广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

结合流行病学、临床症状、病理变化，采用PCR技术，对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型（PCV2）感染发病猪场的197份组织病料（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测；同时，对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）的检测，另外，对6个地（市）11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品（脾、肺、淋巴结）进行了PCV2检测。结果显示，在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份，平均阳性率为54．82％（108／197），阳性猪场62个，平均阳性率为63．92％（62／97）。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42．13％（83／197），混合感染的猪场总阳性率为57．73%（56／97）。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2，阳性率为7．10％。由此可见，PCV2感染在广西猪群中已普遍存在，混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。     

青海贵德地区猪圆环病毒2型感染调查

为了解青海贵德地区猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)的感染状况,本研究应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采自该地区2个猪场的73份血清样品进行了PCV2抗体检测,采用荧光PCR技术对45份猪病料样品进行了PCV2病毒核酸检测。结果显示:PCV2抗体检测的平均阳性率为95.89%,猪病料PCV2病毒核酸检测的阳性率为100%。     

四川省部分地区猪圆环病毒2型流行病学调查

以四川省7个市县地区14个猪场为研究对象,采集疑似圆环病毒2型感染的死猪、病料、精液、血样等样品181份,进行PCR检测。结果显示:猪圆环病毒2型(PCV2)阳性有89份,阳性率49.2%;14个规模化猪场中均检测出了PCV2阳性。在死亡的43头猪中有21头PCV2阳性。病料中PCV2的阳性检出率54.0%。该病在春夏季节感染率最高,并存在病毒混合感染和继发细菌感染情况。根据临床症状和病理变化分析,大部分猪场因感染PCV2而致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS),其中遂宁市和绵阳市的6个规模化猪场中检测到PCV2感染所引起的猪皮炎肾病综合征(PDNS)。结果表明,四川省部分地区的规模化猪场中已经广泛存在猪圆环病毒2型感染。     

断乳仔猪多系统衰竭综合征的病原学调查

此试验针对临床具有断乳仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）症状的猪只进行病原调查。2002年3月至2005年3月，在黑龙江省大庆、靠河寨和吉林省公主岭3个地区1～25周龄的猪群中，选择临床出现生长迟缓、停滞，呼吸困难、皮肤苍白和曾经具有此类症状并已死亡的猪只．采集病料共194份，通过聚合酶链反应（PCR）扩增Ⅱ型猪囤环病毒（PCV2）基因组的特异序列片断．扩增产物长度为900bp／470bp，检测病毒。结果发现．PCV2的总阳性率为21．1％（41／194）．不同地区的检测结果不同，2002年，大庆某猪场发病猪中PCV2检测阳性率为5．1％（4／78）．靠河寨某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为11．5％（9／78），2004年．公主岭某猪场发病猪中PCV2检测的阳性率为73．7％（28／38）。结果表明，临床发生PMWS症状的猪只．应用PCR法检测PCV2阳性率差别较大。病原学调查显示，在我国PMWS发生与多种因素相关，不仅仅是PCV2感染．PCV2感染与PMWS密切相关，但并不是出现PMWS症状的猪都发生PCV2感染．在未检测到PCV2的情况下．仍有PMWS发生。     

猪圆环病毒病血清学调查及病原分析

本文采用ELISA法对龙岩市的5个县、区10个猪场送检的315份血清进行猪圆环病毒病血清学调查。结果表明猪场PCV抗体阳性率为80％，猪群的阳性率为48．9％，种猪阳性率为69．3％，育肥猪阳性率为50．5%．仔猪阳性率为21．1％；同时。我们还应用PCR法对猪场送检的两份病料进行了猪圆环病毒的病原学分析。结果1份为阳性，1份为阴性。     

猪蓝耳病和猪Ⅱ型圆环病毒病感染的荧光PCR检测报告

笔者从乌鲁木齐市动物疾控中心门诊接诊的猪病病例中随机挑取了10份病料,根据畜主叙述的临床症状及病理剖解变化,采用实时荧光PCR方法对病料样品进行了猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)与猪细小病毒(PPV)的检测.结果显示,样品中PRRSV阳性率60%,PCV2阳性率80%,CSFV与PPV全为阴性,猪蓝耳病(PRRS)和猪Ⅱ型圆环病毒病(PCVD)混合感染率60%,本试验为乌鲁木齐市猪病的防控提供了科学依据.     

贵州省猪圆环病毒Ⅱ型感染的PCR检测

为从病原学检测方面了解猪圆环病毒Ⅱ型在贵州的感染情况,采集贵州省9个集约化养猪场和养猪专业户断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMW S)疑似发病猪组织病料137份,用针对猪圆环病毒Ⅱ型设计的特异性引物进行特异性目的基因片段的扩增,紫外光下观察,以420 bp处出现目的条带确定为阳性。结果表明,检出阳性病料77份,阳性率为56.2%,表明猪圆环病毒Ⅱ型感染在贵州省猪群中普遍存在。     

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型（PCV2）抗体。结果显示，所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在，161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86．95％。从上述样品中随机抽取28份样品，用PCR方法检测了PCV2ORF1基因；结果，从13份血清中扩增到了特异性PCV2ORF1基因，阳性率为46．42％。证实，西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。     

规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

20 0 1年 11月至 2 0 0 2年 8月 ,对北京、天津、广东、深圳、山东、山西等地 12个规模化猪场猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染发病群猪进行了临床发病情况调查 ,并采用 PCR方法对所收集的 5 5份组织病料进行 PCV2的检测 ,结果表明 ,12个猪场中有 11个猪场发病猪群表现为断奶后多系统衰竭综合征 ,1个猪场表现为皮炎和肾病综合征。由此可见 ,PCV2感染在我国规模化猪场已普遍存在     

