东莞市屠宰场猪戊型肝炎血清学调查

为了解东莞市猪戊型肝炎的流行情况,2015年在东莞市15个镇(街)屠宰场采集225份血清,应用ELISA方法进行检测,结果为屠宰场猪戊型肝炎抗体阳性率为61.33%,结果表明东莞市屠宰场猪均存在不同程度的猪戊型肝炎的感染,建议采取综合防控措施防止人感染戊型肝炎病毒。     

广东部分地区猪戊型肝炎的分子流行病学调查

为了解广东地区猪戊型肝炎的感染情况,本试验于2015年在广东不同猪场收集了2月龄内猪胆汁73份,RTnPCR检测、全基因组测序、同源性及进化分析结果显示:猪感染戊型肝炎的阳性率为6.8%(5/73),5个ORF2部分核苷酸序列同源性为87.2%~99.4%,属于基因4型,4b、4h亚型。对4b亚型中的1个阳性样品(GZHD)株进行全基因测序,其核苷酸序列与swGX40(EU676172)同源性最高为96.5%,与广东株SS19(JX855794)同源性为93.9%,与人源戊型肝炎病毒(HEV)株CVS-Sie10(LC042232)同源性为94.8%。结果表明:广东地区猪群间HEV流行毒株仍以基因4型为主,且为揭示戊型肝炎的跨种传播提供了新的分子生物学依据。     

人与家畜戊型肝炎病毒感染的流行病学关联性调查

为探讨人群戊型肝炎病毒(HEV)感染与家畜HEV感染的流行病学关联性,揭示戊型肝炎发病的危险因素,以134例戊型肝炎患者为病例组进行1∶2配对病例对照研究,对收集与家畜相关的卫生行为资料采用多因素COX回归分析戊型肝炎发病的危险因素,同时采集研究现场的家养猪、鸡粪便、猪胆囊、猪肝、环境水样等进行HEV核酸检测,并对病例和猪肝阳性样本进行基因分析。多因素COX回归分析结果显示,猪类接触史(OR=7.21,95%CI:1.65~31.45)、生食瓜果蔬菜史(OR=2.95,95%CI:1.19~7.36)有统计学意义,研究现场的猪粪、猪胆囊、猪肝HEV核酸阳性检出率分别为10.2%、23.5%、30.8%,其余样本均为阴性。人和猪感染的HEV以基因4型为主,核苷酸同源性89.9%~99.3%。结果表明生猪接触史、生食瓜果蔬菜史是戊型肝炎的危险因素,猪胆囊、猪肝的HEV含量高,猪能通过猪粪排出HEV,本地区人源和猪源HEV同源性高,猪是本地人群HEV的重要宿主动物;应结合戊型肝炎的流行特点开展相关防控工作,加强戊型肝炎防控的健康教育和重点人群的保护。     

猪戊型肝炎病毒双重RT-PCR检测诊断方法的建立及其应用

猪戊型肝炎(HE)是近年来颇受人们关注的一种人畜共患传染病.人普遍易感.急性戊型肝炎病情较重,病死率为2.5%,明显高于甲型(0.1%)和乙型(0.9%)肝炎,孕期妇女死亡率可高达15%～20%[1],尤其是怀孕最后3个月的孕妇病死率更高.1986～1988年我国新疆南部地区曾发生HE水源性大流行,共计有119 280人发病,死亡707人,是迄今世界上最大、最严重的一次戊型肝炎流行[2].     

江西省部分地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种经肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒,该可导致人戊型肝炎的发生.目前,我国有报道HEV在猪群中的流行.     

猪戊型肝炎病毒的流行病学调查

利用双抗原夹心ELISA对2009-2011年间采自广东省各地区的若干猪场的484份血清样品,进行血清流行病学调查;对69份病猪胆汁样品进行分子流行病学调查,分离得到猪源戊型肝炎病毒(swine hepatitis E virus, swHEV),并基于ORF2部分基因序列进行核苷酸序列比对、相似性分析和遗传进化树分析,以期初步了解广东各地猪群戊型肝炎(hepatitis E, HE)的感染情况和流行特点。试验结果显示,全部被检查猪的swHEV抗体平均阳性率为71.9%(348/484),分离的猪源HEV毒株均属于基因Ⅳ型,阳性率为71.0%(49/69)。调查结果表明基因Ⅳ型swHEV在广东地区普遍流行。     

