哈萨克马和焉耆马不同组织中IGFBP-5基因表达差异研究

试验旨在探求胰岛素样生长因子结合蛋白-5（insulin-like growth factor binding protein-5,IGFBP-5）基因在哈萨克马和焉耆马不同组织部位中的mRNA表达规律。采用实时荧光定量PCR技术检测在哈萨克马和焉耆马心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠、肋间肌、背最长肌、臂肌和臀肌等不同组织中IGFBP-5基因mRNA表达量,同时比较该基因在哈萨克马和焉耆马相同组织中的表达差异。结果表明,哈萨克马和焉耆马表达量最高的均为背最长肌,其次是臂肌,并显著高于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠等内脏组织表达量（P<0.05）,大肠中的表达量最低;焉耆马的肾脏、小肠、大肠、盲肠、背最长肌和臂肌中表达量高于哈萨克马相同部位的表达量,其中焉耆马背最长肌和大肠中的表达量极显著高于哈萨克马的相同部位（P<0.01）,小肠和盲肠中的表达量显著高于哈萨克马的相同部位（P<0.05）。本试验为深入研究IGFBP-5基因的生物学功能,以及对中国马生产性能的遗传改良提供理论依据。     

荧光定量分析猪睾丸组织中miR-34b的表达规律

运用荧光定量分析方法检测军牧1号白猪不同发育阶段睾丸组织miRNA-34b的表达量差异,结果:miRNA-34b在3月龄前的表达量都非常低,从5月龄开始表达量呈明显上升,7月龄达到峰值后开始明显下降.在猪的发育过程中,miRNA-34b的表达趋势曲线呈先增后降.结果表明miRNA 34b可能与猪雄性生殖发育相关.     

黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达水平

Boule基因是DAZ家族成员之一,在生殖细胞中特异表达是精子发生过程中减数分裂的关键调控因子,其表达缺乏可引起减数分裂阻滞和精子生成障碍,导致雄性不育。为揭示Boule基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育关系,本研究利用实时荧光定量PCR法,对黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达进行定量分析。结果表明:Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平相对都比较高,黄牛与牦牛差异不显著(P>0.05);而Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平显著高于犏牛,黄牛、牦牛与犏牛差异显著(P<0.05)。结果提示,Boule基因在犏牛睾丸组织中低表达与犏牛雄性不育相关,可作为研究犏牛雄性不育的重要候选基因。     

不同发育阶段家蚕体内抗坏血酸含量的变化

抗坏血酸又称维生素C(Vc),是家蚕幼虫生长发育必需的营养物质。为探讨在非取食阶段家蚕体内还原型抗坏血酸(AsA)的来源,采用分光光度法测定家蚕在不同发育时期以及不同条件下体内的AsA含量和总抗坏血酸(TAA)含量变化,并采用实时荧光定量PCR检测AsA合成相关酶基因在家蚕不同发育阶段的表达量变化。滞育卵中AsA含量在产卵24 h内,TAA含量在产卵72 h内均有所增加,此后二者的含量均不同程度降低并一直保持相对稳定;即时浸酸解除滞育蚕卵的AsA含量在产卵24 h内显著增加,且在产卵48~144 h一直保持较高水平,到胚胎发育后期又明显下降,但AsA含量一直高于滞育卵。幼虫期取食桑叶或添加Vc的人工饲料之后,蚕体内AsA和TAA含量均增加,幼虫在眠中或取食缺乏Vc的人工饲料及饥饿一定时间后,体内的AsA和TAA含量均明显降低,尤其是饥饿后体内的AsA含量会下降到很低的水平。蛹期的TAA含量无显著变化,但雌蛹体内AsA含量在化蛹0~24 h显著升高,雄蛹体内AsA含量在化蛹0~144 h一直保持较高水平,到蛹后期才有较为明显的下降。编码AsA合成相关酶的4个同源基因BmG ULO_like1、BmG ULO_like2、BmA Lase_like1、BmA Lase_like2在中肠和脂肪体中的表达量总体上都是卵期及蛹期显著高于幼虫期,并且随卵和蛹的发育进程呈上升趋势。研究结果提示,家蚕胚胎发育期和蛹期的AsA来源途径,可能包括自身合成途径及由氧化型抗坏血酸(DHA)还原为AsA的途径,而在幼虫期主要从食物中吸收Vc,缺乏其他来源。     

miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响

为研究miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响,试验首先对miRNA-27b-3p的靶基因进行预测,然后将miRNA-27b-3p和阴性对照分别转染猪脂肪前体细胞,使用qRT-PCR和ELISA试剂盒检测靶基因在24、48 h转录水平和翻译水平的表达量;甘油三酯检测试剂盒检测脂肪前体细胞中甘油三酯的含量。预测结果显示,miRNA-27b-3p靶向调控影响脂肪沉积的关键基因LPL(脂蛋白酯酶基因);qRT-PCR结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL基因的表达量极显著下调(P<0.01),而转染48 h无明显差异;ELISA结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达量显著下调(P<0.05),转染48 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达受到极显著抑制(P<0.01);甘油三酯检测结果显示,猪脂肪前体细胞中的甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。结论：miRNA-27b-3p可以靶向调控LPL基因的表达,抑制猪脂肪前体细胞的分化。     

Study on Expression Difference of IGFBP-5 Gene in Different Tissues of Kazakh and Yanqi Horses

The study aimed to explore the mRNA expression pattern of insulin-like growth factor binding protein-5 (IGFBP-5) gene in different tissues of Kazakh and Yanqi horses.The expression of IGFBP-5 gene in different tissues of heart,liver,spleen,lung,kidney,small intestine,large intestine,cecum,intercostal muscles,longissimus dorsi muscles,brachialis muscle and gluteus in two horses were detected by Real-time quantitative PCR and compared the mRNA expression in the same tissues of two breeds.The results showed that the expression of IGFBP-5 in longissimus dorsi muscle and brachialis muscle of two breeds were significantly higher than other tissues including heart,liver,spleen,lung,kidney,small intestine,large intestine and cecum (P<0.05),and was the lowest in large intestine.The expression of IGFBP-5 in kidney,small intestine,large intestine,cecum,longissimus dorsi muscle and brachialis muscles of Yanqi horse were higher than in the same part of Kazakh horse,and among those in longissimus dorsi muscle and large intestine of Yanqi horse were extremely significantly higher than in the same part of Kazakh horse (P<0.01),and in small intestine and cecum of Yanqi horse were significantly higher than in the same part of Kazakh horse (P<0.05).The test was for further researching the biological function of IGFBP-5 gene,and it could provide a theoretical basis for genetic improvement of production performance of horse in our country.     

产苦马豆素疯草内生真菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据疯草内生真菌苦马豆素合成基因簇中swn K 基因KS 区域设计引物,构建SYGR Green I实时荧光定量PCR检测方法,初步分析黄花棘豆植物样品中内生真菌生物量与苦马豆素含量的关系.结果表明,基于swnK基因KS区域构建的实时荧光定量PCR法特异性较好,灵敏性较高,当真菌起始DNA浓度在0.009?90ng/μ...     

