脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其检测

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）又名呕吐毒素,是一种有很强细胞毒性、胚胎毒性、一定致畸性、弱致癌性且影响免疫系统的真菌毒素,污染严重的粮谷类食品和饲料,人畜食用后健康将受到严重危害。文章对其危害、检测方法进行了部分议论,重点调查了解了抚顺地区2008年产部分玉米样品在2009年夏季DON的平均含量。强调要加强对DON的了解,加强对其检测,加强对谷物及其制品中DON含量的重视,以保证食用谷物及其制品的安全。     

胶体金免疫层析法检测玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

采用乙酸乙酯提取法对玉米样品前处理,然后用胶体金免疫层析法检测其中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。该法简便快捷,与HPLC国家标准法相比检测结果一致,因此采用此法可加强粮食的卫生监管。     

制粉对小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的迁移作用

以自然污染脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的小麦为材料,通过筛理、水洗、制粉等加工工艺处理后,对小麦中的DON含量进行测定,得到了DON在小麦籽粒中的分布情况及小麦加工对其中DON迁移的影响。实验结果表明:1小麦中的DON主要分布在皮层,虽然小麦粉中DON含量有随染病程度增加而上升的趋势,但就总体而言,小麦粉中DON含量明显低于全麦粉;2筛理和水洗都能不同程度地降低小麦粉中DON的含量。筛理对于降低小麦粉中毒素的作用较明显,水洗对于降低麸皮中DON含量的作用较明显;3由于心粉和皮粉之间,粗麸和细麸之间的DON含量差异微小,因此,提高加工精度或控制出粉率对进一步降低小麦粉中DON含量的作用不大;4当小麦的DON含量在1.56mg/kg以下时,经筛理、水洗、制粉加工后的含量有较大可能性达到限量值1mg/kg以下。     

小麦粉中单端孢霉烯族毒素的检测方法

使用GC/MS建立了小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇2种毒素同时检测的方法。前处理0.5倍浓缩,外标法定量,回收率超过70%,定量下限为0.01 mg/kg,0.005～0.5 mg/L标准溶液的相关系数大于0.99。该方法操作简单、重现性和准确度高,非常适用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的检测。     

小麦镰刀菌毒素DON积累抗性研究进展

赤霉病是影响小麦生产的重要病害。小麦赤霉菌侵染寄主后,不仅影响小麦产量和品质,感病子粒中的真菌毒素（主要为脱氧雪腐镰刀菌烯醇,Deoxynivalenol,DON）还对人畜安全造成危害,培育抗病特别是抗DON积累品种是减轻赤霉病危害的有效途径。目前,在赤霉病5种抗性类型中仅抗侵染（类型Ⅰ）和抗扩展（类型Ⅱ）的研究较为深入,随着近年来对食品安全的重视,对毒素DON积累抗性类型（类型Ⅲ）的许多研究也陆续展开。本文系统地综述了抗毒素DON积累种质资源筛选、抗性遗传和抗病基因的分子标记等方面的进展。     

甘肃赤霉病粮毒素的初步研究

本文对甘肃赤霉病粮中的真菌毒素进行了初步的研究.从赤霉病粮中分离出的粗毒素提取液,不仅能在鸽子灌胃试验中引起鸽子的呕吐;而且还能抑制豌豆种子的发芽.从病粮中提取的粗毒素是个多组份的化含物,经层析法得到5个组份,其中以Rf值0.42部分与已知的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,在薄层层析中显示相同的层析现象.     

玉米镰刀菌穗腐穗丝抗性的基因证据

嫁接是银杏早实、丰产、改良品质的有效手段。作者通过试验，取得银杏嫁接以３月中旬至４月上旬进行枝接，夏季以芽接法进行补接为好；接穗取２－３年生枝条；砧木年龄大小均可，但成年砧木可提早开花结果的经验。可供生产单位参考。     

