整合质粒对苏云金芽胞杆菌转化的研究

苏云金芽胞杆菌(Bt)是一种革兰氏阳性菌,可产生具有杀虫活性的伴胞晶体蛋白,作为一种全球性生物农药广泛应用于农林害虫的防治.电脉冲法是细菌质粒转化中比较常用的一种方法,特别是在革兰氏阳性菌以及很多用常规方法不能转化的细胞,用电脉冲法可以成功转化[1].所以,电脉冲法目前已作为一种高效、简便和省时的方法,被用于Bt的遗传改良中.     

不同理化处理对苏云金芽胞杆菌质粒稳定性的影响

研究了用溴化乙锭诱变、升温和添加ＳＤＳ等３种处理对苏云金芽胞杆菌质粒稳定性的影响。结果表明,用４．５μｇ／ｍｌ的溴化乙锭处理野生菌株ＹＢＴ－１５２０和ＨＤ－５６７,对其携带ＩＣＰｓ基因的质粒的稳定性无影响。升温至４２℃时,野生菌株ＹＢＴ－１４６３和ＹＢＴ－９６０３的携带ＩＣＰｓ基因的质粒分别有０．４１％和０．３７％发生丢失,一些小质粒（〈２ｋｂ）也发生丢失。继续升温至４４℃和４６℃培养变株ＢＭＢ１     

小菜蛾对苏云金芽胞杆菌的抗药性研究

采用人工饲料感染法监测了我国不同地区小菜蛾田间种群对中国标准品Ｃｓ３ａｂ－１９９１的敏感性。结果表明：广东省深圳、东莞、广州的田间小菜蛾对苏云金芽胞杆菌产生了明显的抗性,最高抗性倍数分别为８．９,６．５,２．１。深圳的抗性小菜蛾种群在无毒条件下饲养,抗性会自然减退,经５代之后抗性消失。     

离心浓缩对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响

用正交试验法研究了苏云金芽胞杆菌发酵液浓缩过程中悬浮液固含量、离心转速和离心时间对苏云金芽胞杆菌芽胞保留率的影响.经方差分析,悬浮液固含量、离心转速和离心时间对芽胞保留率均有显著影响.随着离心转速和离心时间的增加,芽胞保留率呈下降趋势,而悬浮液固含量提高,则芽胞保留率升高.根据正交试验结果确定的使芽胞保留率保持较高水平的浓缩工艺条件是:离心转速3000r·min-1,离心时间5min,悬浮液固含量90g·L-1.     

苏云金芽胞杆菌CT—43的芽胞萌发及芽胞和伴胞晶体的形成

在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成．芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。     

苏云金芽胞杆菌剂型研究进展

苏云金芽胞杆菌是目前世界上应用最广的微生物杀虫剂,剂型加工与药效发挥有直接关系.综述了近十年来国内外剂型的研究进展.     

实时定量PCR测定苏云金芽胞杆菌质粒pBMB67的拷贝数

根据苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)YBT-1520的全基因组测序结果,在内生质粒p BMB67和染色体上分别选取单拷贝片段,利用实时荧光定量PCR法测得质粒p BMB67的拷贝数为21。此外,在内生质粒p BMB67的3个不同位点设计引物,分别以不同的靶片段作为实时荧光定量PCR的检测对象,测得p BMB67质粒的拷贝数分别为20.1、21.0和21.3,表明单拷贝靶片段的选择对测定质粒的拷贝数没有影响,进一步证明了实时荧光定量PCR测定质粒拷贝数的可行性。     

苏云金芽胞杆菌新菌株的研究

为筛选对昆虫有高力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株K9805和K9903,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种,形成典型的双金字塔型伴胞晶体,两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生命活性,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒。K9805含有cry IAa,cy IAb,cry IC,cry ID和cry I基因,K9903含有cry IAa,cry IAb,cry IAc,cry IE和cry Ⅱ基因。     

苏云金芽胞杆菌对淀粉塑料膜降解的促进作用

苏云金芽胞杆菌菌粉,玉米淀粉与线性低密度乙烯共混制得淀粉塑料,通过地理降解和摇床快速降解试验研究了淀粉塑料中淀粉的降解率。结果发现地理降解１２０ｄ后含５％菌粉和５０％淀粉的薄膜淀粉降解率达到８９．５２％,扫描电镜观察大部分淀粉颗粒破碎,出现许多小孔。不加菌粉的淀粉降解率只３５．４８％,表明添加的菌粉对淀粉降解有的促进作用。     

