拟环纹豹蛛热休克蛋白20基因的克隆与分析

[目的]克隆拟环纹豹蛛热休克蛋白20基因(HSP20),并分析其在镉胁迫下的表达情况,为揭示蜘蛛抵御重金属胁迫机制提供参考.[方法]以拟环纹豹蛛雌蛛为试验材料,在转录组测序的基础上,通过RT-P CR克隆拟环纹豹蛛HSP20基因(PpHSP20),用生物信息学方法对其序列特征进行分析,并采用荧光定量PCR检测镉胁迫下PpHSP20基因的相对表达量.[结果]克隆获得的PpHSP20基因编码区长525 bp,编码174个氨基酸,其编码蛋白分子量20.08 kD,等电点5.97,具有小分子热休克蛋白家族典型的α-晶状体蛋白结构域,与温室拟肥腹蛛(Parasteatoda tepidario-rum)α-晶体蛋白A有较高的相似性(58%).荧光定量PCR分析结果显示,镉胁迫下PpHSP20基因的表达量显著增加(P<0.05).[结论]拟环纹豹蛛HSP20基因在抵御镉胁迫中发挥调控作用,可作为研究蜘蛛抵御镉胁迫的重要候选基因和潜在的生物标记物.     

烟夜蛾谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆与时空表达分析

用RT-PCR方法,从烟夜蛾(Helicoverpa assulta (Guenée))成虫腹部克隆获得了1个谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)基因的完整开放阅读框cDNA序列.该基因的开放阅读框全长636 bp,编码211个氨基酸残基,推测编码蛋白的分子量为24.2 kD,等电点为6.66.将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的GSTs进行同源性和系统发育分析,发现该基因编码的蛋白属于昆虫特异性Epsilon家族成员,将该基因命名为HaGSTe2(GenBank登录号:GQ856239).HaGSTe2在雌、雄虫触角、喙、去除触角和喙的头、胸、腹、足和翅中均有表达,而且在卵、幼虫和蛹中也有表达.     

拟环纹豹蛛生物学特性及其基因组调查分析（英文）

目前蜘蛛的全基因组尚未在公共数据库中发表,仍处于不断探索阶段。为丰富蜘蛛基因组的研究内容,进一步促进蜘蛛基因组序列在公共数据库中的发表和使用,本研究对拟环纹豹蛛（Pardosa pseudoannulata）的形态、生物特性和基因组进行了分析。利用Illumina高通量测序技术对其进行基因组测序,采用K-mer 17分析法预测其基因组大小、杂合度和重复序列等基因组特征。研究表明,从基因组中获得了超过142.11 Gb的高质量数据,这些数据被组装成3 508.13 Mb的contigs和3 542.56 Mb的scaffolds。contigs的N50长度和总长度分别为1 035 bp和3 508.13 Mb,scaffolds的N50长度和总长度分别为1 258bp和3 542.56 Mb。拟环纹豹蛛的基因组大小为4 696.86 Mb,呈现出两个明显的峰值,其杂合子率为0.21%,重复率为84.32%。拟环纹豹蛛的基因组测序结果具有高度重复性,这表明在基因组测序之前的多代自交有利于降低重复性,并且NOVOheter可用于基因组组装。本研究为促进蜘蛛基因组数据的发表提供了基础,同时也为...     

拟环纹豹蛛和前凹豹蛛对小菜蛾的捕食作用

[目的]探讨拟环纹豹蛛和前凹豹蛛对小菜蛾幼虫的捕食作用。[方法]研究不同温度下2种蜘蛛对小菜蛾幼虫捕食量和不同空间条件下拟环纹豹蛛对小菜蛾的捕食效应,利用三因子五水平二次通用回归旋转组合分析2种蜘蛛对小菜蛾幼虫的联合控制作用和拟环纹豹蛛对小菜蛾、斜纹夜蛾幼虫的控制作用。[结果]2种蜘蛛对小菜蛾捕食量随温度增加先增加后降低。拟环纹豹蛛对小菜蛾的捕食作用大于前凹豹蛛,2种蜘蛛对小菜蛾四龄幼虫捕食功能反应符合 Holling-Ⅱ型,但 Holling-Ⅲ型能完善2种蜘蛛对小菜蛾幼虫的捕食作用评价。不同体积对拟环纹豹蛛的取食作用影响较大,瞬时攻击能力 a′、处理1头猎物所用的时间 Th和捕食作用 a′/Th在小体积要高于大体积。2种蜘蛛对小菜蛾幼虫联合捕量与三者密度正相关,总体平均效应为：小菜蛾幼虫密度＞前凹豹蛛密度＞拟环纹豹蛛密度。小菜蛾和斜纹夜蛾密度显著影响拟环纹豹蛛的取食量,但拟环纹豹蛛对小菜蛾幼虫和斜纹夜蛾幼虫没有偏嗜性。[结论]该研究结果可为评价这2种蜘蛛对田间小菜蛾的控制作用提供参考。     