苯醚菌酯与戊唑醇混剂对小麦赤霉病菌的联合毒力及田间防效

为探明苯醚菌酯与戊唑醇混剂对小麦赤霉病菌的联合毒力及对赤霉病、小麦籽粒DON毒素和白粉病的田间防效,开发防治赤霉病的新药剂,采用菌丝生长速率法分别检测了苯醚菌酯、戊唑醇及其11种配比混剂对赤霉病菌的毒力,并进行了最佳配比制剂的田间药效试验。结果表明,苯醚菌酯与戊唑醇配比为1:9时增效系数为2.0804,增效作用最显著。田间药效试验中,37%苯醚菌酯·戊唑醇SC 450 g/hm²对赤霉病病指防效和DON防效分别为92.86%和89.49%,2次药后21 d对白粉病病指防效为85.84%,均高于常规药剂多菌灵和戊唑醇,并且对小麦生长安全。37%苯醚菌酯·戊唑醇SC对赤霉病和籽粒DON毒素防效优良,同时对白粉病兼治效果良好,可开发为赤霉病防治药剂。     

粮食中DON-免疫亲和层析净化高效液相色谱法的回收率方法比较

用免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,且与GB/T 23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、Romer labs实验室推荐方法、实验室优化方法进行比较。本实验方法在前两种方法的基础上优化后,在0.5mg/kg~5mg/kg的加标水平下,回收率在90.3%~100.2%,RSD在1.2%~2.0%之间,最低检出限则为44μg/kg,定量限为146μg/kg,能够很好的满足实验室分析要求。     

小麦脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)薄层层析快速检测法

小麦中的DON用水和三氯甲烷一乙醇(8∶2)提取后挥干,加5 ml三氯甲烷溶解残渣,转移至刻度浓缩瓶中进行浓缩,定容至0.5ml作薄层层析用.横展剂乙醚-丙酮(95∶5);纵展剂三氯甲烷-丙酮-异丙醇(8∶1∶1).双向展开薄层板,在130℃条件下,加热薄层板10分钟,DON与三氯化铝作用呈兰色荧光,与标准进行比较. 用茴香醛-浓硫酸-冰醋酸(0.05∶0.1∶5)喷雾后,在115-120℃条件下烘5-10分钟呈现桔红色进行确证. 本方法灵敏度为0.2ppm,定性检出可达0.1ppm,DON的回收率达85%以上.     

异戊烯基腺苷组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法的建立

从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：３４５００。交叉反应试验表明该抗血清只识别ｉＰＡ组细胞分裂素。因此本研究中采用直接型（即固相抗体型）ＥＬＩＳＡ，并将最佳免疫反应平衡时间缩短至３０ｍｉｎ（４℃）。所建立的ｉＰＡ组ＥＬＩＳＡ检测极限为４．７ｆｍｏｌｉＰＡ／孔，线性检测范围０．０１～５０ｐｍｏｌｉＰＡ／孔，板内、板间的变异系数分别为３．７％和５．３％。样品的稀释曲线与标准曲线平行，回收率为８７．１％，表明本研究中采用的８０％甲醇提取、Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱初纯化的快速制样程序适合于该ＥＬＩＳＡ。对大豆植株不同部位ｉＰＡｓ含量测定结果表明，根瘤与根尖内ｉＰＡｓ含量显著高于幼叶与顶芽内的ｉＰＡｓ含量。     

转Bt基因棉Bt毒蛋白的ELISA检测方法的研究(英文)

利用纯化的Ｂｔ毒素蛋白（６７ｋＤａ）作为标准蛋白和免疫抗原,建立了检测转基因抗虫棉植株内Ｂｔ毒蛋白含量的抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。检测极限１μｇ·Ｌ－ １,线性范围１－ １５μｇ·Ｌ－ １,板内误差Ｃ．Ｖ．＜ ５％ ,板间误差Ｃ．Ｖ．＜ ５％ ,平均样品回收率９４．９４％ 。经稀释度试验等质量控制试验,表明所建立的ＥＬＩＳＡ方法是可靠的,可用于转基因棉花植株中Ｂｔ毒素蛋白含量的测定。     

ELISA在检测动物组织氯霉素残留中的应用

采用酶联免疫吸附实验 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay ELISA)方法,筛查和定量检测氯霉素（Chloramphenicol）。试样经过乙酸乙酯的萃取和正己烷的净化,在温育过程中,将特异性抗体（兔抗CAP）、酶标记CAP（酶结合物）和CAP标准品或样品,加入预先包被了绵羊抗兔IgG抗体的孔内。特异性的抗体便被固定抗体所结合。与此同时,游离的CAP（存在于标准品或样品）和酶结合CAP便互相竟争CAP抗体结合部位（竞争性酶免检测）。然后温育1h洗涤除去非结合（酶标记）试剂。加入底物,结合的酶结合物可将无色的底物转化为有色产物。加入硫酸,终止底物反应。用装有450nm滤光片的酶标仪进行检测,吸光度值与样品中的CAP浓度成反比。试验结果表明,该方法在0.025~2ng/ml范围内相关系数（R2）大于0.995,检测下限0.02 μg/kg,回收率为78.2%。     