猪圆环病毒病的检测评估及防控措施

以某猪场为调查对象,采取猪群血清,ELISA检测结果显示在被检的27份血清中有33.3%为PCV抗体阳性,对该场进行临床病症调查,并采取可疑猪群病料通过PCR诊断,证实该场是否存在猪圆环病毒野毒感染,其结果为阳性,则制定紧急防控计划,用PCV-2疫苗进行防控并追踪调查检测血清,该场的发病率明显降低,PCV抗体检测阳性率下降,且PCR诊断结果为阴性,表明了正确评估猪圆环病毒抗体检测(ELISA)结果并结合PCR诊断对分析猪场PCV疫情有重要意义。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株毒力分析

本研究对367份猪内脏样本进行PCV2检测,对阳性样本进行2a/2b鉴别诊断,并采用ORF2测序方法对部分阳性样本进行测序。在发病猪群中PCV2b阳性率远高于健康猪群,而健康猪群中PCV2a的阳性率高于发病猪群,从而在临床表型方面论证了PCV2b毒力强于PCV2a。通过比较12株PCV2 ORF2推导氨基酸序列的关键氨基酸位点,9株PCV2b毒株在ORF2氨基酸76位为I,131位为T;而3株PCV2a毒株在ORF2氨基酸76位为L,131位为P,据比对结果可知,PCV2b毒株为强毒株,PCV2a毒株为弱毒株。研究结果表明,PCV2的2种亚型2a/2b无论是临床表型还是ORF2基因型,毒力表现都是有差异的,且PCV2b毒力要强于PCV2a。     

Detection of porcine Circovirus type 2 (PCV2) variants PCV2-1 and PCV2-2 in Brazilian pig population

In the present study whole genome of six Brazilian isolates of PCV2 were sequenced, analyzed and compared with 35 other sequences (24 from other countries and 17 from Brazil). The phylogenetic analysis showed that mostly Brazilian variants of PCV2 were grouped as PCV2-1. Two isolates among the six analyzed here could not be grouped with any other PCV2-2 analyzed in this study. One of these isolates was from an aborted fetus with myocarditis and the other from a PMWS affected pig. The results pointed here showed that both groups of PCV2 are present in Brazilian pig population without any clear geographical correlation.     

Effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccination on PCV2-viremic piglets after experimental PCV2 challenge

The objective of this study was to evaluate the effect of porcine circovirus type 2 (PCV2) vaccines on PCV2-viremic and -seropositive piglets born from naturally PCV2-infected sows against postnatal PCV2 challenge. The experimental design was aimed at mimicking commercial swine rearing conditions to evaluate the response of the PCV2 vaccine on PCV2-viremic and -seropositive piglets after experimental PCV2 challenge. PCV2a (or 2b)-viremic piglets received a PCV2 vaccine at 21 days of age followed by a PCV2b (or 2a) challenge at 49 days of age (28 days post vaccination). The PCV2 vaccines elicited a high level of humoral (as measured by immunoperoxidase monolayer assay and neutralizing antibody titers) and cellular (as measured by the frequency of PCV2-specific interferon-γ-secreting cells) immune response in the PCV2-viremic piglets after vaccination even in the presence of maternally derived antibodies (MDA). The initial infection of PCV2 in the pigs was not affected by PCV2 vaccination, however the challenging PCV2 was reduced by PCV2 vaccination on PCV2-viremic pigs. The results from this study demonstrate that the PCV2 vaccine used in this study is effective at reducing PCV2 viremia and lymphoid PCV2 DNA, even for PCV2-viremic pigs with passively acquired MDA at the time of vaccination.     

猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应

为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。     

H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响

研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。     

过氧化氢对成肌细胞的氧化损伤作用研究

旨在以体外培养的小鼠成肌细胞(C2C12)为研究对象,探讨氧化损伤可能的路径。本试验分为3个处理组,每个处理组6个重复。处理组分别为:对照组(Control),以DMEM培养基培养的细胞作为空白对照,培养24 h;吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)组(PDTC),以每个孔1 mL的PDTC(20μmol·L^-1)孵育细胞24 h;H_2O_2组(H_2O_2),加入0.5 mmol·L^-1的H_2O_2处理细胞24 h。检测各组细胞的存活率、ROS水平与凋亡率,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印记法检测细胞凋亡和自噬相关基因的表达以及NF-κB信号通路相关因子的表达。结果表明,与对照组相比,PDTC可显著提高细胞的总凋亡率(P<0.05),可显著上调细胞半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-6、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P<0.05),显著上调Beclin 1的mRNA表达量和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/I的值以及LC3-II蛋白表达水平(P<0.05),显著下调核因子kappa B副族1(p50)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、v-rel禽网状内皮增生病病毒癌基因同源物A(RelA)和环氧合酶(Cox)-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平(P<0.05);H_2O_2可显著提高细胞的ROS水平和细胞总凋亡率(P<0.05),可显著上调caspase-3、caspase-6、caspase-8、caspase-9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平(P<0.05),显著上调Beclin 1和LC3-II/LC3-I的mRNA表达量以及LC3-II蛋白表达水平(P<0.05),显著提高Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达量(P<0.05),显著下调p50、Bcl-2、RelA和Cox-1、Cox-2的mRNA表达量以及核因子kappa B(NF-κB)蛋白表达水平(P<0.05)。结果提示,H_2O_2会引起C2C12细胞的ROS升高,并且能够通过抑制NF-κB信号通路介导细胞凋亡和自噬的发生,这与NF-κB因子的特异性抑制剂PDTC的作用相类似。