日本的牛受精卵移植技术

一、牛受卵移植技术的发展。阐述了日本从1964年起至现在的几个主要研究阶段和具体步聚,尤其是从1973年起的十年计划,着重解剖在各阶段所取得的研究成果和存在的问题。最后提出日本当今所取得的几项指标性结果,如在日本非手术法采卵技术已趋于定型化,平均回收受精卵数7.0个以上,采卵率70～80%,受胎率50～60%。近来冷冻受精卵的受胎率,大约为30%,有关组织机构相继成立。二、牛受精卵移植技术的概述。阐述了牛受精卵移植的几大主要步聚,如超数排卵处理,受精卵的回收方法,受精卵的鉴定分类方法,受精卵移植方法等。三、值得重视的几个问题。主要介绍冷冻胚胎移植情况,如冷冻方法,保护剂的变更以及装有电脑制卸装置的受精卵冷冻装置。附带介绍了利用自然发情排卵的受精卵移植方法及移植时的细菌感染预防法。     

日本畜禽养殖新技术

一、培育双胞胎牛的新技术过去培育双胞胎牛的方法主要是将牛的受精卵培育后用手术刀将受精卵切成两半。由于包裹受精卵的透明膜有很强的弹性,在切割时很容易使受精卵受伤。最近,日本东北农业试验场采用的新方法是在包裹受精卵的透明膜上打一个直径30微米的小孔,受精卵产生细胞     

日本养殖新技术

1.培育双胞胎牛的新技术 据日本<畜产的研究>报道,过去培育双胞胎牛的方法主要是将牛的受精卵培育后用手术刀将受精卵切成两半.由于包裹受精卵的透明膜有很强的弹性,在切割时很容易使受精卵受伤.     

日本开发出繁殖双胞胎牛新技术

过去培育双胞胎牛,主要是用手术刀将经过培育的受精卵切成两半,由于包裹受精卵的透明膜有很强的弹性,在切割时很容易使受精卵受伤。最近,日本东北农业试验场采用在包裹受精卵的透明膜上打1个直径为30微米小孔,受精卵进行细胞分裂后会从孔中冒出膜外。当从孔中长出的细胞有原受精卵的1／2大小时,从水滴状的细部黏膜处切割,就可分离出新的受精卵。采用这种切割方法可使双胞胎牛的育成率从原来的10％～20％提高到50％。     

日本开发出繁育双胞胎牛新技术

过去培育双胞胎牛的方法主要是用手术刀将经过培育的受精卵切成两半。由于包裹受精卵的透明膜有很强的弹性,在切割时很容易使受精卵受伤,影响胚胎的生长发育,双胞胎牛的育成率较低。日本东北农业试验场采用一种新的切割方法培育双胞胎牛。该方法是：在包裹受精卵的透明膜上打一个直径为30微米的小孔,受精卵进行细胞分裂后会从孔中冒出膜外形成水滴状。     

牛胚雌雄性的准确判定法

伊藤利用基因工程进行牛雌雄性判别获得成功,准确率接近100％。 首先,从牛受精卵数次分裂后的胚中取出部分细胞。若受精卵为雄性,则细胞中性染色体具有雄性固有的碱基顺序。因此,利用大量复制特定碱基顺序的PCR(多聚酶连锁反应)法,根据细胞中是否存在雄性染色体固有的碱基顺序,即可准确判定受精卵的雌雄,再将经过性别判定的受精卵移植入牛的子宫即可。     

牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究

【目的】研究牛胎儿睾丸支持细胞对牛早期胚胎的体外发育是否有促进作用。【方法】从屠宰场采集5~7月龄胎牛睾丸,经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)饲养层,对比原代和传代胎牛睾丸SCs与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况;分别以4×104,2×104mL-1两个密度接种传代胎牛睾丸SCs与牛受精卵体外共培养,并以培养液中无牛胎儿睾丸SCs饲养层为对照,研究体外牛胎儿睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)对牛受精卵体外发育的影响。【结果】与牛受精卵体外共培养时,接种密度为2×104mL-1传代胎牛睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率(79.3%)高于原代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组(69.2%),但差异不显著(P>0.05);囊胚发育率(41.3%)极显著地高于原代SCs饲养层共培养组(16.7%)(P<0.01)。接种密度为4×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率大于接种密度为2×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组,但差异不显著;胚胎发育率极显著地低于接种密度为2×104mL-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组。【结论】制备的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层,能有效促进牛体外受精卵的体外发育,提高囊胚发育率;接种的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大,将严重影响牛体外受精卵的发育。     