低剂量敌百虫对拟环纹豹蛛体内酯酶同工酶的影响

运用聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳技术,对有敌百虫农药作用下不同发育时期拟环纹豹蛛体内酯酶同工酶进行了比较研究,结果发现不同发育时期酯酶同工酶有着较大的差异,酶带数呈现出少-多-少的趋势,6龄期达到峰值。且农药胁迫下拟环纹豹蛛的酯酶同工酶的酶带增多,酶浓度增大。     

Bt蛋白对拟环纹豹蛛肠道细菌多样性的影响

采用16S r DNA分子生物学分析方法,分别对试验组(喂食含Cry1Ab蛋白培养基上饲养的果蝇)和对照组(喂食普通培养基上饲养的果蝇)的拟环纹豹雌、雄蛛肠道细菌进行分析。发现,拟环纹豹蛛肠道细菌丰富,雌蛛肠道细菌丰富度大于雄蛛肠道细菌丰富度;优势菌属分别是短杆菌属(Brevibacterium)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、德沃斯氏菌属(Devosia)、希瓦氏菌属(Shewanella)、Leucobacter、杆菌属(Brachybacterium)、梭菌属(Clostridium);Bt蛋白对拟环纹豹蛛肠道细菌多样性有一定的影响,对放线菌属(Actinomycetes)的影响最小,对乳杆菌属(Lactobacillus)和梭菌属(Clostridium)的影响较大。     

拟环纹豹蛛转录组数据SSR序列特征分析

拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata是稻田害虫重要的自然天敌,在绿色防控中有重要作用.本研究基于拟环纹豹蛛转录组数据,使用微卫星鉴定工具软件(MISA)挖掘和分析其简单序列重复(SSR)位点.结果 表明:拟环纹豹蛛转录组Unigene序列中共检测到6474个SSR位点,平均长度为12.36 bp,分布...     

11种稻田常用杀虫剂对拟环纹豹蛛的室内安全性评价

为明确当前稻田常用杀虫剂对稻田天敌蜘蛛的安全性,采用浸渍法测定了异丙威等11种化学药剂对稻田蜘蛛优势种拟环纹豹蛛的毒性,并通过安全系数(RQ)评估供试药剂的安全性。结果表明:吡虫啉、烯啶虫胺、呋虫胺、氟啶虫胺腈、吡蚜酮、噻嗪酮和氯虫苯甲酰胺对拟环纹豹蛛的RQ大于5.00均为低风险性农药;阿维菌素的RQ=1.55,为中等风险农药;异丙威和仲丁威的RQ分别为0.25和0.17,为高风险农药;毒死蜱的RQ=0.001,为极高风险农药。在水稻害虫防治中可选用这些低风险性农药,同时科学合理用药,有效保护和利用稻田蜘蛛资源,达到持续有效控制水稻害虫的目的。     

镉在拟环纹豹蛛体内的积累动态

以拟环纹豹蛛为研究对象,通过田间试验探讨拟环纹豹蛛体内镉的生物积累特征,进而定量分析实际土壤镉含量与其上活动的拟环纹豹蛛体内镉含量间的关系.在为期70天的田间试验中,前42天拟环纹豹蛛体内镉的积累变化与染镉喂食量显著相关(P0.01);后28天的饱和期内,其体内镉的积累量既不因停止摄取镉而减少,也不因继续摄取镉而增加,说明拟环纹豹蛛体内镉含量的富集饱和期为42天.通过实际受污染生境调查得到与田间试验一致的结论,即处于未饱和期的拟环纹豹蛛体内镉含量与其生境土壤镉含量存在极显著正相关.     

肉鸡谷胱甘肽S-转移酶A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化

[目的]谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少。[方法]本试验采用RT-PCR方法扩增肉鸡GSTA3基因,连接pZeroBack/blunk克隆质粒,再与表达载体pET-28a连接,并转入E.coli BL21(DE3)中获得pET-28a-GSTA3重组表达质粒,使用IPTG诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行SDS-PAGE鉴定,使用谷胱甘肽-S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测。[结果]试验成功构建重组表达质粒pET-28a-GSTA3,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa,与预期一致,并且表达的重组GSTA3蛋白具有生物活性。[结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。     

温度对拟环纹豹蛛乙酰胆碱酯酶体躯分布的影响

该文研究了温度对拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)乙酰胆碱酯酶(AChE)体躯分布的影响.结果表明:在4℃下拟环纹豹蛛身体各部分的AehE活性[包括头胸部2.826nmol/(mg·min)、腹部2.564nmol/(mg·min)、附肢1.054nmol/(mg·min)]低于在常温下拟环纹豹...     

