亚洲玉米螟核糖体18S rRNA基因的序列分析及分子系统学研究

从鳞翅目亚洲玉米螟(Ostriniafunacalis(Guen6e))3龄幼虫提取基因组DNA.通过PCR扩增和测序,获得其核糖体小亚基18S rRNA基因(18S rDNA)的序列,利用ClustalW与六足总纲中22个目(纲)昆虫的18S rRNA基因序列进行多重联配.结果表明.昆虫18S rRNA有4段序列较为保守,其中第2区段最为保守.分别用全长序列和第2保守区段构建分子系统发育树,结果显示:保守区段构建的系统发育关系比较符合传统分类,所列各目(纲)中毛翅目与鳞翅目亲缘关系最近,昆虫纲中的衣鱼目、蜉蝣目、蜻蜓目与弹尾纲、双尾纲、原尾纲距离较近,属于比较古老的昆虫类群.     

亚洲玉米螟幼虫P450基因片断的克隆与序列分析

根据G enB ank中昆虫P 450氨基酸保守序列设计了1对简并引物,以亚洲玉米螟田间自然种群基因组DNA为模板,扩增得到一条长度为603 bp的特异性DNA片段,编码201个氨基酸。将此氨基酸序列与G en-B ank中已知序列采用B last及C lusta lW EB I软件进行同源性分析,结果表明该氨基酸序列与CYP 4家族的同源性较高,达37%~53%,初步推测此序列为CYP 4家族的一员。     

亚洲玉米螟幼虫体内酚氧化酶原cDNA片段的克隆

利用昆虫酚氧化酶原(PPO)基因序列设计简并引物，采用RT-PCR方法从亚洲玉米螟幼虫体内扩增了一段522个核苷酸的eDNA片段，编码174个氨基酸。经Blastp分析表明，该段氨基酸序列同鳞翅目和双翅目中PPO的相同区域具有较高的相似性(39％一63％)。其中与烟草天蛾PPO的相似性最高(63％)；与家蚕、大蜡螟、惜古比天蚕蛾PPO也有较高的相似性。在该片段中含有1个该类酶原中保守的2个铜离子结合位点之一(含4个组氨酸残基)。据此推断克隆的片段为PPO基因片段。     

亚洲玉米螟pdp1的克隆及功能分析

【目的】克隆获得亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）蛋白酶激活受体类转录因子pdp1（protease- activated receptor-domain protein1）（Ofpdp1）cDNA序列（GenBank登录号：KC857457）,明确其基因结构特征,并进一步研究该基因的表达特性及其在生长发育过程中的作用,为亚洲玉米螟的遗传控制提供潜在的靶标基因。【方法】采用RT-PCR和PCR技术,克隆Ofpdp1 cDNA序列,利用相关软件进行生物信息学分析;利用qPCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）研究卵期及幼虫期Ofpdp1表达特征;在原胚期利用RNA干扰技术（RNAi）研究其生物学功能。【结果】克隆得到基因Ofpdp1,全长为960 bp,开放阅读框804 bp,编码267个氨基酸,同源比对发现OfPDP1 C-末端与其它昆虫PAR bZIP（basic leucine zipper）转录因子非常相似,含有3个高度保守的结构域,系统发育分析的分类结果与生物学上物种分类相吻合。qPCR结果显示Ofpdp1的mRNA表达量在卵发育76 h左右存在显著的表达高峰。在亚洲玉米螟原胚期,注射Ofpdp1的双链RNA（dsRNA）48 h后,Ofpdp1 mRNA表达量被沉默了71%。【结论】成功地从亚洲玉米螟中克隆得到Ofpdp1,Ofpdp1进化非常保守,属于PAR bZIP亚家族;Ofpdp1可能在幼虫定型时期胚胎生理结构的变化过程中起到重要作用。     

亚洲玉米螟Ostrinia furnaealis的胚胎发育

1985-1987年,在武昌室内恒温26℃±0.5、相对湿度70%±5、日光照18小时的条件下,观察了亚洲玉米螟Ostrinia furnaealis(Gueaee)卵粒的外表颜色及内部胚胎发育的变化。将胚胎发育期划分为四级,即:1.卵裂,胚盘及胚带形成,胚体开始分节期;2.附肢形成,胚体缩短期;3.背合,胚动期;4.继续背合,静止期。卵的整个历期为107±3小时。     

亚洲玉米螟飞翔能力的初步研究

通过配有微机记录系统的飞行磨吊飞方法,测定了亚洲玉米螟(Osirinia furnacaris)的飞翔能力及温度、湿度,气流等不同生态条件对其飞翔力的影响。初步探讨了亚洲玉米螟的飞翔扩散活动及可能的迁飞活动。玉米螟1日龄和2日龄雌蛾可累计飞翔30小时,150公里以上。飞翔速度平均1.5米/秒,最高可达2.4米/秒。雄蛾飞翔力初期稍弱,但3日龄以后强于雌蛾。玉米螟的飞翔适温区为20—30℃,高温低湿不利其飞翔。玉米螟在风速不大于1.53—1.6米/秒时可逆风飞翔,在较大的风速下顺风飞翔时,其自身的飞翔速度随风速增加而渐降,风速9米/秒时停止振翅,随风飘流。     

