金龟子绿僵菌代谢产物成分预试验及其生物碱的获得

参照植物化学成分系统预试的方法对金龟子绿僵茵发酵代谢产物进行了初步分析;在pH值≥10的条件下,采用萃取技术、TLC和紫外分光光度法对代谢产物中的总生物碱进行了提取、分离和鉴定.结果表明,代谢产物中苦马豆素的特征显色反应明显;TLC、紫外分光光度法检测发现升华后的产物中以苦马豆素为主要成分,为苦马豆素获取途径的优化提供了新思路.     

金龟子绿僵菌中苦马豆素的分离与鉴定

探求从金龟子绿僵菌中分离苦马豆素的有效方法,提高苦马豆素产量及降低苦马豆素生产成本。采用超声波处理、过滤、离心、索氏抽提、萃取、离子交换色谱、吸附柱色谱及减压升华等方法,从菌丝体中分离苦马豆素,以薄层色谱、气相色谱及熔点测定法对分离产物进行鉴定分析,气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量。结果分离到白色针状结晶3.15 mg,经薄层色谱、熔点测定及气相色谱鉴定分析,确定分离到的结晶为苦马豆素,提取率为21μg/g。气相色谱法测定金龟子绿僵菌干燥菌丝体中苦马豆素的含量为2.26 mg/g。     

豆类丝核菌发酵代谢产物中苦马豆素的测定

利用气相色谱法,对实验室分离保存的6株豆类丝核菌发酵代谢产物中的苦马豆素(swainsonine,SW)进行了定性、定量分析。结果表明,豆类丝核菌发酵代谢产物中含有大量SW,其中02-6B与02-3A2株菌代谢产物中苦马豆素含量分别达到1093.17与1199.64mg/L,说明这2株菌可用于SW生物合成的研究,并有利于降低SW生物合成的成本。     

苦马豆素对新城疫疫苗免疫效果的影响

研究金龟子绿僵菌次级代谢产物对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。将100只14日龄健康无免疫雏公鸡随机分为5组,第Ⅰ~Ⅲ组分别注射高、中、低(4、2、1 mg/kg)3种剂量的金龟子绿僵菌次级代谢产物;IV组和V组分别为无佐剂组对照组(No Adjuvant,NA)和空白对照组。第Ⅰ~IV组动物于14日龄以新城疫病毒(NDV)LaSota株弱毒活疫苗滴鼻进行第1次免疫,2周后加强免疫1次。分别于首免前和首免后连续6周在各免疫组随机抽取10只鸡检测血清中ND-HI抗体效价;于每次免疫后24 h检测外周血中白细胞数;于免疫后42日龄检测免疫器官指数;用MTT法检测脾脏淋巴细胞的增殖活性。金龟子绿僵菌次级代谢产物剂量为1~2 mg/kg,大多数试验组鸡的抗体效价与雏鸡脏器(胸腺,脾脏,法氏囊)指数及外周血中白细胞数都显著高于对照组。金龟子次级代谢产物单独或其协同脂多糖(LPS),植物血凝素P(PHA-P)刺激时,鸡脾脏淋巴细胞的增殖活性增强。金龟子绿僵菌次级代谢产物剂量为4 mg/kg时,试验组鸡的抗体效价、免疫器官指数和外周血中的白细胞数均减少;鸡脾脏淋巴细胞的增殖活性降低。     

豆类丝核菌培养液中苦马豆素分离提取

[目的]探索豆类丝核菌培养液中苦马豆素的提取工艺,[方法]从豆类丝核菌培养液中分离苦马豆素,采用薄层层析、气相色谱对分离产物进行鉴定分析。[结果]产物经薄层层析、气相色谱法及熔点测定鉴定分析,确定分离到的粉末为苦马豆素,检测结果较好。[结论]该研究对于苦马豆素的批量化生产有着重大意义。     

金龟子绿僵菌CQMa421与其他药剂混用防治玉米草地贪夜蛾试验初报

[目的]探究真菌杀虫剂金龟子绿僵菌CQMa421与其他药剂混用对玉米草地贪夜蛾的防治效果.[方法]试验共设5个处理组,分别为金龟子绿僵菌CQMa42180mL、金龟子绿僵菌CQMa42130mL+5.7％甲维盐7g(-30％)、金龟子绿僵菌CQMa42115mL+5.7％甲维盐9g(-10％)、5.7％甲维盐10g和空...     