Cry1Ab蛋白对拟环纹豹蛛生长发育的影响

[目的]探明Cry1Ab蛋白通过培养基-果蝇-拟环纹豹蛛这一食物链的传递,最终在拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)体内的富集情况以及毒蛋白随食物链的传递在各营养级中的变化规律。[方法]采用酶联免疫技术(ELISA)测定Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛和果蝇中的含量。[结果]Cry1Ab蛋白对不同龄期拟环纹豹蛛的体长、背甲宽、中眼域宽、腿长等生长指标不存在显著性差异,但对体重产生一定的影响,使得其体重略有下降的趋势。在0~10 d Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内不断累积,但10 d后拟环纹豹蛛体内Cry1Ab蛋白含量逐渐降低。[结论]Cry1Ab蛋白在拟环纹豹蛛体内具有富集效应。     

不同氮素水平对晚稻拟环纹豹蛛及稻飞虱种群动态的影响

以一等优质晚稻湘晚籼17号为试验材料,设置三个不同的氮肥水平,研究节氮条件下晚稻倒伏对拟环纹豹蛛种群动态的影响,以期为优质晚稻的绿色生产提供科学依据。结果表明,各生育时期拟环纹豹蛛种群数量均随施氮量的增加而显著减少,稻飞虱种群数量均随施氮量的增加而显著增加;直立植株的拟环纹豹蛛、稻飞虱种群数量随着晚稻生育进程的推进表现出先增后降的趋势,拟环纹豹蛛种群数量在齐穗期达到最大,稻飞虱种群数量在乳熟期达到最大;乳熟期水稻植株发生倒伏后,拟环纹豹蛛逐渐由直立植株迁移到倒伏植株,而稻飞虱则由倒伏植株迁移到直立植株,施氮量越高,倒伏指数越大,迁移越明显,倒伏植株与直立植株间的种群增长率越大,各处理间差异达显著水平。     

不同氮素水平对晚稻拟环纹豹蛛及稻飞虱种群动态的影响

以一等优质晚稻湘晚籼17号为试验材料,设置三个不同的氮肥水平,研究节氮条件下晚稻倒伏对拟环纹豹蛛种群动态的影响,以期为优质晚稻的绿色生产提供科学依据。结果表明,各生育时期拟环纹豹蛛种群数量均随施氮量的增加而显著减少,稻飞虱种群数量均随施氮量的增加而显著增加;直立植株的拟环纹豹蛛、稻飞虱种群数量随着晚稻生育进程的推进表现出先增后降的趋势,拟环纹豹蛛种群数量在齐穗期达到最大,稻飞虱种群数量在乳熟期达到最大;乳熟期水稻植株发生倒伏后,拟环纹豹蛛逐渐由直立植株迁移到倒伏植株,而稻飞虱则由倒伏植株迁移到直立植株,施氮量越高,倒伏指数越大,迁移越明显,倒伏植株与直立植株间的种群增长率越大,各处理间差异达显著水平。     

温度对拟环纹豹蛛的捕食功能反应的影响

探讨了不同温度(25、30和35℃)对拟环纹豹蛛的捕食功能及寻找效应的影响。结果表明:拟环纹豹蛛对褐飞虱的捕食反应均符合Holling II模型,其中在30℃下,拟环纹豹蛛对褐飞虱的控制效果最好,雌、雄成蛛对褐飞虱的捕食上限分别为100头和166.67头。在不同温度下捕食量有差异,但差异不显著(P0.05),不同龄期拟环纹豹蛛随着褐飞虱密度增加寻找效应呈下降趋势。3龄、5龄幼蛛随着猎物的增多搜寻效应值呈急剧下降趋势,而雌、雄成蛛下降相对平缓。研究表明,雌雄成蛛的寻找效应比幼株的搜寻能力强。     