乳牛受精卵移植的实用试验

为了增殖乳牛,我们进行了受精卵的移植试验,把13头荷兰种用经产牛,作超数排卵处理,在发情后6—9日进行非手术回收受精卵,且将形态正常的44个回收卵经短程运输,供移植用。受体母牛是与供体母牛同期发情(日差前后在1日以内)的荷兰种44头处女乳牛。6个技术员作移植的术者。无论是采用肷部手术法或颈管导入法,均为一个受体移植一个受精卵子,且是移植在黄体存在侧的子宫角内。结果44头中18头(40.9％)确诊受胎。尤其颈导管入法,6个技术员中尽管5个人为初次移植,但移植的41头中有16头妊娠(39.0％)。因此把它作为简易移植法,是有实用意义的。 牛的受精卵移植,在海外已被广泛使用。本邦由杉江等创立非手术技术,且得到许多产仔。另外,近几年还见到以北海道为中心的一些报告。 这些作者们,至今所作的报告都是关于以经产牛作供体母牛,由特定的技术员作术者,所作移植试验的结果。和这些试验同期,我们从农林水产新冠种畜牧场荷兰种育种用基础母牛回收受精卵,运送到本省日高畜牧场,对荷兰种育成母牛作移植。试验从1978年8月开始到1980年10月止,连续约二年时间,的确以优良经产牛作供体母牛,达到了增殖产仔的目的。并且在试验中几个技术员都能进行移植。现将试验报告如下:     

科技

日本培育双胞胎牛新技术 日本东北农业试验场采用一种新的切割方法，在包裹受精卵的透明膜上打一个直径为50微米的小孔，受精卵进行细胞分裂后从孔中冒出膜外，形成水滴状。当从孔中长出的细胞有原受精卵的1／2大小时，从水滴状的细部黏膜处切割，从而分离出新的受精卵。采用这种切割方法，可使双胞胎牛的育成率从原来的10％-20％提高到50％。     

盐度、pH对达里湖瓦氏雅罗鱼受精卵孵化的影响

2007年5月6日从贡榕尔河河道中采取达里湖瓦氏雅罗鱼受精卵,5月7—27日在实验室中按照岗更湖水的水化成分,利用在曝气后的自来水中加入NaCl、MgSO4、MgCl2、NaHCO3逐级配制成不同盐度、不同pH值的孵化水体进行瓦氏雅罗鱼受精卵盐度梯度、pH梯度孵化试验,测定瓦氏雅罗鱼受精卵对盐度和pH值的耐受性。结果表明：达里湖瓦氏雅罗鱼受精卵的孵化对水质要求较苛刻,孵化水体的优劣是孵化成败的关键,不单纯取决于盐度、pH两个因子的量,对孵化率的影响是盐类之间及与pH联合毒性作用的结果;自来水的水质对受精卵孵化也有很大影响;应有正确的受精卵采收方法;以引种移植受精卵的方式进行瓦氏雅罗鱼引种移植是比较好的、高效的方法。     

新书简介

牛的卵移植本书是1975年12月在英国召开的有关牛卵移植问题的一次小型国际讨论会的论文集。书中收入27篇论文,详细论述了牛卵移植中的各种关键性的技术问题。如超数排卵、受精卵的采集、卵子的体外保存、卵移植的方法、同期发情,以及卵移植的实用价值等。书中突出了当前最新技术成就——受精卵(或胚胎)的冷冻保存和体外受精问题。最后对     

不同培养体系对牛卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨适合于牛卵母细胞体外受精以及受精卵体外培养的最佳培养体系。[方法]通过对成熟的牛卵母细胞分别采用传统培养体系（对照组）和过渡培养体系（试验组）进行体外受精和受精卵体外培养,研究了不同组合的培养体系对受精率和卵裂率的影响。[结果]以受精液为TALP液,受精卵培养液为60%TALP液＋40%M-199液＋5%FCS的过渡培养体系能够提高牛体外成熟卵母细胞的受精率和卵裂率,分别为77.8%和55.6%。[结论]受精液为TALP液,受精卵培养液为60%TALP液＋40%M-199液＋5%FCS的过渡培养体系为牛卵母细胞体外受精以及受精卵体外培养的最佳培养体系。     

