谷氨酸脱酸酶亲和层析介质制备

将Sepharose 4B用环境氯丙烷活化，接丁二胺臂，再用环氧氯丙烷活化，与谷氨酸的N－2氨基偶联。在N，N－二环己碳化二亚胺催化下，以接臂的胶与谷氨酸的C－5和C－1羧基基团偶联。结果表明，谷氨酸N－2氨基偶联和C－1羧基偶联的亲和介质对小麦谷氨酸脱羧酶有部分亲和作用，洗脱下的酶活低，而谷氨酸C－5羧基基团偶联的层析介质对小麦谷氨酸脱羧酶有完全亲和作用，洗脱的酶活高。谷氨酸能从亲和材料上洗脱掉脱羧酶，但它抑制酶活，而同等浓度的4－氨基丁酸和谷氨酰胺梯度洗脱没有作用。     

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的性质及其比较研究

林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的亚基分子为量70kD,天然分子量为140kD,是2个相同亚基组成的二聚体。N-末端氨基酸为丙氨酸。圆二色谱分析表明,该酶在207．5nm和215nm有一平缓的负峰,二级结构中α-螺旋占34．28％,β-折叠占33．24％,无规则卷曲占32．28％,紫外吸收表现一般蛋白质的特征吸收光谱,在278nm处有最大吸收。酶最适pH5．4,对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1,最适温度40℃,酶特异性地使谷氨酸脱羧,不能使门冬氨酸等其他氨基酸脱羧。比较结果说明该酶在已知结构和性质上与人及大鼠脑的谷氨酸脱羧酶接近,但和已知的几种植物的酶相差较远。     

胰蛋白酶在环氧氯丙烷活化的2%珠状琼脂糖凝胶上固定化条件的研究

用环氧氯丙烷活化 2 %的珠状琼脂糖凝胶 ,并与胰蛋白酶进行偶联反应制备固定化酶。实验结果表明 ,固定化胰蛋白酶的活力受环氧氯丙烷量 ,活化反应的碱浓度及给酶量的影响。每 1.0 g的 2 %珠状琼脂糖凝胶 ,当活化剂量为 5 74 2 μmol,NaOH浓度为 0 .5mol·L-1,活化时间 3h ,给酶量为 5mg·ml-1,偶联 12h时 ,固定化酶活力最大     

米胚芽谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质的研究

【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),并对其酶学性质进行研究。【方法】通过(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱、Superdex 200凝胶过滤色谱和Glu SephroseCL 4B亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽GAD进行分离纯化。用体积排阻高效液相色谱测定米胚GAD的相对分子质量,SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量。测定米胚GAD的最适温度和pH,通过酶动力学试验测定其动力学常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并测定KCl和MgSO4等化学物质对酶活性的影响。【结果】分离纯化得到了米胚GAD,其纯化倍数为65.7,比活达223.4 U/mg,酶活回收率为10.8%。米胚GAD的相对分子质量为78 ku,亚基相对分子质量为40 ku,说明米胚GAD是由2个相同亚基构成的二聚体。米胚GAD的最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.6;米胚GAD的热稳定较差,80℃时酶几乎完全失活;米胚GAD在pH 4.5~8.0较为稳定,能保持88%以上的酶活。米胚GAD对谷氨酸Glu的Km为32.3 mmol/L,Vmax为1.159 mg/min;对磷酸吡哆醛(PLP)的Km为1.7μmol/L,Vmax为1.171 mg/min。K+和Ag2+对米胚GAD的活力有较大抑制,Mg2+、Mn2+、Al3+和Li2+等对活性影响不大,500μmol/L Ca2+对米胚GAD有较强的激活作用。【结论】米胚GAD的性质与其他植物GAD存在差异。     