猪戊型肝炎研究进展

戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV)引起的一种急性病毒性肝炎,是一种人畜共患传染病。我国各大猪场感染戊型肝炎几率较高,且流行情况复杂,本文对该病的流行情况、     

一种新的人兽共患病——猪戊型肝炎研究进展

猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致猪戊型肝炎(HE)的病原体,现在很多国家和地区,如美国、日本、欧洲、中国、中国台湾、印度等都检测出了猪戊型肝炎病毒的抗体,少数国家和地区还有人感染猪戊型肝炎病毒的报道,越来越多的证据表明猪HE是一种人兽共患的传染病。     

猪戊型肝炎研究进展

猪戊型肝炎是一种新发现的传染病,其病原戊型肝炎病毒(HEV)是一种无囊膜的RNA病毒,基因组全长为7.2 kb~7.4 kb。研究发现,世界上许多国家的猪群中普遍存在较高的HEV抗体,也检测到猪戊型肝炎病毒,与猪接触的职业人群的血清抗HEV抗体均高于非职业人群,有些国家从猪群中分离到的HEV核苷酸序列与当地居民感染的HEV具有高度的同源性。据此认为猪戊型肝炎是一种人兽共患病,猪可能作为戊型肝炎的贮存宿主,在人类病毒性肝炎流行病学中具有重要的地位,对于公共卫生、异种器官移植和食品安全等构成潜在威胁。     

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎(hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV)引起的一种经肠道传播的非甲-非乙型肝炎(ET-NANBH)。戊型肝炎是一种人兽共患病,已成为我国的一个重要公共卫生问题。猪、牛、羊、鸡、狗等动物可能作为戊型肝炎的贮存宿主,在人类病毒性肝炎流行病学中具有重要的地位。本文从戊肝的病原学、基因型、病毒分子生物学、诊断方法、感染动物、流行病学等多方面探讨戊型肝炎的危害及研究现状。     

河南省猪场戊型肝炎病毒流行病学调查

为了解河南地区猪戊型肝炎感染情况,同时掌握该地区猪感染戊型肝炎病毒的基因型,对来自河南新乡、平顶山、南阳等地区不同商品猪场血清、肝脏、粪样品,采用ELISA技术检测猪血清中抗HEV特异性抗体水平,并使用套式RT-PCR检测肝脏和粪便中猪戊型肝炎病毒核酸。结果显示530份样品中HEV抗体阳性率0.6%,HEV RNA均为阴性,推测目前河南省猪戊型肝炎病毒感染率较低。     

猪戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位区间接ELISA方法的初步建立

应用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端和N端的主要抗原表位区,重组蛋白命名为ORF2-C和ORF2-N,初步建立间接ELISA诊断方法。用重组蛋白ORF2-C和ORF2-N作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立ELISA诊断方法。抗原最适包被浓度ORF2-C为8 μg/mL、ORF2-N为12 μg/mL;血清最适稀释度均为1∶50,ORF2-C作用时间为50 min、ORF2-N作用时间为90 min;酶标抗体最适稀释度为1∶5000;ORF2-C判定标准：D450 nm值≥0.348为阳性,D450 nm值<0.348为阴性;ORF2-N判定标准：D450 nm值≥0.397为阳性,D450 nm值<0.397为阴性。与戊型肝炎病毒诊断试剂盒检测结果相比,阳性符合率分别为93.3%、86.7%。利用重组蛋白建立的ELISA方法特异性、敏感性和重复性均较好,且ORF2-C的检测效率明显高于ORF2-N,该方法的初步建立为进一步完善猪戊型肝炎病毒诊断方法奠定基础。     

Development of a novel enzyme-linked immunosorbent assay to detect anti-IgG against swine hepatitis E virus

Swine hepatitis E virus (HEV) is widespread throughout pigs in both developing and industrialized countries. This virus is an important zoonotic agent and a public concern worldwide. Infected pigs are asymptomatic, so diagnosing swine HEV relies on detection of the virus or antibodies against the virus. However, several obstacles need to be overcome for effective and practical serological diagnosis. In this study, we developed an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) that used a purified recombinant capsid protein of swine HEV. The potential clinical use of this assay was evaluated by comparing it with a commercial kit (Genelabs Technologies, Diagnostics, Singapore). Results of the ELISA were highly correlated with those of the commercial kit with a sensitivity of 97% and specificity of 95%. ROC (receiving operator characteristic) analysis of the ELISA data produced a value of 0.987 (95% CI, 0.977~0.998, p < 0.01). The cut-off value for the ELISA was also determined using negative pig sera. In summary, the HEV-specific ELISA developed in the present study appears to be both practical and economical.     

猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关.     

Hepatitis E viruses in humans and animals

Hepatitis E virus (HEV) is an emerging pathogen belonging to a newly recognized family of RNA viruses (Hepeviridae). HEV is an important enterically transmitted human pathogen with a worldwide distribution. It can cause sporadic cases as well as large epidemics of acute hepatitis. Epidemics are primarily waterborne in areas where water supplies are contaminated with HEV of human origin. There is increasing evidence, however, that many animal species are infected with an antigenically similar virus. A recently isolated swine virus is the best candidate for causing a zoonotic form of hepatitis E. The virus is serologically cross-reactive with human HEV and genetically very similar, and the human and swine strains seem to be cross-infective. Very recent evidence has also shown that swine HEV, and possibly a deer strain of HEV, can be transmitted to humans by consumption of contaminated meat. In this review, we discuss the prevalence, pathogenicity, diagnosis and control of human HEV, swine HEV, the related avian HEV and HEV in other hosts and potential reservoirs.     

猪戊型肝炎病毒Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为获得猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)Ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体,将猪HEV衣壳蛋白的C端267(408—675)个氨基酸基因序列克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET-28a-ORF2-C,转化E.coli Rosetta(BL21)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定,纯化后免疫小鼠。取免疫小鼠的脾脏与鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合制备单克隆抗体。通过间接ELISA和竞争ELISA方法筛选并鉴定单抗。结果表明蛋白得到正确、高效表达,获得3株识别不同的抗原表位区的单克隆抗体,分别命名为Mab-1E4(IgG1)、Mab-2C7(IgG1)和Mab-2G9(IgG2b),其中1E4和2G9能阻断临床阳性猪血清,提示该2株单克隆抗体识别的抗原表位是猪HEVⅣ型衣壳蛋白上重要的抗原表位区,而单抗Mab-2C7不能阻断。本研究为猪HEVⅣ型的诊断及研究提供重要工具。     

A型猪塞内卡病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

本研究针对A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)基因组保守区域设计了特异性引物及探针,建立了快速检测SVA的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的Taq Man荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9974;特异性良好,与口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒不存在交叉反应;对SVA核酸最低检测下限为3.75 copies/μL,而普通PCR最低检测下限为3.75×103 copies/μL;批内和批间的变异系数为均小于5%,重复性良好。本研究建立的SVA TaqMan荧光定量PCR方法为检测猪水疱性疾病病原提供了一种快速、灵敏的检测方法,为开展SVA流行病学调查提供了技术支持。     

Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for the Differential Detection of Nipha Virus and Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

To establish a rapid,sensitive and specific assay for the differential detection of Nipah virus (NiV) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV),a duplex Real-time RT-PCR was developed with specific primers and probes targeting to the special sequences of NiV M gene and HP-PRRSV nsp2 gene by optimization of reaction conditions.The performance of the assay was linear ranging from 4.6×10¹ to 4.6×10⁷ copies/μL for RNA standard control of NiV M (NiV-M-RNA) and from 4.1×10¹ to 4.1×10⁸ copies/μL for RNA standard control of HP-PRRSV nsp2 (HP-PRRSV-nsp2-RNA),and detection limits of the assay was 46 copies for the NiV-M-RNA and 4.1 copies for the HP-PRRSV-nsp2-RNA,respectively.The coefficients of variation (CVs) of both inter-assay and intra-assay repeatability were less than 2.0%,showing good repeatability.The assay was able to specifically detect NiV and HP-PRRSV simultaneously without cross-reaction with classical swine fever virus (CSFV),porcine epidemic diarrhea virus (PEDV),swine influenza virus (SIV),porcine parvovirus (PPV),pseudorabies virus (PRV) and porcine circovirus type 2 (PCV2).Of the 236 samples from pigs for both NiV and HP-PRRSV detection by the established assay,all the samples were negative for NiV,8 samples were HP-PRRSV positive.In conclusion,this assay offers a useful approach for the differential detection of NiV and HP-PRRSV in clinical specimens from the pigs.