禽流感高敏荧光免疫分析快检试剂盒的研制与应用

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记,用禽流感通用型和H7亚型单克隆抗体,研制了检测禽流感抗原的镧系高敏荧光免疫分析快检试剂盒(LFICA),经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的对比试验,表明该快检试剂盒(LFICA)特异性强,敏感性高,重复性好,是目前禽流感病原快速诊断初筛和流行病学调查最快捷、简单和实用的诊断检测方法。     

猪伪狂犬病gE、gB抗体镧系荧光免疫层析快检试剂盒的研制及效果评估

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记,用纯化的PRV-gE和PRV-gB表达蛋白抗原建立了检测猪伪狂犬病gE、gB抗体的镧系荧光免疫层析快检试剂盒。经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的对比试验,得出该试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好、符合率高,且质量稳定,保质期长,是实现猪伪狂犬病即时现场快速检测的一种血清学检测方法。     

高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌抗体

为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌（M. bovis）抗体的可行性,对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示,该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品,而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应（TST）阴性牛血清样品等均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核（bTB）强阳性血清参考品;稳定性试验结果显示,该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%;临床样本检测结果显示,该方法与IDEXX M. bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%,具有较高的一致性,且差异不显著。以上结果表明,高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠,可作为TST检疫的补充抗体检测方法,用于bTB的诊断、检疫和净化。     

布鲁氏菌抗体镧系高敏荧光快速检测试剂盒的研制

本试验选用镧系元素铕（Eu）为荧光物质标记布鲁氏菌脂多糖抗原（LPS）,建立了布鲁氏菌抗体高敏荧光免疫层析快速检测试剂盒（Bru-LFICA）。经相关试验验证,得出该试剂盒特异性强,敏感性高,重复性好,符合率高,且兼具操作方便,检测快速（15 min）,价廉,不需特殊设备和专业技术人员等优点,特别适合于基层兽医站、养殖场的即时快速检测。     

牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A（SAA）时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=（1.03947-0.00182）/[1＋（x/12.08222）×（-0.84692）]＋0.00182,线性相关系数R²=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数 < 15%,批间变异系数 < 20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R²为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。     

牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A(SAA)时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=(1.03947-0.00182)/[1+(x/12.08222)×(-0.84692)]+0.00182,线性相关系数R~2=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数15%,批间变异系数20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R~2为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。     

胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪蓝耳病抗体的比对试验

胶体金免疫层析试纸条检测猪蓝耳病抗体的结果中强阳性、中阳性、弱阳性、阴性分别为48.67%、18.58%、31.86%、0.88%,检测猪蓝耳病抗体合格率99.12%;ELISA检测猪蓝耳病抗体合格率95.58%,符合率为96.43%。胶体金免疫层析试纸条能够评价猪蓝耳病疫苗临床免疫状况,可进行猪蓝耳病抗体的定性检测。     

猪蓝耳病抗体试剂盒出现假阳性的确诊思路

猪蓝耳病（PRRS）是影响养猪行业的一个重要的疾病。对于一个核心场或者公猪站而言,维持猪蓝耳病双阴性,做好猪蓝耳病的监测工作是及其重要的。猪蓝耳病抗体检测是猪蓝耳病双阴性场评估猪群是否感染猪蓝耳病野毒常用的方式之一。但是所有商品化的试剂盒的敏感性和特异性并不是100%准确的。通过对3个猪蓝耳病双阴性猪场的猪只进行猪蓝耳病抗体检测,检测结果分别出现2.17%、100%、1.6%的阳性样本。对于异常结果除实验室进行复检和临床诊断外,还通过抗体变化的监测和免疫荧光的检测来验证检测结果的可靠性,经过验证得知这3个猪场出现的2.17%、100%、1.6%的阳性结果均为假阳性。     

应用Kappa检验比较猪蓝耳病ELISA抗体检测试剂盒

[目的]比较两个猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测试剂盒结果的一致性。[方法]对390份猪血清进行PRRSV抗体ELISA检测,应用Kappa检验比较两种试剂盒检测结果的一致性并进行分析。[结果]两种试剂盒联合检测出250份PRRSV抗体阳性和70份阴性,阳性一致性为80.65%,阴性一致性为87.50%,符合率82.1%,结果一致性为中度一致（ Kappa值=0.552）。[结论]2种方法检测结果一致性较好,建议根据实际需要选择PRRSV抗体检测试剂盒。     

禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。     

猪蓝耳病疫苗对猪瘟抗体的免疫干扰作用

为制定合理的猪蓝耳病和猪瘟的免疫程序,研究猪蓝耳病弱毒疫苗和灭活疫苗对猪瘟免疫抗体的干扰作用,本试验采用ELISA方法检测惠城区某猪场100份血清的猪瘟和猪蓝耳病抗体,并对猪瘟抗体间接血凝试验log25值和猪蓝耳病抗体的S/P值进行比较。结果表明,猪蓝耳病灭活疫苗对猪瘟弱毒疫苗无干扰作用;猪蓝耳病弱毒疫苗对猪瘟免疫抗体的影响极其显著。     

猪蓝耳病病毒抗体检测

猪蓝耳病是由动脉病毒科的猪繁殖于呼吸综合症病毒引起,以高热不退,流产呼吸困难,耳朵发紫,并发其他传染病为主要特征,近10年来在我国流行严重,损失重大,我国已将其列入强制免疫范围,而免疫抗体监测是检验免疫是否合格的唯一标准,本文谈谈用猪蓝耳病病毒抗体监测试剂盒对蓝耳病的实验室抗体监测实验。     

猪蓝耳病的免疫挑战

猪繁殖与呼吸障碍综合征,又称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高传染性、高致病性和高致死率的病毒性疾病,对我国养猪业造成严重威胁,本文归纳总结猪蓝耳病病毒的免疫挑战,以期为猪蓝耳病的进一步防控和疫苗研发提供参考。     

猪蓝耳病的免疫防控

自2006年6月份以来．我国华东、华南地区陆续发生大规模猪病疫情。看似自江西开始。后来波及到湖南、湖北、安徽、浙江、江苏、广东、福建，后来又据说涉及到河南，甚至是内蒙等地，殃及很广的地域，给我国的养猪业造成了重大的经济损失。根据该次猪病的流行病学特点、症状、剖检变化和实验室检测，专家已经确定是高致病性蓝耳病变异病毒。     

猪蓝耳病的免疫讨论

1免疫技巧1.1疫苗的选择以经典毒株为主猪蓝耳病与猪瘟疫苗的使用,需间隔2周以上,最好先免猪蓝耳病疫苗,再免猪瘟。1.2注意事项紧急免疫接种后,待猪群稳定后再免疫1次。重视滴鼻免疫的重要性。2推荐免疫程序2.1阳性猪场商品猪:仔猪3～5日龄滴鼻0.5～1头份,40～50日龄肌注1头份种猪:普免3～4次/年。初次免疫25～30天后加强免疫一次,1头份。后备母猪:配种前免3次种公猪:普免3~4次/年。     

猪肺炎支原体抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

旨在建立猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记pH和标记浓度并进行标记,作为金标液。将P46蛋白包被检测线T线,抗P46蛋白单抗包被质控线C线,组装检测试纸条。经优化,建立可同时用于Mhp血清抗体和黏膜抗体检测的胶体金免疫层析检测方法。利用该检测方法对76份临床血清样品和40份临床鼻拭子样品进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。用该试纸条检测血清样品时,灵敏性、特异性、重复性较好,与商品化Mhp ELISA抗体检测试剂盒符合率为96.1%;该方法检测呼吸道鼻拭子样品时,存在微弱的非特异性反应,检测结果与本实验室建立的sIgAELISA检测方法符合率为87.5%。本研究成功建立了Mhp抗体胶体金免疫层析检测方法,整个过程只需10 min。检测血清样品具有较好的特异性和灵敏性,检测鼻拭子样品时特异性还有待提高。     

我国自主研制出快检牛结核试剂盒

历时3年,由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,研制出快速检测牛结核方法及检测试剂盒,近日正式接到国家发明专利证书,其在诊断效果上毫不逊色于国外技术,成本却只有国外产品的1／4,打破了国外进口垄断。     

我国自主研制出快检牛结核试剂盒

<正>历时3年,由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,研制出快速检测牛结核方法及检测试剂盒已正式接到国家发明专利证书,其在诊断效果上毫不逊色于国外技术,成本却只有国外产品的1/4,打破了国外进口垄断。     

猪蓝耳病的免疫控制要点

1科学的蓝耳病免疫理念1.1免疫预防最为经济最为有效1.2选用弱毒疫苗而非灭活疫苗1.3必须对全群进行免疫接种1.3.1母猪的免疫是关键:建立一致的免疫力,抑制母猪排毒。1.3.2仔猪纳入常规免疫:尽早建立主动免疫力。1.4选用优秀的蓝耳病弱毒疫苗免疫是关键2优秀的蓝耳弱毒疫苗的标准2.1种毒的抗原性好、交叉免疫保护力强猪蓝耳病毒容易变异,除经典毒株外,还有变异毒株如江西株、湖南株、天津株等;选择的疫苗不仅对经典蓝耳病毒株,而且还应对当前流行的各种变异