变慢。羧酸酯酶在抗药性上升中可能起到十分重要的作用,与LD50变化存在很高的相关性,达到极显著水平,相关系数为0.990 6。乙酰胆碱酯酶不敏感性在抗性发展后期变化很大,第8代到第16代间,与LD50变化存在极显著相关性,相关系数为0.970 1。由此可见,羧酸酯酶可能在褐飞虱对甲胺磷抗性的持续发展中起十分重要的作用,而乙酰胆碱酯酶不敏感性在抗性发展的后期阶段可能起到很重要作用。     

氟铃脲与三唑磷混用防治稻纵卷叶螟效果及应用技术研究

田间试验结果表明,氟铃脲与三唑磷混用防治稻纵卷叶螟效果显著,同一配方对不同龄期纵卷叶螟防效比较进行了田间试验研究,结果表明,每666.7m2用5%氟铃脲乳油20mL 20%三唑磷乳油60mL对稻纵卷叶螟4龄以下幼虫的保叶和治虫效果均在95%以上,优于5%氟铃脲乳油和20%三唑磷乳油单用的效果,两者混用具有较好的推广应用前景。     

Biochemical and molecular characterisation of acetylcholinesterase in four field populations of Bactrocera dorsalis (Hendel) (Diptera: Tephritidae)

BACKGROUND: The oriental fruit fly, Bactrocera dorsalis, is a major pest that infects fruits and agricultural products worldwide. The latest resistance monitoring of B. dorsalis from mainland China has identified high levels of resistance to insecticides. In this study, the biochemical and molecular characteristics of acetylcholinesterase (AChE) in four field populations of B. dorsalis are investigated. RESULTS: Among the four populations, the DG population and its purified AChE were found to be the least susceptible to malathion and five inhibitors, whereas the KM population and its purified AChE were the most susceptible. The highest catalytic activity of purified AChE was found for the KM population, and the catalytic activity of the DG population was the lowest. Among developmental stages, the AChE purified from larvae was found to be the most insusceptible to inhibitors, but its catalytic activity was the highest. Sequence analysis of the cDNA encoding AChE showed that some residue differences existed. However, no significant differences in expression levels of the AChE gene among populations and developmental stages were detected. CONCLUSION: The results suggest that the decrease in susceptibility of B. dorsalis was mainly caused by decrease in AChE activity, and they provide a broad view on the relation between AChE and resistance. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

Toxicological and biochemical characterizations of AChE in Liposcelis bostrychophila Badonnel (Psocoptera: Liposcelididae)

The toxicological and biochemical characteristics of acetylcholinesterases (AChE) in the resistant and susceptible strains (SS) of Liposcelis bostrychophila were investigated. The two resistant strains were the dichlorvos-resistant strain (DDVP-R) and the phosphine-resistant strain (PH₃-R) with resistance ratios of 22.36 and 4.51, respectively. Compared to their susceptible counterpart, the AChE activity per insect and the specific activity of AChE in DDVP-R and PH₃-R were significantly higher. There were also significant kinetic differences between DDVP-R and PH₃-R. The apparent Michaelis-Menten constant (K_m) for acetylthiocholine iodide (ATChI) was obviously lower in SS than that in PH₃-R, indicating a higher affinity to the substrate ATChI in the susceptible strains. The affinity for the substrate ATChI in DDVP-R and SS were not significantly different. The V_max value of the PH₃-R was significantly greater when compared to the V_max for the SS suggesting a possible over expression of AChE in this resistant strain. The inhibition of AChE to insecticide exposure in vitro revealed that all six insecticides were inhibitory for the extracted AChE’s. Based on the I₅₀ values, AChE of the SS were more sensitive to dichlorvos, paraoxon-ethyl, malaoxon and demeton-S-methyl than those of the two resistant strains. As for carbaryl and eserine, the PH₃-R suggested a significantly higher I₅₀s compared to the susceptible strain, while, no significant differences were found between SS and DDVP-R.     

Cry8E亚致死浓度对马铃薯甲虫解毒酶和保护酶的影响

苏云金芽胞杆菌Cry8E杀虫晶体蛋白对马铃薯甲虫具有中等毒性,用亚致死剂量9和7μg/m L的Cry8E分别饲喂2、3和4龄的马铃薯甲虫幼虫,然后测定羧酸酯酶(Car E)、乙酰胆碱酯酶(ACh E)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性。β-羧酸酯酶的活性随Cry8E浓度的升高明显提高,随龄期增长活性降低,酶活性在浓度间和龄期间差异都极显著。谷胱甘肽-S-转移酶活性下降,2龄幼虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性明显升高,并且随龄期变化差异显著(P0.01)。3龄幼虫体内的CAT酶活性随Cry8E浓度的增加而显著升高(P0.01)。本研究阐明了Cry8E对马铃薯甲虫解毒酶和保护酶活性的影响,为理论研究奠定基础。     

稻瘟病菌66 kDa糖蛋白激发子的纯化及性质研究

 采用离心、超滤、柱层析等方法对稻瘟病菌(Magnaporthe grisca) ZC₁₃菌株97-151a细胞壁来源的水溶性糖蛋白激发子进行了纯化;经SDS-PAGE检测,GP66达到电泳纯;凝胶过滤法及SDS-PAGE测定表明,GP66分子量为64~66 kDa;经蒽酮-硫酸法检测,糖/蛋白比例为3.84;可诱导水稻叶片过氧化物酶与苯丙氨酸解氨酶活性升高。经热、胰蛋白酶和过碘酸钠处理后的生物活性检测结果表明,GP66的活性位点为糖基部分。