转基因棉花室内种质筛选新方法研究

为进一步改进转基因棉花室内筛选系统,使用5000mg·L^-1浓度卡那霉素分别对转Bt基因棉花和非转基因棉花品种新陆早33的种子进行卡那霉素影响侧根生成的实验研究,经过卡那霉素溶液处理的棉花种子在基质中培养5d后进行数据统计,然后分别提取生成和不生成侧根的棉花幼苗子叶DNA,进一步经聚合酶链式反应（PCR）鉴定确认。结果表明：用5000mg·L’的卡那霉素对2个品种进行筛选时,Bt棉89％有侧根形成,而新陆早33仅2％有侧根发生。PCR鉴定结果也显示有侧根生成的棉花幼苗具有卡那霉素抗性基因NPTII和抗虫基因Bt。实验结果-9预期结果一致,所以这种筛选新方法可以作为有效快捷的转基因棉花室内筛选方案。     

子叶期卡那霉素快速鉴定转基因棉花

如何高效快速鉴定外源基因的转化 ,一直是热门的探索主题。特别是对于棉花 ,随着花粉管通道法的广泛应用 ,大批量“注射”种子更需要早期、快速、高效鉴别筛选。卡那霉素抗性是目前农杆菌介导外源基因最为广泛的筛选标记 ,但是在棉花花粉管通道法导入外源基因的检测方面 ,应用不多。含有对卡那霉素抗性基因的转基因棉花 ,应该在个体生长发育的各个时期表现出对卡那霉素的抗性 ,如果在幼苗期 ,特别是在子叶平展期完成转基因抗性的鉴定 ,则不失为一种比较理想的方法。为此 ,设计了一系列实验 ,探索成功子叶期采用卡那霉素对转基因棉花早期快速…     

大规模转基因彩色棉花后代筛选方法研究

 为了验证田间卡那霉素筛选与PCR分子鉴定相结合作为大规模转基因棉花后代筛选方法的可靠性和实用性,以该方法对转基因棉花不同品种的T1至T3进行筛选研究。结果表明：不同品种对卡那霉素抗性表现有差异,在确定卡那霉素筛选最佳条件后,陇棉2号经过5.0 g·L^-1卡那霉素叶片涂抹, 0～3 d观察期;BC05经过 5.0 g·L^-1卡那霉素叶片涂抹, 0～4 d观察期;陇绿棉3号经过3.0 g·L^-1卡那霉素叶片涂抹,0～5 d观察期,可以明显识别植株是否对卡那霉素有抗性。此法快速筛选的820株阳性植株中,PCR分子鉴定有14株呈假阳性,164 株具备外源目的基因,卡那霉素筛选的准确率为20%。因此,田间卡那霉素筛选是一种快速的棉花转基因后代筛选方法,但可靠性不足,如结合目的基因PCR分子鉴定,则是一种大规模转基因棉花后代群体筛选的有效方法。     

卡那霉素浓度和喷洒时间对鉴定转Bt基因棉花的影响

目前对转Bt基因抗虫棉的检测有两方面,一是对转Bt基因抗虫棉抗棉铃虫性生物测定,一是对棉株体内Bt毒蛋白的检测。根据转Bt基因抗虫棉本身携带的含嵌合基因卡那霉素特性,国内李燕娥等人均进行了转基因抗虫棉抗虫性检测,取得了一定的进展。卡那霉素的浓度以及喷洒卡那霉素的时间不同,抗虫棉与非抗虫棉对其反应时间不同。为更有效地鉴定转Bt基因抗虫棉不耽误农时特作本试验。1浓度对鉴定转Bt基因棉花的影响2005年4月在安徽农业大学棉花实验基地进行了用喷洒卡那霉素法筛选转Bt基因抗虫棉的实验,品种是抗虫棉新棉33B,非抗虫棉中棉所35。以40…     

卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子萌发及苗期生长影响的对比

转基因抗虫棉是将能表达抗虫蛋白的基因转入到非抗虫棉中,使棉花具有一定的抗虫能力,其叶片对外源卡那霉素处理不敏感,而非转基因抗虫棉不携带嵌合基因卡那霉素,其叶片对外源卡那霉素处理敏感。本试验采用不同的卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子进行浸泡处理,并将已萌发的棉花种子种植到田间。结果表明,非抗虫棉对卡那霉素浓度的变化反应较为敏感,即萌发率和苗期成活率随卡那霉素浓度的增大而降低;而抗虫棉只有在卡那霉素浓度较大时有所反应。因此,棉花种子经适当浓度的卡那霉素处理后再种植,对抗虫棉和非抗虫棉有非常好的筛选作用。1材…     

