鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis，DVH)是雏鸭的一种高度致死性的病毒性传染病，以发病急、传染快、病程短、死亡率高为主要特征。临床表现痉挛抽搐和角弓反张等神经症状，病理变化以肝脏肿大和出血为DVH特征性病变，DVH严重影响养鸭业的发展。引起DVH的病毒有3个血清型，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型(古典型)鸭肝炎病毒最     

1株鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

鸭病毒性肝炎(DVH)是雏鸭的一种急性传染病,引起该病的病毒有3个血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型.Ⅰ型(古典型)鸭肝炎病毒最早于1950年从美国分离到,并分布于世界各养鸭国家;Ⅱ型鸭肝炎病毒最早于1965年在英国分离到,并且主要发生于英国,Ⅱ型病毒与Ⅰ型病毒无抗原相关性;Ⅲ型鸭肝炎病毒于1969年发现于美国纽约市长岛地区,并一直局限于该地区,Ⅲ型病毒与Ⅰ型病毒之间亦无抗原关系[1,2].     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

从福州某鸭场大批发病和死亡的15～20日龄雏鸭肝脾中分离到1株病毒，该病毒无血凝性，可使4日龄健康鸭90．6％发病、62．5％死亡，利用Ⅰ型鸭肝炎病毒（DH）标准血清进行鸡胚中和试验和血清被动免疫保护试验，证明该分离的病毒株为I型DHV。     

鸭病毒性肝炎病毒分离和血清型鉴定

从巢湖麻鸭病雏肝脏悬淮中分离出一株鸭肝炎病毒（称DHV－A）毒株），经用Ⅰ型鸭肝炎病毒抗血清通过中和试验进行鉴定，证明为Ⅰ型DHV。     

新型鸭肝炎病毒的分离鉴定

对从广东地区流行鸭肝炎病例中分离到的1株病毒(命名为"GD株")进行了鸭胚(DE)传代培养.DE2～DE6代鸭胚毒的ELD50在10-5.17/0.2 mL～10-6.38/0.2 mL之间.DE6代毒回归雏鸭后可以产生与1型鸭肝炎病毒(DHV)相同的临床症状和解剖病变.鸭肝组织毒对4日龄、8日龄和16日龄雏鸭的LD50分别为10-6.5/0.5 mL、10-5.38/0.5 mL和10-4.83/0.5 mL.病毒对氯仿、乙醚和胰酶不敏感,能够耐受pH3.0酸处理,62℃30 min不能被完全灭活.病毒核酸类型鉴定为RNA病毒.生物学和理化学特性鉴定结果表明,GD株为强毒DHV.使用标准1型DHV阳性血清进行的交叉中和试验和交叉被动保护试验表明,GD株病毒在抗原性上与1型DHV无关.对DHv抗原相关的VP1基因序列分析和同源性比较表明,GD株与DHV-1的VP1核苷酸序列同源性为69.82%,氨基酸序列同源性为71.77%.GD株属于一种在我国流行的新型DHV强毒(暂命名为"CN-DHV").     

鸭肝炎病毒的分离鉴定

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,接种9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓,胚爪发育畸形,肝脏变绿。分离病毒接种2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100%发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没有观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型鸭瘟病毒(DHV)标准血清所中和。应用RT-PCR方法对病鸭的肝脏悬液及鸭胚尿囊液进行检测并测序,证明所分离病毒为I型DHV。     

河北省鸭肝炎病毒的分离鉴定和病毒的细胞培养

从某鸭场疑似鸭病毒性肝炎的发病雏鸭及病死雏鸭肝脏中分离到1株病毒，经鉴定为鸭肝炎病毒。利用鸭胚肝细胞培养病毒，呈现典型CPE，向细胞维持液中加入1％的鸭胚尿囊液，CPE的维持时间可延长至60小时。将病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭．其致病力不见明显减弱。     

鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定

本试验通过鸡胚尿囊腔接种,对河北省保定地区采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得1株病毒,经病理学检查、电镜观察、理化特性试验、中和试验、PCR检测、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV),命名为BD-Ⅰ株.     

山东省Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离鉴定

为了研究鸭肝炎的发病原因,试验从山东省发病鸭场中分离到6株鸭肝炎病毒,并进行了鉴定.结果表明:分离病毒ELD50为1×10-4.12～1×10-5.25/0.2 mL.     

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

采自淄博市的桓台、高青、临淄疑似鸭病毒性肝炎且临床病理变化明显的病死雏鸭肝脏,经病毒分离、鸡胚接种、病毒纯化后,进行了鸡胚中和试验、氯仿敏感试验、分离毒株ELD50测定及动物回归试验。经测定3株病毒毒价分别为105.3、105.6、105.10.2 mL ELD50。3株分离病毒经动物回归试验,对1日龄雏鸭的致死率分别为75%、87.5%和75%,而且出现了雏鸭病毒性肝炎的典型症状,呈明显的角弓反张姿态,病死鸭剖检可见肝脏肿胀,质脆易碎,肝脏有深紫红色的出血点或出血斑。结果证实分离到的病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒。     

基因C型鸭肝炎病毒的分离和鉴定

通常将鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus, DHV)分为3个血清型.1型(DHV-1)属于小RNA病毒科中为DHV-1成立的一个新属[1-3].2型(DHV-2)已被改称为鸭星状病毒1型(duck astrovirus 1, DAstV-1)[4],对其聚合酶基因部分序列的分析可支持该分类[3,5].虽然3型(DHV-3)仍被ICTV(2005)归属于小RNA病毒科[6],但其聚合酶基因亦具有星状病毒的特点[3,5],因此,不宜再将DHV-2和DHV-3称为DHV的2个血清型.     