亚洲玉米螟Pgi基因全长的同源PCR克隆

为从核酸水平上研究亚洲玉米螟Pgi基因,以GenBank中的鳞翅目昆虫Pgi基因mRNA序列为参考序列,利用MEGA 5.0软件、IDT在线程序及Primer Primer5.0软件等设计用于扩增亚洲玉米螟Pgi基因编码序列的引物,同时利用PCR扩增及序列分析验证引物的有效性。结果表明:测定的亚洲玉米螟Pgi基因编码序列与Genbank中美国白蛾、苜蓿黄蝶等鳞翅目昆虫Pgi基因mRNA序列均具有较高的相似度(达78%~85%),表明,设计的引物均具有较强的有效性,能成功地扩增出亚洲玉米螟Pgi基因编码序列。     

桃果实乙烯反应因子PpERF1全长基因的克隆及序列分析

以成熟肥城桃果实的cDNA为模板,根据EST库中的核苷酸序列,设计2条特异引物分别与B26进行PCR扩增,结果得到了该基因下游包括3''端非编码区的765 bp大小的cDNA片段.PpERF1基因全长为1263 bp,包含一个708 bp大小的完整开放阅读框(ORF).序列分析表明,PpERF1与番茄、拟南芥、苹果和葡萄等在DNA结合功能域的约57个氨基酸中,同源性可达68.4%～100%,且在该区域中存在1个α-螺旋和3个反平行链构成的β-折叠结构.经同源性分析,该序列与拟南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性为58.8%～67.5%,属于同一类ERF家族成员.     

刀豆氨酸对亚洲玉米螟生长发育及生殖的影响

较系统地观察了刀豆氨酸对亚洲玉米螟生长发育及生殖的影响。亚洲玉米螟幼虫取食含刀豆氨酸（０．５～２．０ｍｍｍｏｌ／Ｌ）的半人工饲料后，五龄幼虫体重明显增加，幼虫，预蛹和蛹死亡率升高，成虫寿命明显缩短。在预蛹、肾和成虫期，处理组出现大量畸形个体，畸形的程度和数量随刀豆氨酸浓度的的升高而增加。成虫的生殖力（产卵率和受精率）随刀豆氨酸深度的升高而迅速下降，试验表明，刀豆氨酸对雌蛾的作用是引起生殖力下降的主     

甜樱桃乙烯转录因子PaEIL1基因的克隆及序列分析

根据植物乙烯转录因子EIL（EIN3-like）家族的氨基酸和核苷酸保守区序列设计简并引物,以甜樱桃（Prunus aviumL.）果实的cDNA为模板,通过RT-PCR方法得到了PaEIL1部分序列。随后进一步通过RACE技术克隆得到了PaEIL1全长片段,其大小为2 636 bp,包含一个1 806 bp大小的完整开放阅读框（ORF）及部分非编码区序列,编码蛋白大小约为601个氨基酸。聚类分析结果表明,PaEIL1属于EIN3/EIL家族乙烯转录因子成员。     

Expression profiles and functional prediction of ionotropic receptors in Asian corn borer,Ostrinia furnacalis (Lepidoptera: Crambidae)

Genes involved in chemosensation are essential for odorant-mediated insect behaviors. Odorant receptors(ORs) bind and respond to pheromones and plant volatiles, regulating insect behaviors such as mating and host-plant selection, while ionotropic receptors(IRs), which are present at lower levels in insects than ORs, influence ion channels, especially in agricultural pests. Asian corn borer, Ostrinia furnacalis, is the main pest of maize that causes huge economic losses in Asia. Twenty-one Ofur I...     

亚致死剂量闹羊花素-Ⅲ对亚洲玉米螟EAG的影响

以闹羊花素-Ⅲ点滴亚洲玉米螟成虫,确定其亚致死剂量为0．02μg／头;用该剂量闹羊花素-Ⅲ点滴亚洲玉米螟成虫后,离体检测其触角电位(EAG)反应值。结果表明,药剂处理的亚洲玉米螟成虫与未用药剂处理的正常试虫相比,EAG值增高,EAG反应有向增高方向漂移的现象,且随叶醇浓度增高EAG反应漂移越明显。     

甜玉米亚洲玉米螟化学防治技术研究

采用potter喷雾法对亚洲玉米螟进行了药剂筛选试验,结果表明,阿维菌素·高效氯氰菊酯和乐斯本对亚洲玉米螟的致死作用明显,处理72 h后致死率均超过90%;乐斯本·高效氯氰菊酯和高效氯氰菊酯的致死作用次之,致死率分别为87.8%、78.9%.田间药效试验结果与室内药剂筛选结果相吻合,以阿维菌素·高效氯氰菊酯和乐斯本的防效最好.大田防治示范试验进一步表明,阿维菌素·高效氯氰菊酯是防治甜玉米亚洲玉米螟的高效药剂.     