苏云金芽胞杆菌cryI基因探针的制备及质粒基因定位

将ｐＥＳＩ经ＥｃｏＲＩ酶解后回收纯化的含有苏云金芽胞杆菌ｃｒｙＩ基因高保守区的ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段重组到ｐＳＥＬＥＣＴ－１的ＥｃｏＲＩ位点，通过ＤＩＧ体外标记转录制备高灵敏度、背景清楚的ＲＮＡ探针，并利用该探针进行苏云金芽胞杆菌８０１０杀虫基因定位．结果表明，该菌株编码杀虫晶体蛋白的基因位于相对分子质量３７×１０６的质粒上     

一种有效消除苏云金芽孢杆菌内生质粒的方法

通过消除苏云金芽孢杆菌Ｂｔ的内生质粒,是筛选杀虫工程菌受体菌以及研究基因定位、结构与功能的有效途径之一。Ｂｔ野生菌株一般携有较多的内生质粒（２～１６个／细胞）,其中一些小质粒（＜１０ＭＤ）拷贝数较高,但稳定性不强;一些较大的质粒（＞３０ＭＤ）则拷贝数...     

过敏反应促进蛋白基因hrap转马铃薯的研究

利用根癌农杆菌介导法,将由甜椒中分离出的一种过敏反应促进蛋白hrap基因导入马铃薯品种"Russet Burbank"和"大西洋"中。转化再生植株经过含卡那霉素培养基的生根筛选、PCR检测、Southern杂交鉴定表明目的基因已导入马铃薯品种中,RT-PCR检测结果表明目的基因已整合到马铃薯DNA中并表达。通过对转基因植株进行活体接种抗病性检测,获得了抗晚疫病和抗青枯病的植株。     

基因枪介导的玉米NPR1基因的遗传转化(英文)

[目的]探索出玉米基因枪转化的条件。[方法]以玉米自交系7239的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,研究了轰击距离、气体压力、真空度和轰击次数对转化率的影响。[结果]转化时以金粉用量100μg/枪、发射点与靶细胞距离9cm、气体压力1350psi、真空度25In·Hg、轰击次数2次的组合最佳。经潮霉素(Hygromycin)筛选,获得了再生植株,PCR分析及Southern杂交结果表明NPR1基因已整合到玉米基因组中,平均转化率为1.76%。[结论]该研究为玉米优良抗病品种的培育奠定了基础。     

苏云金芽孢杆菌发酵液浓缩工艺研究

通过对2种不同亚种的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)发酵液进行浓缩工艺的研究,探索了不同温度对浓缩液有效成分的影响程度,比较了不同浓缩方式、不同干燥方式处理下有效成分的回收率。结果表明,真空薄膜浓缩工艺的回收率要高于离心浓缩工艺23%~29%。     

苏云金杆菌的液体发酵培养基优化研究

 运用正交试验L₂₇(3¹³)设计法对鳞翅目昆虫高毒效的苏云金杆菌33菌株进行培养基优化试验,在培养温度（30±1）℃,50 mL/500 mL三角瓶,摇床转速180 r/min条件下,苏云金杆菌33菌株的发酵最佳培养基是（%）:碳源0.5,氮源A 2.0,氮源B 0.15,氮源C 0.25,生长因子0.075,磷酸氢二钾0.25,碳酸钙0.05,硫酸镁0.035及pH 8.0.     

苏云金杆菌菌株Bti99-11的研究

通过物理、化学诱变筛选获得一株对蚊幼高毒的Bt菌株,编号为99-11。该菌具有苏云金杆菌以色列亚种(H14)的典型特征。生理生化特性和培养特征与已知的H14以色列亚种略有差异,血清型与以色列亚种完全一致,但对蚊动的毒力却明显高于对照菌株。     

藏茵陈微生物发酵转化的研究

[目的]探讨在体外可控条件下将新芒果苷转化为芒果苷,从而有效的提高芒果苷的含量。[方法]通过微生物发酵法实现对藏茵陈（祁连獐牙菜）中芒果苷前体物质新芒果苷的转化,根据新芒果苷糖苷键类型,结合微生物筛菌技术,建立有效的菌株筛选模型。利用建立的筛选模型筛选能够分泌特异性β-葡萄糖苷酶作用于新芒果苷糖苷键,并对筛选到的菌株进行分离、纯化和鉴定。[结果]通过对发酵前后样品中芒果苷含量的测定,得出芒果苷含量提升率为0.21%。[结论]该研究有利于合理开发藏茵陈中的芒果苷资源,并为其临床应用提供药学和药理学依据     

小菜蛾对苏云金杆菌抗性研究进展

从抗性水平、抗性遗传及稳定性、抗性机制、交互抗性、行为抗性和抗性管理策略等方面综述了小菜蛾对苏云金杆菌抗性的研究进展。     

苏云金芽孢杆菌研究回顾与展望

回顾了苏云金芽孢杆菌发展的历史,综述了资源、鉴定与分类、分子生物学包括cry基因、vip基因chi基因、aliA基因,生物信息学、生态学、安全性及产品化等问题,并对今后的发展提出一些意见。