新型鸭肝炎病毒的分离与初步鉴定

1999年 7月广西柳州等地所饲养的 2周内的北京鸭和樱桃谷鸭普遍发生一种类似I型鸭肝炎病毒的传染病 ,病死率高达 80 %～90 % ,用I型鸭肝炎高免蛋黄抗体或I型鸭肝炎弱毒苗不能治愈或预防。采集病鸭肝脏对其病原进行了研究 ,现将结果报告如下 :1　材料和方法1 .1　I型鸭肝炎病毒阳性血清和鸭瘟病毒阳性血清均由中国农业大学苏敬良博士惠赠。鸭胚购自本市健康鸭场孵化场。北京鸭购自本市健康鸭场饲养的鸭。1 .2　病料处理 :采取发病鸭的肝脏先进行细菌分离 ,然后按常规方法作成 1 :5乳剂 ,离心取上清液 ,检验无菌后备用。1 .3　病毒分离 :将…     

韩国型鸭肝炎病毒福建株的分离与鉴定

从福建省某养鸭场罹患鸭肝炎的病死鸭中分离到1株大小35～45 nm、十二面体对称的无囊膜病毒(暂命名为FJ01株),其鸭胚半数致死量(ELD50)为10~(-2.69)/0.2 mL,该病毒可被特异性韩国型鸭肝炎病毒免疫血清所中和,可被韩国型鸭肝炎病毒特异引物所扩增,而不能被1型鸭肝炎病毒引物所扩增。遗传进化分析表明鸭肝炎病毒FJ01株与韩国型鸭肝炎病毒关系密切,它们在进化树中共处一群。     

雏番鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

从洛江区临床发病鸭分离到2株病毒,2株分离病毒能够致死鸡胚,能被Ⅰ型鸭病毒性肝炎标准强毒高免血清特异性中和。分离毒株在鸡胚上传代培养,并测定ELD50分别为10-6.32/0.2 m L、10-5.49/0.2 m L;经动物回归试验,对1日龄雏番鸭的致死率分别为80%和70%,雏番鸭出现明显的角弓反张姿态,剖检可见肝脏出血斑、出血点,为鸭病毒性肝炎的典型症状,表明分离到的病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-I)。     

鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制

以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB／c小鼠，同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经特异性和重复性试验，效果良好。经一系列融合、筛选，成功获得阳性杂交瘤细胞株4株，并制备出了腹水，分别命名为285、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较高且特异性好，中和特性稍差，和两株Ⅰ型标准毒以及在山东分离到的几株病毒均有交叉反应。     

10日龄肉鸭混合感染新型鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌的病原学研究

对1例疑似鸭肝炎病毒和多杀性巴氏杆菌混合感染的10日龄肉鸭采用常规的病毒、细菌鉴定方法和RT-PCR、PCR方法分别进行病毒、细菌的分离与鉴定。病毒鉴定为新型鸭肝炎病毒,细菌鉴定为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌多杀亚种。细菌对SPF鸡的毒力试验结果显示,分离的巴氏杆菌与强毒标准株C48-1毒力相近,为强毒株。细菌对10日龄肉鸭的致病性回归试验结果表明,一定数量的该株巴氏杆菌可导致10日龄雏鸭的感染死亡。结果表明,该批肉鸭为新型鸭肝炎病毒和A型多杀性巴氏杆菌混合感染。这是国内首例从感染鸭肝炎病毒10日龄雏鸭肝脏中分离到多杀性巴氏杆菌。     

番鸭1型病毒性肝炎病毒ZJX株分离鉴定及其3D基因序列分析

本研究从广东某养鸭场发病雏番鸭肝脏中分离到1株病毒.利用RT-PCR、基因序列分析、病毒中和试验及动物回归等鉴定为1型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-1).3D基因序列分析显示,该毒株与2011年分离自黑龙江的1型DHV Du/CH/LGD/111238和Du/CH/LGD/111239分离株核苷酸同源性最高,达99.6％.分离株F3代尿囊液病毒价为105.5ELD50/0.2 mL,能够被DHV-1阳性血清中和.接种病料研磨上清的鸭胚在接种后3d～5d内全部死亡,胚体充血萎缩侏儒.该分离株人工感染3日龄雏番鸭表现为角弓反张和肝脏肿大出血等与临床病症.结果表明该分离株具有较强的致病性.     

鸭副粘病毒的分离与初步鉴定

从疑为流感的病死鸭肝、脾和肾脏中分离到1株病毒,该病毒能凝集鸽红细胞,并能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清抑制,但不能被EDS、禽流感H5、H7、H9血清抑制;电镜观察见到形态不规则、囊膜表面具有密集纤突的病毒粒子,直径100～200nm.部分生物学特性表明:该分离毒具有较强的毒力,其对鸡胚和番鸭胚的最小致死量的平均致死时间(MDT)为43.6和48.6 h;接种鸡胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞均能引起细胞病变,且该病变能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清中和,而不能被GPV、MPV、H5、EDS血清所中和.人工感染1日龄雏番鸭和50日龄鸡均可发病并能回收到病毒.上述结果初步表明该分离毒为鸭副粘病毒.     

鸭源H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

从广东各地鸭群的392份泄殖腔样本中分离到3株病毒。用琼脂扩散试验(AGP)及血凝抑制试验(HI)证实3个分离株均为H9亚型禽流感病毒(AIV)。3个AIV分离株都能凝集人、鸡、山羊、豚鼠、兔的红细胞,但不能凝集猪红细胞;所有分离株血凝素(HA)对热不稳定;60℃加热处理10 m in后,病毒失去对鸡胚的感染性;3个AIV分离株的半数鸡胚感染剂量(E ID50)分别为107.2/0.2 mL、105.8/0.2 mL和106.1/0.2 mL。