产GABA发酵乳杆菌的筛选、发酵条件优化 及其谷氨酸脱羧酶基因的克隆

从酸菜汁中分离到一株具有谷氨酸脱羧酶活力的乳酸菌YS2,经过16S rDNA 序列分析鉴定为发酵乳 杆菌(Lactobacillus fermentum）。YS2 在含1% L-谷氨酸钠的MRS 培养基中,GABA 的产量达到4.37 g/L。对YS2 产 GABA 的碳源、氮源、初始pH 进行了初步优化,确定最佳条件为院以蔗糖为主要碳源,以蛋白胨和牛肉膏为氮源,初 始pH 6.0,在此条件下,GABA 产量达到5.68 g/L。通过PCR 顺利地扩增出了YS2 菌株的谷氨酸脱羧酶gadB 基因,将 PCR 产物与表达载体pEASY-E1 连接。测序结果表明,YS2 的谷氨酸脱羧酶与Lactobacillus fermentum F-6 的谷氨酸 脱羧酶序列一致性达到99%。重组酶与组氨酸标签融合表达,经镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,电泳显示出56 kDa 的目的条带,纯化的重组酶表现出了酶活性(1.06 U/mg）。     

氮代谢相关酶的研究进展

氮代谢是植物体内的基本生理代谢过程之一,包括氮素同化、积累和蛋白质合成等过程,与植物的生长发育、产量和品质的联系非常密切。氮代谢的生理过程在酶的催化下完成,与氮代谢的生理过程密切相关的酶有：硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶、转氨酶(谷氨酸草酰乙酸转氨酶、谷氨酸丙酮酸转氨酶)、谷氨酸合酶、谷氨酸脱氢酶等关键酶。这5种酶在植物氮代谢过程中具有重要的作用,简要介绍这几种酶的基本结构与特性、对作物生长发育的调控等,为进一步探究氮代谢研究机制提供有益的参考。     

提高L-谷氨酸脱羧酶产量与稳定活力的研究

通过正交试验,获得了利用大肠杆菌生产Ｌ－谷氨酸脱羧酶的最优培养基配方与工艺条件．通过对精制条件的研究,发现丙酮温度过低是导致酶活力降低的主要因素．用０℃左右的丙酮溶液处理菌悬液可保证酶制剂活力．     

乳酸片球菌产谷氨酸脱羧酶的相关酶学性质研究

为研究乳酸片球菌谷氨酸脱羧酶（GAD）的性质,采用比色法测其酶活。结果表明：当底物L-MSG的浓度为100 mmol.L-1时,GAD的活力达到最大。GAD的浓度为3.16%,最适温度为37℃,最适pH为5.0,PLP浓度为0.1 mo.lL-1时,GAD酶活力最大。Mg2＋和Mn2＋使GAD活力提高10%左右,KCl...     

茶树谷氨酸脱羧酶基因(GAD)的原核表达及酶活快速检测

L-谷氨酸经脱羧酶反应可生成γ-氨基丁酸(GABA),此过程受谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)催化。从茶树转录组库中筛选GAD基因,通过NCBI比对获得其cDNA序列(GenBank登录号为KT728367.1)。序列分析表明,GAD基因的ORF全长为1 482 bp,共编码493个氨基酸,该蛋白为细胞质蛋白,分子量为55.49 kDa,理论等电点为5.44。从舒茶早茶树根部中克隆该基因,并构建pMAL-c5X-GAD表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测,得到分子量约为55 kDa的目的蛋白。体外酶活反应后用薄层色谱法(TLC)分析,经BAW(Butanol:Acetic acid:H_2O,4:1:2)和75%苯酚水溶液(Phenol:H_2O,3:1)2种展开剂分离酶促产物,均可检测到GABA的生成。通过实时荧光定量PCR对GAD基因在不同茶树组织的表达水平进行检测,发现GAD在根中表达量最高,而在芽中表达量最低,在其他组织中表达各不相同,其表达具有组织特异性。     

貉微卫星DNA富集文库的构建与鉴定

貉基因组DNA经限制性内切酶MboI酶切,用2.0%琼脂糖凝胶电泳回收200～800bp的DNA片段,与MboI连接头连接,连接产物与生素物标记的(AC)n微卫星探针变性及退火,再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉,经吸附、洗涤及洗脱,然后以洗脱产物为模板,通过PCR扩增,与pUCm-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,构建貉(AC)n微卫星DNA富集文库,经测序分析表明该文库含重组克隆约2800个,其中含有(AC)n微卫星DNA序列的阳性克隆占71.4%。     