用生物学方法研究转双价基因棉抗蚜性

新疆种植的棉花,无论是引进内地的品种还是新疆自育品种均不同程度含有外糖,棉花含外糖的主要原因是蚜虫危害,特别是秋季棉蚜分泌的蜜露污染棉纤维。因此利用转基因育种手段培育抗蚜虫的品种,是解决新疆棉花引起纺织加工粘着的关键。在棉花的抗蚜性研究中,人们多是根据棉花不同品种在田间受害程度来评价棉花的抗虫性,但这种方法随机性较大,有时难免不能代表棉花的真实抗性。为提高鉴定的快速准确性,本文从蚜害指数、蚜虫的体重、排蜜频率与抗蚜性关系进行研究,为解决转基因棉的抗蚜性鉴定和培育抗蚜性品种提供依据。1材料和方法1.1材料实验…     

卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子萌发及苗期生长影响的比对

转基因抗虫棉是将能表达抗虫蛋白的基因转入到非抗虫棉中,使棉花具有一定的抗虫能力,其叶片对外源卡那霉素处理不敏感,而非转基因抗虫棉不携带嵌合基因卡那霉素,其叶片对外源卡那霉素处理敏感.本试验采用不同的卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子进行浸泡处理,并将已萌发的棉花种子种植到田间.     

抗虫棉田间去杂——卡那霉素喷雾法

近年来,转基因抗虫棉在我国越来越受欢迎,在黄河流域等棉区甚至出现了非抗虫棉不种的现象.目前我国大面积推广的都是以抗卡那霉素基因作标记基因的转基因抗虫棉.在科研和生产中,田间鉴别是否抗虫棉,除观察形态外,一般采用卡那霉素涂叶测定法,在棉花苗期或生长旺盛期,用卡那霉素溶液涂抹嫩叶,数天或十多天后观察叶片是否有变色反应来进行判别.如叶面涂药处出现黄斑,则为非抗虫棉,叶片无变色反应者,则为抗虫棉.此类抗虫棉的去杂工作即可据此进行.     

子叶期喷施草铵膦对转基因抗草铵膦棉花生长发育的影响

转基因抗除草剂棉花的种植扩大了除草剂的应用范围,但其对靶标除草剂的耐受性及安全性问题需进行综合评价。本研究在转基因抗草铵膦棉花的子叶期喷施农药登记推荐剂量的中剂量（900 g·hm^－2）、2 700 g·hm^－2、8 100 g·hm^－2的草铵膦,系统地评价了草铵膦对转基因抗草铵膦棉花生长发育的影响。结果表明,喷施8 100 g·hm^－2草铵膦后短期内对转基因抗草铵膦棉花叶片叶绿素相对含量（SPAD）值和苗期蚜虫发生数量有一定影响,但随着棉花恢复正常生长,喷施14 d后转基因抗草铵膦棉花叶片SPAD值、Cry1Ac蛋白含量、苗期蚜虫数量与对照无显著差异,后期棉花的生长发育、产量及纤维品质所受影响不大。因此,转基因抗草铵膦棉花在子叶期对草铵膦的耐受性较高。     

转基因棉花品种类型与发展前景展望

阐述了中国现有转基因棉花的类型有抗虫转基因棉花、抗除革剂棉花、抗病转基因棉花、抗逆转基因棉花及品质改良转基因棉花等。分析了各类型转基因棉花的转育方法和取得的进展,并对特基因棉花的发展进行了展望。     

转基因抗蚜虫棉花新种质的培育

介绍了外源抗蚜基因导入棉花的研究结果,温室内苗期共检测出75棵抗蚜单株.应用PCR技术对其进行分子检测,结果表明70个样品出现阳性扩增,阳性扩增率为93.3%.与受体品种相比,转基因抗蚜棉单株蚜虫着生量仅为受体品种的20%～50%,蚜害指数减退率分别比受体品种减少65.13%～82.23%,表明转基因抗蚜棉大田期的抗蚜作用明显.     

转基因棉花纯度快速测定法

转基因棉花纯度快速测定法李燕娥焦改丽李淑君吴霞范小平陈志贤郭三堆①山西省农科院棉花所运城０４４０００运用转基因棉花本身携带的含嵌合基因卡那霉素（Ｋｍ）,探讨出了一套简便、省时、价格低廉、结果可靠的转基因棉花纯度快速测定方法。１测定方法。将转基因棉花...     

转Bt基因棉卡那霉素田间快速检测法

对转Bt基因棉对卡那霉素不同时期、不同部位、不同浓度的反应及其与棉花抗虫性的关系进行了较系统的研究。结果表明,棉花顶部第2片叶为卡那霉素涂抹的最适宜叶,田问卡那霉素涂抹反应与室内抗性生测结果吻合率高,且不同时期结果一致。说明棉花田间抗卡那霉素反应能够准确检测转Bt基因抗虫棉,可以作为一种快速、简便的田间检测转Bt基因棉的方法。     