一种适宜亚洲玉米螟幼虫滞育解除的新型装置

研制了一种适宜亚洲玉米螟幼虫滞育解除的新型装置,装置由托盘、带孔泡沫板、透明圆柱管和脱脂棉4个部件组成。其方法是,将泡沫板置于盛有少量水分的托盘上、将装有亚洲玉米螟滞育幼虫,两端塞有脱脂棉的透明圆柱管插入泡沫板小孔内,然后将整个托盘置于诱导发育的条件下,观察滞育幼虫的化蛹情况。该方法模拟了亚洲玉米螟滞育幼虫解除的外环境,满足了滞育幼虫解除对水分的需求。该方法用于广东惠州(简称HZ)、江西永修(YX)、安微合肥(HF)、山东泰安(TA)、河北廊坊(LF)和辽宁沈阳(SY)6个不同地理种群亚洲玉米螟的滞育解除试验,滞育幼虫在光周期L∶D=18∶6和25℃下及在春季自然条件下化蛹成功率都在85%以上。本方法操作简便,还可直接用于亚洲玉米螟的越冬代幼虫化蛹进度的观察及成虫发生期的预测预报。     

糯玉米田亚洲玉米螟发生规律研究

[目的]该项目在山西省糯玉米主产区开展糯玉米田亚洲玉米螟发生危害特点调查研究,旨在为开展糯玉米田亚洲玉米螟适期有效防治奠定基础。[方法]该研究采取成虫诱集、卵和幼虫定点和随机调查的方法进行。[结果]调查结果表明,糯玉米田亚洲玉米螟年发生两代,世代基本不重叠,两代间有较明显的间隔。糯玉米田亚洲玉米螟越冬代成虫盛发期为6月上中旬,一代成虫盛发期为8月上旬至下旬;一代卵盛期为6月上旬末至6月下旬初,二代卵盛期为8月上旬中期至8月下旬。亚洲玉米螟对不同生育时期糯玉米的产卵趋性表现为,在糯玉米抽雄之前,随着生育时期向后延续,糯玉米对亚洲玉米螟产卵的引诱力逐步增强;而在糯玉米抽雄之后,随着生育时期向后延续,糯玉米对亚洲玉米螟产卵的引诱力逐步减弱。生育时期基本相同、长势基本一致的糯玉米上的落卵量较普通玉米上为多。糯玉米田亚洲玉米螟一代发生危害轻二代发生危害重。一代幼虫对糯玉米的危害早播田重于中播田,而晚播田基本上不受一代幼虫的危害,由于一代幼虫发生轻,不论早播还是中播糯玉米虽然受害但一般较轻。二代幼虫对糯玉米的危害晚播田重于中播田,早播糯玉米在二代幼虫危害初期即采收,一般年份不受二代幼虫的危害或受害较轻,由于二代幼虫发生量大,因而对晚播和中播偏晚播种的糯玉米会造成严重的危害。糯玉米果穗穗腐病的发病率与果穗受亚洲玉米螟危害密切相关,果穗受亚洲玉米螟危害者,穗腐病发病率高。[结论]糯玉米产区应加强中、晚播糯玉米田二代亚洲玉米螟的综合防治。     

阿维菌素与高效氯氰菊酯对玉米螟的联合毒力

测定了阿维菌素与高效氯氰菊酯对玉米螟的联合毒力及其混配剂的田间药效。结果表明,阿维菌素和高效氯氰菊酯混配对亚洲玉米螟幼虫有增效作用,两者以重量比为1:5混配时的增效作用最明显,共毒系数最高,为210.68,该混配比例对玉米螟幼虫的LC50为5.48μg/mL,田间防治效果有效成分48g/hm2为86.18%,30g/hm2为76.49%,而高效氯氰菊酯有效成分30g/hm2的防治效果仅为64.15%。     

转Bt crylF基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫存活率的影响

以不同用量的转Bt crylF基因抗虫玉米饲养亚洲玉米螟幼虫,研究人工饲料中转基因玉米对其存活率的影响.结果表明,随着人工饲料中转基因玉米用量的增加,亚洲玉米螟幼虫的存活率逐渐下降,在用量为100%处理时幼虫存活数仅3～5头,存活率仅15%～20%;在对照玉米处理中,4个处理的幼虫存活数均较高,为16～19头,存活率均在69%以上.转基因玉米处理的幼虫存活数与对照玉米处理相比,两者差异显著.