牛冷冻胚胎品质及其移植效果的初步探讨

本研究着重于牛冷冻胚胎的主要技术环节之——受精卵的鉴别与胚胎移植成功率的关系。从1985年至1987年期间,对60枚新鲜受精卵、29枚冷冻受精卵进行了品质鉴定,并将化冻后经鉴定的受精卵移植于15头受体母牛,其结果 A 型受精卵的移植成功率达83%,B 型受精卵的移植成功率达57%,C型受精卵和 D 型受精卵均未得到成功。     

牛胚胎移植技术

牛胚胎移植是指对生产性能优良和遗传性稳定的母牛,经过超数排卵处理后,将多出自然排卵数几倍的受精卵取出,分别移植到生产性能较低和遗传性差的母牛子宫内,使其着床、妊娠,并产出优良后代的技术。2000～2009年,台安县畜牧技术推广站对牛胚胎移植技术的各个环节深入试验研究,共超排供体牛10头,冲胚100枚,引进加拿大纯种胚胎300枚,     

牛胚胎移植在养牛业上的应用

牛胚胎移植技术是对生产性能优良和遗传性稳定的母牛经过超数排卵处理后,将多出自然排卵数几倍的受精卵取出,分别移植到生产性能较低和遗传稳定性差的母牛子宫内,使其着床、妊娠、并产出优良后代的技术。目前主要在以下几方面应用。     

关于猪受精卵移植技术的开发

1951年猪的受精卵移植与牛的受精卵移植同时获得成功。然而,由于猪是多胎家畜,子宫长且子宫颈管构造复杂,所以猪的受精卵移植只是停留在繁殖生理上的研究,畜牧方面的研究进展不大。但由于伪狂犬病的发生其预防学上的必要性和作为高效率的育种改良以及向闭锁群的优良遗传基因的导入方法,倒认为有应用价值。近年来,猪的受精卵移植也盛行起来。而实际应用方面,1974年美国的无特     

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎

为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。     

牛受精卵移植在应用

一.序言十多年前,日本兽医师会杂志[第21卷第6号233～239页(1969)]刊登了杉江的题为《家畜的人工受胎》的综述一文,详细地介绍了人工受胎的历史及其技术的发展,诱发超数排卵、受精卵的采集、保存和培养及受精卵的移植以及其他问题。本文将不重复杉江的综述内容而要对其后发展的情况做个综述,特别是在1972～1973年间牛的受精卵移植被实     

乌龟受精卵控温孵化技术研究

2010—2012年,利用控温技术对乌龟的受精卵孵化进行了初步试验,结果表明:控温提高乌龟受精卵孵化率,主要在于受精卵的收集方法、受精卵收集后暂放置、选择排放、控温控湿等技术环节;试验收集龟卵时间为6:00—12:00,龟卵运回室内晾干后,暂放入蛭石护卵箱,待5~6 d,取受精卵转入孵化箱,控制气温32~34℃、水温30~32℃,保持孵化箱蛭石的湿度,55~60 d相继孵出稚龟,孵化率平均达到98%。     

哺乳动物受精卵的冷冻保存

序言有关哺乳动物受精卵冷冻保存的研究,主要是由实验用小动物开展起来的,其研究历史较短。50年代,Ferdow 等人初次成功地把冷冻家兔受精卵发育成仔胎,到70年代,Whittingham 从完全新的概念出发揭示了小白鼠胚胎冷冻保存的可能性,并于1972年发表了从小白鼠冷冻以及解冻胚胎育仔的论文。与此同时 Wilmut 的小白鼠冷冻胚胎育仔也告成功。这些业绩鼓舞了其他研究者,从而这几年的研究有了显著的进展。第二年 Wilmut 报告了牛冷冻胚胎的成功事例,从而得到了同家畜精子冷冻保存的成功相媲美的赞誉。这就启发了在超低温条件下受精卵长期保存的可能性,而在小白鼠胚胎上已设想了《胚胎银