华山松大小蠹谷胱甘肽S-转移酶基因DaGSTe1的克隆与表达

【目的】克隆华山松大小蠹谷胱甘肽S-转移酶基因的全长序列,并对其序列特征及不同发育时期的表达规律进行研究,以揭示谷胱甘肽S-转移酶在华山松大小蠹克服寄主抗性及物质转运过程中的分子调控机制。【方法】采用RT-PCR和RACE克隆华山松大小蠹谷胱甘肽S-转酶基因全长cDNA序列,用实时荧光定量PCR检测该基因在华山松大小蠹幼虫、蛹和雌雄成虫中的表达情况。【结果】获得cDNA全长为973bp的华山松大小蠹谷胱甘肽S-转移酶基因,并命名为DaGSTe1(GenBank登录号:KJ637332),其编码一个由218个氨基酸组成的多肽,分子质量约为23.567ku,理论等电点为7.90。华山松大小蠹DaGSTe1与山松大小蠹DpGSTe1氨基酸序列的相似度最高,达94%。根据对系统发育树的分析推测,DaGSTe1属于Epsilon类谷胱甘肽S-转移酶。DaGSTe1蛋白三维结构包括一个N端结构域和一个C端结构域,其中N端结构域包括典型的4个β片层和3个α螺旋(β1α1β2α2β3β4α3),C端结构域包括5个α螺旋(α4α5α6α7α8)。DaGSTe1基因在华山松大小蠹不同发育期均有表达,其中在雄性成虫中的表达量最大,为幼虫和蛹的8倍,雌性成虫的4倍。【结论】克隆得到了华山松大小蠹谷胱甘肽S-转移酶家族基因DaGSTe1,推测该基因具有降解寄主毒素的作用,而且参与华山松大小蠹雄性特异性激素的转运过程。     

扶桑绵粉蚧谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆及不同发育阶段的表达分析

【目的】扶桑绵粉蚧是我国重要的入侵生物,其繁殖能力强,能危害棉花、扶桑、向日葵、南瓜、番茄等多种我国重要的经济作物。克隆扶桑绵粉蚧谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）基因,可为揭示扶桑绵粉蚧GSTs的生理功能提供参考。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆扶桑绵粉蚧谷胱甘肽S-转移酶基因全长,并采用生物信息学方法分析其结构特征,用实时荧光定量PCR的方法研究其各个虫态的表达谱。【结果】克隆了扶桑绵粉蚧谷胱甘肽S-转移酶基因全长序列,该基因的开放阅读框包含651 bp的片段,编码217个氨基酸。DNA编码区由4个内含子和5个外显子组成,内含子的长度分别为90,123,67和70 bp;分隔的5个外显子的长度分别为18,50,96,80和500 bp。功能域分析结果显示,该蛋白在N末端和C末端均有GST的类似结构位点。多序列比对及系统进化树构建结果表明,该蛋白属Zeta家族GSTs,将其命名为PsGSTzl。PsGSTzl mRNA在扶桑绵粉蚧的不同虫态中都有表达,在1龄幼虫中的表达量最高。【结论】成功克隆的PsGSTzl基因在不同虫态中差异表达,为进一步揭示该基因在虫体的代谢作用奠定了基础。     

植物生理活性物质对拟环纹豹蛛的诱食作用

于室内研究了在植物生理活性物质作用下拟环纹豹蛛对褐飞虱的功能反应及搜寻行为。结果表明,在合适的植物生理活性物质刺激下,拟环纹豹蛛对褐飞虱的功能反应明显的强于未经处理情况下对褐飞虱的功能反应。拟环纹豹蛛在稻株上的搜寻行为属非随机搜索型,在合适的植物生理活性物质作用下,其在稻株各部位间的滞留时间和活动范围明显的大于在未经处理情况下的滞留时间和活动范围。据此证实了该植物生理活性物质可做为蜘蛛等天敌的诱食剂。     

藏药喜马拉雅紫茉莉谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆及表达分析

谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)是参与谷胱甘肽催化反应的关键酶,在生物解毒、应激耐受和次级代谢等多个方面发挥生物学功能.本研究以藏药喜马拉雅紫茉莉为材料,基于前期转录组数据,从cDNA中克隆出谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因MhGSTL3,该基因开放阅读框(ORF)全...     

黏虫谷胱甘肽S-转移酶基因对两种杀虫剂的响应

谷胱甘肽S-转移酶是昆虫体内重要解毒酶,对昆虫抗药性具有重要作用。通过转录组测序获得黏虫谷胱甘肽S-转移酶cDNA序列,命名为MsGSTe1(GenBank登录号:MH700949)。cDNA全长1 082 bp,包含一个651 bp开放阅读框,编码216个氨基酸,氨基酸等电点为4.75,分子质量为24.679 ku,具有一个GST N端结构域和一个GST C端结构域。经不同剂量氯虫苯甲酰胺处理不同时间后,MsGSTe1基因表达量均显著下调。处理24和48 h,谷胱甘肽S-转移酶活性显著提高。不同剂量高效氯氟氰菊酯处理不同时间后,MsGSTe1表达量和GST酶活性存在显著差异。处理24 h,各剂量处理MsGSTe1基因表达量均显著上调,且酶活性提高。处理48 h,与对照相比,各剂量处理酶活性显著提高,但基因表达量无显著差异,表明MsGSTe1参与黏虫对高效氯氟氰菊酯的解毒代谢。