Selection for Fusarium head blight resistance in early generations reduces the deoxynivalenol (DON) content in grain of winter and spring wheat

Fusarium head blight (FHB) results in yield losses and contamination of kernels by mycotoxins, particularly deoxynivalenol (DON). For minimizing DON content in grain, indirect selection methods would increase gains from selection compared to the costly and time‐consuming DON analysis. The aim of this study was to examine whether an early selection for fewer FHB symptoms would lead to a reduced DON content in grain after inoculation with Fusarium culmorum. Starting with a double‐cross derived population of about 1,100 genotypes, 30 F_1:3 genotypes were selected for FHB rating in a two‐step selection in spring wheat with the non‐adapted resistance sources CM82036 and ‘Frontana’. In winter wheat, 30 F_1:2 genotypes were selected out of a double‐cross derived population of about 600 F₁ plants from crosses with German resistance sources (‘Dream’, G16‐92). Selected genotypes were grouped in three categories according to their FHB rating (low, moderate and high) and analysed afterwards for grain DON content. The three groups differed in their DON content illustrating that indirect selection should already be feasible in the earliest generations. Because of the wide genotypic ranges for DON contents within one grouping, a final DON analysis for selected materials is advisable to achieve full selection gain.     

双抗夹心酶免疫法检测转Bt基因抗虫棉种子的研究

 应用中国农业大学化控中心筛选的抗Bt Cry1Ac蛋白鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了Bt Cry1Ac蛋白的双抗夹心酶联免疫检测法（Sandwich ELISA）。该方法的检测范围为0.78~50.0 ng·g^-1,线性回归方程y=0.6634x-1.7387,决定系数为0.992。该方法与国外商业化试剂盒检测结果完全一致,可用于转基因抗虫棉Bt毒蛋白定性和定量检测。采用所建立的方法对亲本之一为非转基因抗虫棉的杂交F₁、F₂种子进行检测,结果F₁全部为阳性,F₂阴性和阳性数量比为1∶3,符合性状分离定律;此外,模拟检测种子的偶然基因改造成分混杂（Adventitious Presence,AP）检测结果为：对于Bt毒蛋白含量在140 ng以上的单粒种子,最低检测比例为1∶110。     

GA1,3,4,7酶联免疫检测法（ELISA）的建立

用碳二亚胺法将赤霉素Ａ４与卵清蛋白连接，形成ＧＡ４－ＯＶＡ复合物用于包板，利用ＧＡ４－Ｍｅ与ＧＡ４－０ＶＡ对兔抗ＧＡ４－ＰＡｂｓ竞争结合反应，建立了ＧＡ１，３，４，７间接酶闻免疫检测法。其灵敏度，检测范围和最小检测样品量分别为４５ｐｇ，０．２－２００ｎｇ和５０－５００ｍｇ，样品的平均回收率为９７％，批内和批间的变异系数分别为４．２％和４．８％。     

棉花黄萎病菌毒素ELISA检测方法的建立及其应用

以纯化的棉花黄萎病菌毒素(PLPC)免疫新西兰白兔制备了PLPC特异性抗血清,建立了可特异性检测棉花黄萎病菌毒素的A蛋白双抗体夹心ELISA方法。应用建立的ELISA方法测定了病菌培养滤液、人工接种幼苗和大田病株不同组织中的毒素,结果表明:不同产毒能力菌株(VD 8和VD-5)在25℃下振荡培养3d后就能在培养滤液中检测到毒素,这比生物测定要早2～3d。将VD-8菌株的孢子以灌根方式接种泗棉3号幼苗5d后,就能从接种幼苗的茎杆和叶柄中检测到毒素,这比幼苗自然发病显症要早3～5d。在测定的30份大田病株茎杆、叶柄、叶脉样品中,阳性样品率为100%。这些结果表明建立的ELISA方法可用于菌株产毒能力的测定和大田棉花黄萎病的早期诊断。