农药浓度、共代谢底物和接种量对Sphingobium indicumB90A降解六六六效率的影响

有机氯农药六六六曾被广泛用于卫生防疫和对抗农业病虫害,但由于其毒性和持久性引发了一系列环境问题.鉴于微生物降解方法在农药污染场地的修复中具有重要作用,采用摇瓶培养法研究了在α-、β-、γ-和δ-六六六(HCH)异构体混合体系中,农药浓度、共代谢底物和接种量对Sphingobium indicum B90A降解4种HCH异构体的影响.研究结果表明:S.indicum B90A对α-和β-HCH的利用较好,其次是γ-和δ-HCH.在10 mg·L-1混合HCH的无机盐培养液中,30℃下反应72 h,S.indicum B90A对α-、β-、γ-和δ-HCH的降解率分别为99％、86％、53％和33％.随着HCH浓度的增加,S.indicum B90A对4种HCH异构体降解率均逐渐降低.在共代谢底物的研究中,添加葡萄糖或酵母粉均能明显地提高S.indicum B90A对HCH的降解能力,在10 mg·L-1混合无机盐培养液中,添加1 00 mg·L-1葡萄糖或添加50 mg·L-1酵母粉,30℃下反应84h,S.indicum B90A对α-、β-、γ-和δ-HCH的降解率均接近100％.S.indicum B90A对HCH的降解率随着菌体接种量的增加而相应提高,适宜接菌量为5％.     

大豆籽粒生育酚遗传位点发掘及候选基因筛选

生育酚具有抗氧化、防止人体动脉硬化和心血管疾病等多种功效,在大豆籽粒中含量丰富,但有关其遗传位点与基因发掘工作开展甚少.鉴于此,利用大豆重组自交系群体,通过高效液相色谱鉴定其籽粒生育酚,结合群体SNP连锁图谱与转录组数据,发掘其遗传位点并筛选候选基因.结果 表明,供试群体籽粒生育酚存在较大遗传变异,α-、γ-、δ-生育...     

吹扫捕集气相色谱法测定饮用水中环氧氯丙烷

[目的]建立水体中环氧氯丙烷方便、快捷且精确度高的分析测试方法。[方法]使用吹扫捕集仪和气相色谱连用技术，对水体中的环氧氯丙烷进行定性定量。[结果]通过在水体中加入不同比例的NaCl和方法基础试验过程，结果表明，在水体中加入NaCl可以降低其方法栓出限，且在30.0％的比例时，可以得到较低的方法检出限。该方法检出限为2.6μg/L，相对标准偏差为3.7％，平均回收率为102.8％。其结果均优于《生活饮用水卫生标准》（GB5750.8-2006）的标准检测方法中所提供的对应参考数据。[结论]试验结果表明，使用该方法可以对水体环境中的环氧氯丙烷进行快速准确地分析测定。     

α- 淀粉酶产生菌的分离筛选及酶学性质研究

[目的]获得在某些方面性能优良（如耐高温、耐强酸、耐强碱等）的α-淀粉酶产生菌。[方法]对α-淀粉酶产生菌进行分离筛选,并对其酶学性质进行了研究。[结果]从稀释样品涂布的淀粉筛选平板上筛选出10株有明显淀粉水解圈的单个菌株,又从中得到3株α-淀粉酶酶活力较高的菌株：X6、X8和X10。这3株菌的最适pH值均在中性范围内,最适温度均为60℃。Ca2＋能提高酶的热稳定性,X6和X8在Ca2＋浓度为0.02～0.04 mol/L时,酶的热稳定性最高;X10在Ca2＋浓度为0.03～0.04 mol/L时,酶的热稳定性最高;当Ca2＋浓度继续增大时,酶的热稳定性反而降低。[结论]为满足不同行业对不同特征α-淀粉酶的需求提供了理论依据。     

毛乌素沙地4种典型植物叶片凝结水吸收能力及其水分生理响应

[目的]明确毛乌素沙地4种典型植物沙蓬、软毛虫实、刺藜和苦豆子的叶片凝结水吸收能力,阐明植物叶片对凝结水浸润的水分生理响应.[方法]将受试植物置于用高丰度氘水配置的人工标记凝结水环境中,进行凝结水浸润处理,通过比较处理组和对照组植物叶水、根水及根际土壤水的稳定氢同位素丰度变化,确定受试植物叶片是否具有吸水能力,示踪叶片...     