不同年龄哈萨克马血常规及生化指标的差异分析

文章旨在探究不同年龄哈萨克马血常规及生化指标的影响。试验选择不同年龄组且健康的哈萨克马母马各4匹,分别为2周岁马组、7周岁马组和15周岁马组,所有马匹均采食相同的基础饲粮,在此基础上,每天每匹马匹添加30 mg/kgBW的电解多维,自由饮水,饲喂1个月后,在试验最后1天早晨采集马匹血液样品,处理后测定。结果表明,2岁马组与7岁、15岁马组白细胞数、淋巴细胞数、单核细胞数差异显著（P <0.05）,2岁马组与15岁马组差异显著（P <0.05）,7岁马组红细胞数与2岁、15岁马组无显著性差异（P> 0.05）,7岁、15岁组马平均红细胞体积显著高于2岁马组（P <0.05）,2岁、7岁、15岁各组间平均红细胞血红蛋白含量差异显著（P <0.05）,2岁马组与15岁马组血小板分布宽度差异显著（P <0.05）,7岁马组红细胞数与2岁、15岁马组无显著性差异（P> 0.05）。其他各项无显著差异（P> 0.05）。青年马生长代谢活动强,具有较强的抗病能力,蛋白代谢水平优于中年和老年马匹。     

马疱疹病毒8型荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

马疱疹病毒8型(EHV-8)是近年来在规模化养驴场发现的一种病毒,其主要导致马属动物呼吸困难、繁殖障碍(流产、产弱驹等),严重危害养驴业的健康发展。为建立EHV-8的分子生物学检测方法,用于该病原感染的流行病学调查和致病机制研究,根据NCBI数据库中EHV-8参考毒株ORF70基因序列的高度保守区域,设计特异性引物,优化程序,建立检测EHV-8的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法灵敏度高,最小检测浓度为100拷贝/μL,灵敏度是常规PCR的100倍;特异性强,与EHV-1、EHV-4均无交叉反应;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.15%～0.83%和0.06%～0.47%。利用新建立的方法对120份临床驴血样本进行检测,阳性检出率为32.5%,研究结果为EHV-8的检测和致病性研究提供了可靠的技术支撑。     

山地乌骨鸡不同组织中CAPN 1基因表达的发育性变化

本试验采用SYBR GreenⅠ荧光定量法,首次测定了四川山地乌骨鸡1d、14d、28d、42d、56d、70d、84d的胸肌、腿肌、肝脏、心、脑组织中钙蛋白酶1CAPN1基因的相对表达量。结果表明：CAPN1基因在鸡体内普遍存在,CAPN1基因在肌肉组织中的表达量与鸡肌肉组织的生长发育呈相似的变化规律。     

冬季不同饲养模式下哈萨克马肠道菌群多样性研究

不同饲养模式对哈萨克马肠道菌群有何影响鲜有报道,本文通过对比自由放牧和圈养状态下哈萨克马粪便菌群组成和标志物种,揭示哈萨克马肠道菌群在不同饲养模式下的波动性变化。采集自由放牧和圈养条件下各5匹哈萨克马的新鲜粪便,利用高通量测序技术分析哈萨克马肠道菌群组成、功能途径等。结果显示,放牧组肠道菌群多样性显著高于圈养组（Shannon指数,P<0.05;Simpson指数,P<0.01）;放牧组标志物种显著多于圈养组。在门水平上,放牧组和圈养组的厚壁菌门（76.10%;78.08%）和拟杆菌门（17.16%;15.72%）丰度较高,均占总菌群的93%以上。在科水平上,放牧组以分解/发酵纤维素的菌群（瘤胃球菌科,30.44%;毛螺菌科,21.96%;艰难杆菌科,4.86%）为主;圈养组中分解/发酵纤维素的瘤胃球菌科（28.73%）和毛螺菌科（14.51%）以及消化淀粉类碳水化合物的链球菌科（15.08%）为优势菌科,且链球菌科的丰度显著高于放牧组（P<0.05）。对功能基因序列进行功能注释时,77.44%的序列被注释为“代谢”。结果表明,由不同饲养模式介导的两组中,自由放牧组菌群多样性高于圈养组,且菌群消化类型更为统一,两组肠道菌群组成存在整体性差异,这些为进一步研究哈萨克马肠道菌群奠定了理论基础。     

Expression of GPR54 Gene in Different Tissues and Cellular Localization in Testis of Sheep