甘肃棘豆中降解苦马豆素内生细菌的筛选与鉴定

为研究甘肃棘豆(Oxytropis kansuensis Bunge)中降解疯草毒素——苦马豆素的内生细菌,采用选择性富集培养的方法,以苦马豆素作为唯一碳源,从甘肃棘豆内生细菌中筛选到1株苦马豆素降解菌,命名为Ab.在摇床转速为150 r·min-1、28℃条件下培养30 h,菌株Ab对质量浓度为100 mg·L-1苦马豆素的降解率为11.577 1%;延长培养时间并不能提高其降解苦马豆素的能力,但可耐受高质量浓度(1 g·L-1)的苦马豆素.通过形态学、生理生化试验和16S rDNA序列比对分析对Ab进行鉴定,结果表明,菌株Ab为革兰阴性短小杆菌,在LB平板上菌落呈圆形,中心凸起,边缘整齐,乳白色,表面光滑,属于短波单胞杆菌属(Brevundi monas),与缺陷短波单胞菌(Brevundi monas diminuta)同源性为100%.说明甘肃棘豆中存在降解苦马豆素的内生细菌Brevundi monas diminutaAb;降解苦马豆素的内生细菌可能与产生苦马豆素的内生真菌共同维持疯草中苦马豆素的动态平衡.     

萃取法提取甘肃棘豆中的苦马豆素研究初报

将1.5kg甘肃棘豆干粉经水提取,提取液浓缩后用正丁醇萃取,萃取液加入稀硫酸调节pH7.0,回收溶剂,制成浸膏;将浸膏与二氧化硅粉末混匀后用氯仿萃取该浸膏中的小极性杂质。用氨性氯仿萃取,收集氨性氯仿萃取液,挥干后升华得到7.5mg针状结晶,与苦马豆素标准样品对照进行TLC检测,其Rf值及斑点颜色与苦马豆素标准样品一致;通过熔点和IR、MS、1HNMR、13CNMR等鉴定其化学结构,为苦马豆素,计算甘肃棘豆苦马豆素的产率为5mg/kg。     

一株四合木内生菌发酵产物抑制植物病原菌的活性

对四合木1株内生真菌四合木链格孢进行液体发酵,提取发酵液和菌丝体代谢产物,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,通过抑菌试验检测各萃取相抑制植物病原菌活性。结果表明,发酵液和菌丝体代谢产物均具有抑制植物病原菌活性,其中发酵液中乙酸乙酯相和正丁醇相抑菌效果最明显。菌丝体各萃取相抑菌活性弱于发酵液,其中乙酸乙酯相抑菌效果最明显,说明发酵液中活性代谢产物主要存在于乙酸乙酯相和正丁醇相中,菌丝体中活性代谢产物主要存在于乙酸乙酯相中,研究结果为进一步分离抗植物病原菌活性成分和保护四合木这一濒危珍稀植物提供科学依据。     

2种方法防治金龟子的药效研究

[目的]探究化学和生物杀虫剂对青海省金龟子的防治效果。[方法]研究了生物杀虫剂绿僵菌(粉剂和水剂)以及化学杀虫剂50%辛硫磷对青海省金龟子的防治效果。[结果]绿僵菌粉剂防治效果达到80%以上,且对牧草和益虫安全;而50%辛硫磷的防治效果很差。[结论]生物杀虫剂将适宜在青海省大面积防治金龟子中推广应用。     

蝗虫微孢子虫与绿僵菌协调使用对东亚飞蝗的毒力测定

以东亚飞蝗三龄蝗蝻为试虫,室内生物测定蝗虫微孢子虫与绿僵菌对试虫的毒力,并研究了这两种病原物以5种比例联合使用的各方面效果。结果表明,蝗虫微孢子虫与绿僵菌对东亚飞蝗LD50分别是7.72×104个/g和5.04×105个/g。两者联合使用增效显著,其中绿僵菌与微孢子虫以1∶1比例处理试虫,饲养24d的LD50（2.5×104个/g）和LD90（1.99×106个/g）均较其他比例最小,效果最佳。比较7个不同剂量处理组的致死时间,LT50从小到大为2∶1,16∶1,1∶1,1∶2,0∶1,1∶0,1∶29;LT90从小到大为2∶1,1∶1,1∶2,16∶1,1∶0,0∶1,1∶29,若同时考虑接种剂量大小,则1∶1处理组致死时间相对最佳。比较6组处理的存活试虫的蝗虫微孢子虫感染情况,各组存活试虫仍可达到较高感染率,联合使用两种病原物在统计学生对微孢子虫感染情况无显著影响。综合各方面因素,当接种剂量绿僵菌∶蝗虫微孢子虫为1∶1时,达到防治东亚飞蝗的最佳实验室配比。     