转抗病基因棉花的培育研究初报

目前,我国棉花主产区相当一部分为重茬地,棉花黄萎病不断蔓延和增长,对棉花生产造成了很大的威胁,部分重病棉田因病产量损失严重,纤维品质下降,经济损失大,直接制约农村经济的发展和农民的收入。如何解决抗病性,成了棉花基因工程研究的新课题。1材料来源采用基因工程技术获得β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因双价植物表达栽体GO、GCE转化棉株。在田间对转化植株进行卡那霉素抗性检测及多代抗病性筛选,获得性状优良的抗病转基因棉花品系材料15个。2结果与分析2.1转抗病基因材料病圃抗病性检测。2003、2004年将田间选育的纯合转抗病基因棉花品…     

转基因棉花在生产应用上的风险与安全控制

针对转Bt基因抗虫棉在各棉区广泛种植的现状,分析了转外源基因棉花在生产应用上存在抗除草剂棉花可能成为杂草、基因漂移威胁棉花近缘物种、转基因棉加速害虫的抗性进化、对非靶标有益生物的影响、转基因棉花对土壤生态环境的影响等风险,提出培育种植转多基因棉花、调控外源基因表达、设置棉花害虫＂庇护所＂、轮换种植不同类型的转基因棉品种、建立转基因棉花害虫综合治理技术体系等转Bt基因抗虫棉的安全控制措施。     

玉米抗蚜遗传研究进展

蚜虫是危害玉米生产的主要害虫之一,在我国危害玉米的蚜虫主要是玉米蚜(Rhopalosiphum maidis Fitch)。近年来在北方春玉米区、黄淮海夏播玉米区玉米蚜虫的危害呈上升趋势。玉米抗玉米蚜种质资源不丰富,迄今未发现对玉米蚜完全免疫的玉米材料。玉米对玉米蚜虫的抗性遗传机制比较复杂,多表现为隐性遗传,由1对基因、两对基因、两对互补基因和多基因控制。目前仅定位了少数抗蚜性位点,对玉米抗蚜性产生的生理生化机理进行初步探讨。     

转GNA基因小麦新株系的分子检测和抗蚜虫性鉴定

为了进行抗蚜虫转基因小麦的研究，将人工合成的雪花莲凝结素(Galanthus nivlis agglutinin．GNA)基因通过基因枪转入优质小麦品种郑州9405的幼胚愈伤组织，经过在选择培养基上多次筛选，从360块被轰击的愈伤组织中再生到1株Bialaphos(除草剂)抗性植株，命名为G郑州9405。通过连续2代对转化株系进行PCR、Southern检测和蚜虫抗性鉴定，证明GNA基因已经整合到了郑州9405基因组中。目前已经获得了纯合稳定的转基因株系，并在河南农业科学院小麦所进行了环境释放试验。     

卡那霉素法温室鉴定抗虫棉试验

利用标记基因与目的基因连锁的关系,通过检测标记基因的存在,间接检测出目的基因的存在。目前生产上推广的转基因抗虫棉绝大多数采用卡那霉素作为标记基因,因此只要检测出标记基因,就可以推断该棉花品种为转基因抗虫棉或是非抗虫棉。为此2 0 0 2年春季设计了该试验,以期为生产提供一种简便、科学、实用的鉴定方法。1试验概况1 .1材料供试棉花品种为中棉所41和中棉所2 9父本分别由本所中早熟课题组和杂种优势利用课题组提供;医用硫酸卡那霉素注射液为市场上购买,每支2 ml含卡那霉素0 .5 g( 5 0万单位) ,天津药业集团新郑股份有限公司生产。试…     

玉米抗蚜虫种质资源的鉴定

蚜虫是玉米主要虫害之一,抗蚜品种的选育及推广是有效防治蚜虫的主要途径。试验在重虫区三亚乐东试验基地,连续两年对222份玉米自交系在自然发病的条件下进行蚜虫抗性鉴定和评价,结果表明,确定危害度为抗性评价指标,同时筛选出15份高抗蚜虫自交系。结合血缘追踪发现,抗性材料主要来源于Reid、lancaster种质。     

利用卡那霉素“浸种法”准确筛选转基因小麦种子的方法研究

为了确定利用卡那霉素“浸种法”筛选转基因小麦后代种子的准确方法,以冬小麦种子为试材,探讨了卡那霉素溶液体积、浓度及种子粒数对筛选结果的影响。结果表明,卡那霉素溶液体积、小麦种子的粒数对筛选结果的影响与卡那霉素浓度同等重要。在卡那霉素浓度为60～180 mg·L^-1的范围内,以“单粒分享量”（单粒分享量=卡那霉素浓度×溶液体积/种子粒数）为筛选标准,能有效地对小麦种子进行筛选。利用此方法,我们对小麦金禾9123转基因后代7个株系的412个籽粒进行卡那霉素溶液筛选,获得84株抗性苗,经PCR检测,76株为阳性,卡那霉素筛选正确率达90.5%;同时以7个不同遗传背景的普通小麦品种也验证了此选择方法的可靠性。