芫荽RAPD体系优化

以芜萎基因组DNA为模板,对RAPD扩增反应条件进行优化,以期建立适合芜荽的RAPD的最优反应体系,结果表明:PCR扩增体系(总体积20μL)为:模板DNA1.0 ng·μL-1,dNTP 0.45 mmol·L-1,随机引物1.3μmol·L-1,Taq酶0.6 U,Mg2+2.0 mmol·L-1,退火温度39℃,...     

文冠果DNA提取及RAPD和ISSR反应体系构建

为研究文冠果种质遗传多样性,以新疆奇台文冠果自然栽培居群的48个单株为材料,采用改良CTAB法提取文冠果基因组DNA,并对其RAPD和ISSR反应体系进行了优化。研究结果表明:文冠果的RAPD最适反应体系为:PCR扩增总体积为20μL,包含30ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,0.1mmol·L-1dNTP和Taq DNA聚合酶1U;ISSR最适反应体系为:PCR扩增总体积为20μL,包括30ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,2.5mmol·L-1 Mg2+,0.2mmol·L-1dNTP和Taq DNA聚合酶1U。在最适反应体系下,RAPD和ISSR分析具有良好的稳定性和可重复性。     

苜蓿基因组总DNA提取及RAPD反应条件优化

采用CTAB改良法,从苜蓿成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.对RAPD反应程序的重要参数进行摸索和优化试验,建立的适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,模板DNA浓度135 ng·μL-1,10×缓冲液浓度2.5 mmol·L-1,10碱基引物浓度15pmol,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度1.5 mmol·L-1,Mg2 浓度2.5 mmol·L-1.     

苹果梨变异单系基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化

采用CTAB改良法,以苹果梨及其变异单系叶片为材料,进行苹果梨基因组DNA提取及RAPD扩增条件优化.结果表明,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为25μL(15 ng DNA模板,1.0 mmol·L-1dNTP,1.0 mmol·L-1MgCl2,2.5μL Buffer,15 pmol·L-1引物,1UTaqDNA聚合酶,15.67μL ddH2O).扩增反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸1.5 min;45个循环;最后72℃延伸7min;终止温度为4℃.     

四种花色一串红RAPD分析

以4种花色一串红为试材进行了RAPD研究,筛选出的RAPD最佳反应体系为:采用25μL的反应体系,其中含有2μL的10×buffer,0.45 mmol·L-1的dNTPs,2.0mmol·L-1的Mg2 ,2U的TagDNA聚合酶,0.30μmol·L-1的引物,40 ng的模版.共筛选出12个特异引物,扩增出84条带,具有特异性的谱带为28条,占总带数的33%,在聚类图分析中,把4种花色一串红划分为两大类:首先是红色和红白双色聚为一类,然后和紫色聚在一起,白色单独为一类.     

长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立

采用改良的CTAB法提取杜鹃花的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的杜鹃花RAPD反应的最佳体系为25μL反应体系中包括模板DNA20～200ng.引物10pmol,dNTPs100μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.5U,Mg2 2.5 mmol·L-1,10xbuffer缓冲液2.5 mmol·-1,其余部分用无茵超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环;72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为长白山杜鹃花品种鉴定、分类的研究提供了一定基础.     

多子领春木RAPD反应体系的研究

利用RAPD(随机扩增多态性DNA)技术对濒危植物多子领春木进行了RAPD反应体系的研究.以多子领春木叶片为材料,采用改良的CTAB法提取其基因组DNA,进行RAPD反应条件的优化.通过单因子试验,分别研究了模板DNA用量、Mg2 浓度、dNTPs浓度、Taq酶的用量和引物浓度对RAPD反应的影响,建立了适于多子领春木RAPD分析的有效稳定的反应体系,即在25μL总反应体系中,模板DNA的最适用量为10 ng、Mg2 的适宜浓度为2.0 mmol·L-1、dNTPs的适宜浓度2.2 mmol·L-1、Taq酶的用量为1U、随机引物的浓度以2.5 μmol·L-1为佳.     

刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

小麦秆锈菌RAPD扩增体系的正交优化

针对RAPD扩增技术在小麦秆锈菌遗传多样性的分析研究中重复性较低的不足,对小麦秆锈菌RAPD扩增体系进行优化。以小麦秆锈菌不同的生理小种为材料,采用L16(45)正交试验设计,考察模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs和随机引物浓度5个因素的影响,并对退火温度和循环次数进行优化。结果表明:小麦秆锈菌RAPD扩增的较优体系为25μL体系中含1×Buffer,40ng·μL-1模板DNA,1.5mmol·L-1Mg2+,2.0U TaqDNA聚合酶,0.25mmol·L-1dNTPs,0.40μmol·L-1随机引物;适宜的退火温度为36℃,适宜的循环次数为43次。该反应体系检测多态性能力强、反应系统稳定且重复性好,可以较好地应用于小麦秆锈菌的遗传多样性分析研究。     

栓皮栎RAPD反应条件优化研究

通过单因素2循环试验对栓皮栎RAPD反应条件进行系统优化,探讨了RAPD各反应条件间的交互作用,建立了栓皮栎RAPD的最佳反应体系和扩增程序.结果表明:(1)各反应因素对栓皮栎RAPD扩增具有不同影响,各因素间的交互作用明显,单因素多循环试验设计能够有效的减少其交互作用、优化出RAPD扩增的最佳反应体系和程序;(2)适合栓皮栎RAPD反应的体系总体积为20 μL,模板DNA用量30 ng,Taq DNA聚合酶用量1.75U,引物用量8 pmol,Mg2+浓度2.0 mmol·L-1,dNTPs浓度0.25 mmol·L-1,10×Buffer 2 μL;适合栓皮栎RAPD扩增的程序是94℃预变性4 min,94℃变性40 S,40℃退火30 s,72℃延伸2 min,40个循环,72℃延伸10 min.