Clay Sols versus Clay Gels: Biological Activities Compared

Clay gels were prepared by extrusion of sodium-Wyoming bentonite pastes through a small orifice. Clay sols were prepared from the gels by rapping on the laboratory bench for disturbance. Lettuce seeds germinated faster, microbes generated more heat, and corn seedlings absorbed more (22)Na in the sols than in the gels. These differences in biological activity are attributable to changes in water properties and ion activities that accompany transformation from gelsol.     

偶联钠离子转运草酰乙酸脱羧酶研究进展

偶联钠离子转运草酰乙酸脱羧酶是第一个被发现具有初级钠离子泵活性脱羧酶家族成员,由α,β,γ三个亚基以及生物素组成。由于其脱羧反应对柠檬酸发酵途径具有关键作用,并且在脱羧过程中偶联钠离子输出,该酶已受到学术界广泛关注。目前,该酶已在包括克雷伯菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)和弧菌属(Vibrio)等多个属细菌中被发现,并且其生理学基本特征已被鉴定。在肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)中,该酶中参与偶联脱羧反应钠离子输出重要氨基酸活性位点通过拓扑学分析、定点突变等方法被深入地进行鉴定,在此基础上能量偶联模型被提出以解释该酶偶联钠离子输出脱羧反应机制。本文对以上研究进展进行综述并对该酶未来研究方向加以展望。     

气相色谱法测定生活饮用水中环氧氯丙烷

[目的]在GB/T 5750.8.17—2006基础上,进一步优化生活饮用水中环氧氯丙烷的检测方法。[方法]采用有机溶剂萃取生活饮用水中的环氧氯丙烷,而后浓缩所得的萃取液。采用具有氢火焰离子检测器(FID)的气相色谱仪进行检测,确定检测条件后绘制标准曲线,建立环氧氯丙烷检测线性方程。[结果]该检测方法灵敏度、准确度及线性优于国家标准方法中填充柱检测法,能满足基层实验室对环氧氯丙烷的测定要求。[结论]建立了液液萃取一毛细管气相色谱氢火焰离子测定生活饮用水中环氧氯丙烷的检测方法。     

Study on Marker-assisted Breeding of Soybean Vitamin E

Hefeng 25 variety with low vitamin E content in Heilongjiang Province and Bayfield variety with high vitamin E content in Canada were crossed.A total of 144 F_(2:7) recombinant inbred lines (RILs) were used as materials.The genetic linkage mapping of soybean vitamin E was constructed.Soybean varieties were marker-assisted selected in the interval of refined quantitative trait locus (QTLs).QTLs were identified in α-,γ-,δ-and the total tocopherol contents of soybean seeds.Fine QTLs of soybean vitamin E content were identified in the interval between Sat_239 and Satt022 on N linkage group.It was valuable to narrow the interval by marker-assisted selection (MAS).There were seven major QTLs of vitamin E content in soybean.MAS related to vitamin E content in soybean was carried out in the intervals between Sat_239 and Satt022.Considering all the kinds of agronomic traits,six strains with high yield and good quality of vitamin E were chosen,numbered 4,54,104,114,122 and 135.     

发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的性质研究

[目的]研究发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的酶学性质。[方法]从发芽咖啡豆中提取a-半乳糖苷酶,研究不同温度和pH下的酶活,并确定该酶的最适温度和pH。研究了不同金属离子和不同离子强度（NaC1）对a-半乳糖苷酶酶活的影响。Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmu[结果]a-半乳糖苷酶的最适温度和pH分别为45℃、6．0,热稳定温度范围为20～50℃,pH稳定范围为5．0～7．0。Na^＋、K^＋、Mg^2＋和cu^2＋对a-半乳糖苷酶酶活的影响不大,zn^2＋促进酶活,Ba^2＋对酶活稍有抑制,Hg^2＋强烈抑制d．半乳糖苷酶的活性。在0～0．25mol／L离子强度（NaC1）范围内,a-半乳糖苷酶的酶活不受影响。Lineweaver—Burk双倒数作图法测定该酶的k和n。。分别为0．556mmol／L、1．19μmol／min。[结论]该研究为发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的进一步应用提供理论指导。