绿僵菌防治蛴螬的应用研究进展

蛴螬是重要的世界性地下害虫,绿僵菌是防治害虫的重要昆虫病原真菌,对蛴螬有良好的防治效果。文章综述了国内外对绿僵菌防治蛴螬的研究报道及商品制剂的研制和应用现状,讨论了温湿度和紫外线等环境因素对绿僵菌防治蛴螬效果的影响;指出助剂的筛选、混合制剂的研发、菌株退化机理和土壤抑菌作用的研究等是绿僵菌防治蛴螬的研究热点和方向。     

2种杀菌剂对金龟子绿僵菌产孢的影响

在 0 .0 5 %～ 0 .1 5 %浓度范围内 ,2种杀菌剂 ( 30 %氧氯化铜和耐克铜 )对金龟子绿僵菌的菌落形成没有明显影响 .而耐克铜在 0 .0 5 %～ 0 .1 5 %浓度时能显著地增加金龟子绿僵菌的产孢量 ,并有缩短产孢时间的作用 .研究还表明 2种杀菌剂对杂菌 (根霉、曲霉和青霉 )有较强的抑制作用 ,并随着浓度的增大 ,抑制作用迅速增强 .试验结果对绿僵菌菌剂生产具有重要意义     

微小牛蜱饱血雌蜱高毒力绿僵菌菌株的筛选及应用

为筛选微小牛蜱的高毒力菌株,采用浸渍法测定了8株绿僵菌对微小牛蜱饱血雌蜱的存活指数.结果显示,菌株MaAT.4对微小牛蜱饱血雌蜱的毒力最强,其孢子悬浮液推荐杀蜱浓度为1×10~8个·mL~(-1).     

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶与谷胱甘肽S-转移酶GST在大肠杆菌中的高效融合表达

使用RT-PCR方法,从高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae HN1中,克隆得到一个全长为1275bp的几丁质酶基因,经Blast分析此基因序列与M．anisopliae E6的chil基因（AF02749）同源率为96％。将此基因克隆到pGEX-6p-1载体上,使之与载体上一个约26kD大小的谷胱甘肽S-转移酶（GST）相连,构建pGEX-chi融合表达载体,转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中,经SDS-PAGE结果分析显示：表达出的融合蛋白大小为68kD,此目的蛋白占表达总量的64．5％。经破碎处理后可检测到几丁质酶活性。     

苜蓿切叶蜂对绿僵菌的敏感性

本研究的主要目的是测定苜蓿切叶蜂对绿僵菌的敏感性。试验结果表明,苜蓿切叶蜂的预蛹和成蜂对绿僵菌显著敏感。感染绿僵菌的苜蓿切叶蜂预蛹和成蜂分别在4d和5d时死亡率达50%以上,并在7.5d和10d后全部死亡,死亡的预蛹和成蜂分别有100%和98%的死亡虫体上产生分生孢子。     

不同油剂对金龟子绿僵菌孢子萌发率的影响

本文对杀蝗绿僵菌MA4菌株气生分生孢子在5种植物油、3种矿物油两两不同混配比例的混合油中的萌发率进行了研究,确定了混合比例为1:3的花生油与煤油的混合油作为制剂的载体油是一种理想的绿僵菌油剂类型.气生分生孢子在该混合油剂中36h的萌发率达到95%以上.     

15种杀虫剂对3种虫生真菌孢子萌发的影响

选择了15种杀虫剂来测验布氏白僵菌、球孢白僵菌和绿僵菌孢子萌发的影响,结果表明,所有杀虫剂对真菌的分生孢子萌发均有不同程度的抑制作用,浓度愈高,抑制作用越大.总的来看,对球孢白僵菌影响最大,布氏白僵菌次之,绿僵菌影响最小.混配农药绿保1号对3种虫生真菌的影响最小,其次是乙酰甲胺磷和甲胺磷.另外,不同真菌对同一种杀虫剂的敏感性亦有较大差异.因此,在田间进行菌药混用防治害虫前,应进行严格的试验.     

化学杀虫剂对绿僵菌胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响

研究了几种化学杀虫剂对金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响。结果表明,化学杀虫剂对绿僵菌的胞外蛋白酶和几丁质酶活性影响较大,供试的12株金龟子绿僵菌大部分菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性均明显降低,仅有Ma202、Ma207菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性略有提高。     

绿僵菌与白僵菌混合使用对马尾松毛虫的毒力

共毒系数分析表明,绿僵菌和白僵菌混合使用对马尾松毛虫幼虫的毒力比单独使用提高了1.75倍.林间防治试验结果也表明,绿僵菌与白僵菌混合使用对马尾松毛虫的防治效果显著优于单独使用.