The objectives of this study were to evaluate the expression of G-protein coupled receptor 54 (GPR54) in various tissues and the cellular localization of testis of 4 to 6-month-old sheep.In this experiment,mRNA expression was detected by Real-time fluorescence quantitative PCR.Cellular localization of GPR54 in testis was examined by immunohistochemistry.The results showed that GPR54 mRNA was expressed in all the tissues,and abundantly expressed in hypothalamus,pituitary gland and testis.The expression level gradually increased with the individual growth and development,the mRNA and protein expression of GPR54 in testis of 6-month-old was significantly higher than 4-month-old and 5-month-old (P<0.05);It was detected that GPR54 expression only in spermatogonia and a very number of primary spermatocytes in the testis by immunohistochemical staining,and it could detect significantly that the GPR54 expression in many split early sperm cells.The results demonstrated that it had close relationship between GPR54 and sexually mature of animals and the process of spermatogenesis in male animals.     

GPR54基因在绵羊不同组织中的表达及其在睾丸中的定位研究

试验旨在研究GPR54(G-protein coupled receptor 54)基因在绵羊不同组织中的表达及其在4~6月龄公羔睾丸组织中的表达特性及定位。本研究采用实时荧光定量PCR法检测各组织GPR54 mRNA表达规律,以及其在不同月龄公羔睾丸中的表达量,运用免疫组化技术对睾丸中GPR54基因进行定位分析。结果显示,GPR54在不同组织中均有不同程度的表达,其中在下丘脑、垂体和睾丸中大量表达;GPR54在4~6月龄绵羊公羔睾丸组织中呈阶段性表达,6月龄表达量显著高于4和5月龄(P<0.05);4月龄时,在精原细胞和极少数的初级精母细胞中检测到较弱的阳性信号;6月龄性成熟时,在睾丸中分裂早期的精子细胞检测到强阳性信号。综上表明,GPR54基因在绵羊不同组织中广泛表达,在下丘脑-垂体-睾丸生殖轴中发挥重要的作用,并与动物的性成熟及雄性动物精子发生过程有密切的关系。     

牦牛不同组织SREBP-1基因表达差异分析

在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。     

Concentration of Serum Transferrin in Sick Horses and its Relationship to Serum Albumin Content

Studies of transferrin (Tf) concentration in sera of sick horses were carried out using Mancini’s immunodiffusion technique. Relative values against a chosen reference serum were determined for a total of 112 horses.Horses with acute infections had Tf values significantly below the normal. The lowest individual Tf value in this group (46%) was found in a six-months-old foal with temperature 41°C and watery diarrhoea.Horses suffering from acute laminitis also had decreased Tf values. The lowest value in the whole material (45%) was found in a horse belonging to this group.There was a positive correlation between the Tf value and the albumin content in serum.     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。     

NODs/RIP2信号通路关键基因在断奶仔猪不同组织中的mRNA表达

本试验旨在研究核苷酸结合寡聚化结构域蛋白/受体相互作用蛋白2(NODs/RIP2)信号通路关键基因在断奶仔猪不同组织的分布情况。选择12头杜×长×大断奶仔猪,屠宰,取脾脏、胸腺、肠道淋巴结、下丘脑、垂体、肾上腺、肝脏、腓肠肌、皮下脂肪、空肠和回肠组织。应用实时荧光定量PCR技术测定NODs/RIP2信号通路关键基因,包括NOD1、NOD2和RIP2在各组织的mRNA表达水平。结果表明:NOD1、NOD2和RIP2在所检测的11个组织中均有表达。NOD1 mRNA在肠道淋巴结和下丘脑表达量较高;NOD2 mRNA在肠道淋巴结、脾脏、下丘脑和胸腺表达量较高;RIP2 mRNA在肠道淋巴结、胸腺和脾脏表达量较高。NODs/RIP2信号通路关键基因在不同组织中表达差异较大,可能与仔猪各组织对病原的识别和抵抗能力有关。